⑴ 請問羧甲基纖維素和DEAE纖維素分離蛋白有什麼區別
羧甲基纖維素是弱陽離子交換填料，要求使用時的pH值要低於目的蛋白質等電點起碼0.5個pH值單位，為了達到較好的分離效果，實際使用時最好是低於1個以上pH值單位。在低pH值下，有的不耐酸的雜質蛋白質會變性，屆時離心除去，可首先去除一部分雜質蛋白質。
DEAE纖維素是弱陰離子交換層析填料，要求使用時的pH值要高於目的蛋白質等電點起碼0.5個pH值單位，為了達到較好的分離效果，實際使用時最好是高於1個以上pH值單位。大多數蛋白質的等電點在6.0左右，可以耐受8.0，所以依據pH提高使得某些雜質蛋白質變性的做法多數情況下不可行。
這兩種填料的工作pH值不同，但都可以用氯化鈉來洗脫。交換基團不同，分離效果也不同，可以先用一種來純化，得到初步純化的產物之後再用另一種來純化。因為有些蛋白質不能耐受酸，所以我建議先用羧甲基纖維素弱陰離子交換層析，再用DEAE纖維素弱陽離子交換層析，產物的純度比單用一種時更高。
在對蛋白質的破壞方面，弱交換填料比強交換填料好，有的蛋白質用強離子交換來純化，蛋白質結合再交換之後會損失很多活力，但是弱離子交換則損失的活力較少。但是弱離子交換的解析度比強離子交換差一些。如果純化得不好，又有強離子交換的，就試一下吧。lxj341401(站內聯系TA)一個是陽離子交換填料，一個是陰離子交換填料，用哪個跟蛋白值的等電點pI還有所用緩沖液的pH有關，pH>pI時帶負電荷，蛋白質能吸附到陰離子交換填料，相反的用陽離子交換。所以能不能代替看具體情況了。悅迷008(站內聯系TA)Originally posted by 冼亮澱粉酶 at 2011-07-15 06:00:21:
這兩個填料雖然都是離子交換用的，但一個是弱陰一個是弱陽，效果不同，沒有一個能代替另一個的說法。
⑵ 請問一下什麼叫做反相色譜常有的高效液相色譜是屬於哪個類型的
反相色譜中，固定相非極性，流動相極性。
典型的流動相一般是水或水系緩沖液與甲醇、乙腈或四氫呋喃的混合物。典型的固定相是用脂肪烴硅完化的硅膠鍵合相，其它用於反相色譜的基質有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基質。反相色譜的性能還受殘留的硅醇基的活性的影響。硅醇基與洗脫物的極性基團作用。因此，根據硅醇基的活性不同，填料顯示出不同的選擇性。而且，常能觀察到鹼性物質在硅醇基活性高的填料上產生拖尾峰。修飾硅醇基活性的一個辦法是封端，即用硅烷化試劑把硅醇基轉變成三甲基甲硅烷基基團。不過，即使是作了封端，基質表面的硅醇基密度還是比鍵合配基的密度大。硅醇基的活性也和硅膠的預處理（基質滅活）、硅膠純度有關。鹼性分析物的色譜分析推薦使用高純度硅膠基質、充分封端的鍵合相。未封端的填料在許多應用中有可以獲得不同選擇性的優點。
使用帶有離子電荷的固定相，使根據洗脫物電荷進行分離成為可能。對於硅膠基質的離子交換填料，離子基團通過標準的硅烷化技術鍵合到硅膠表面。對於聚合物基質的離子交換填料，離子交換基團分布於交聯聚合物的整體（through the matrix）。有四種離子交換填料：強/弱陽離子交換填料和強/弱離子交換填料。弱離子交換填料的特徵是電量與pH值有函數關系。以羧酸基為功能基的離子交換劑是弱陽離子交換劑的代表。弱陰離子交換劑由一級、二級、三級銨為功能基。大部分強離子交換劑的電荷與pH值無關。四級銨形成強陰離子交換劑，而磺酸基構成了強陽離子交換劑。所有這些離子交換基團都可以在聚合物基質上見到，主要用於分離生物大分子。除了弱陽離子基團外，其它功能基都可以鍵合到硅膠上。
反相色譜柱 C18、C8柱
⑶ 我要分離純化一種未知酶，一切未知，想用凝膠層析和離子交換層析分離，不知選用什麼填料合適有好的建議
建議用離子交換層析。凝膠過濾層析流速慢，上樣量低，而且分離效果一般，凝膠回過濾答一般用於層析的後期包括除鹽，去除降解片段之類的。
離子交換一般就用到DEAE，因為大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是鹼性蛋白，那就更好辦，上個CM柱，其他雜蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE試試吧。
⑷ 採用離子交換和反滲透工藝制備去離子水，一次填料多少大約多長時間更換一次填料
單位時間內的制水量和原水水質指標不知道，無法計算出填料的內數量。
需要清楚以下內容：容
1、原水水質指標；
2、處理工藝（反滲透還是陽床+陰床），填料是指陽樹脂、陰樹脂還是反滲透膜元件呢？
3、設備每天運行幾個小時？比如說設備每天運行4小時，3年更換一次陽樹脂，那麼設備每天運行8小時，則壽命就會遠遠小於3年。
⑸ 既有分子排阻作用，又有離子交換功能的填料
色譜分析法基本原理
色譜法，又稱層析法。根據其分離原理，有吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等方法。
⑹ 關於離子交換色譜中弱陽離子交換的填料，只要是羧甲基（CM）的填料都行
這個我知道的也不多，我們公司代理的就有，TOSOH的，他的Toyopearl弱陽離子交換樹脂，這個不錯，資料有些，你要的話可以發給你，留個郵箱啥的
⑺ 我要純化一種從細菌提取出來的未知粗酶，鹽析後上離子交換，等電點未知，我准備選用DEAE-sephroseFF 填料
鹽析後直接離子交換可能不太合適，最好先脫下鹽，再栗子交換。
DEAE是陰栗子交換，PH調到PI以上， 填料可以重復利用
⑻ 為什麼說弱離子交換填料解析度高
強、弱酸(鹼)交換器沒什麼區別,區別的是交換器體內的載體(離子交換樹脂),當然弱酸(鹼)型離子交換樹脂的使用主要特點是周期制水量大,減少了排廢量,自然節約了再生劑用量…。一傑水質
⑼ 色譜柱的填料有哪些陽離子交換柱
陽離子是指功能基團，有很多選擇，強陽弱陽；基質又有多種，主要可分為硅膠和聚合物，聚合物種類比較多，如PSDVB，聚甲基丙烯酸酯等。