A. 在強酸性陽離子交換柱上asp，his及leu等幾種氨基酸的洗脫順序如何為什麼
依次是：精氨酸Asp，賴氨酸Leu，組氨酸His
因為他們的鹼性，也就是攜帶正電荷的能力，或者說電離成陽離子的能力，由強到弱是這個順序。
B. 做ni柱蛋白純化時加樹脂0.5ml可以么
Ni離氫氧根離反應氫氧化鎳沉澱所Ni柱需要先用EDTA螯合掉鎳離再用氫氧化鈉沖洗避免沉澱物質堵塞柱
另外羅氏產 cOmplete His 直接用NaOH沖洗
C. His鎳柱標簽蛋白純化用什麼填料比較好
上海生工有NI-NTA樹脂賣，產品貨號
BSP033-2，可以用於His鎳柱標簽蛋白純化
D. PurKine™ 蛋白L樹脂的性能和載量如何
PurKine? 蛋白L樹脂是用於分離和純化抗體的通用性親和產品，樣品在上樣前建議離心或用 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾，減少雜質，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
Abbkine PurKine™ 蛋白L樹脂特點：
高載量—每毫升樹脂可以結合超過15 mg的人源免疫球蛋白IgG。
高性能—重組蛋白L在大腸桿菌中產生，其通過與輕κ鏈的相互作用而結合IgGs。蛋白L與蛋白A或G相比，有更廣泛的IgG結合范圍。單鏈可變片段（ScFv）和Fab片段也能結合蛋白質L。
節約成本—同一樹脂可重復使用五次以上，且性能不會降低。
使用靈活—提供多種形式產品，樹脂填料、預裝柱以及完整的試劑盒產品。
E. 有關IDA樹脂的問題
去除核酸的最簡單有效快速的辦法就是 使用核酸酶 「非限制性核酸酶內切酶」 可以迅速 有效 徹底。該產品有進口和國產的。目前國產的 Biolonase 比較便宜，應該適合您這方面的使用。
F. 蛋白質純化所用的柱子有幾種，分別有什麼作用
一、沉澱法
1、 鹽析
實驗原理：中和蛋白質表面電荷並破壞水化膜。
蛋白質易溶於水，因為其分子的-COOH -NH2和-OH都是親水基團，這些基團與極性水分子相互作用形成水化層，包圍於蛋白質分子周圍形成1~100 nm大小的親水膠體，從而削弱了蛋白質分子之間的作用力。當大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸銨的 SO42- 和NH4+）有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之"失水"，於是蛋白質膠粒凝結並沉澱析出。
2、等電點沉澱法：
實驗原理：利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。
在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負電荷相等)，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉澱，所以蛋白質在等電點時，其溶解度最小，最易形成沉澱物。
注意點：不同的蛋白質，具有不同的等電點。同一種蛋白質在不同條件下，等電點不同。
3、有機溶劑沉澱法
實驗原理：加入有機溶劑使水溶液的介電常數降低，因而增加了兩個相反電荷基團之間的吸引力，促進了蛋白質分子的聚集和沉澱。
有機溶劑引起蛋白質沉澱的另一種解釋認為與鹽析相似，有機溶劑與蛋白質爭奪水化水，致使蛋白質脫除水化膜，而易於聚集形成沉澱。
影響因素：(一)有機溶劑的選擇 (二)溫度的控制 (三)pH值 (四)離子強度
用此法析出的沉澱一般比鹽析法易過濾或離心沉降，分離後的蛋白質沉澱應立即用水或者緩沖液溶解，以達到降低有機溶劑的濃度的目的。此法在血液製品的制備過程中較多使用。
二、層析
1、離子交換柱層析
實驗原理：以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。是發展最早的層析技術之一，目前已成為蛋白質分離純化最常用的手段，是基於蛋白質電荷不同的分離技術。
離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂；而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
2、疏水相互作用層析
實驗原理：根據分子表面疏水性差別來分離蛋白質和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。
蛋白質和多肽等生物大分子的表面常常暴露著一些疏水性基團，我們把這些疏水性基團稱為疏水補丁，疏水補丁可以與疏水性層析介質發生疏水性相互作用而結合。不同的分子由於疏水性不同，它們與疏水性層析介質之間的疏水性作用力強弱不同，疏水作用層析就是依據這一原理分離純化蛋白質和多肽等生物大分子的。
3、親和層析
實驗原理：利用蛋白質能和某些專一分子可逆結合的特性，
當蛋白質溶液通過層析柱時，其中可與親和載體配基相互作用的受體被吸附劑結合，不被吸附的無關成分則可隨流出液通過柱體，從而將吸附蛋白與其他蛋白質分開。此法特異性強，收率高。
4、凝膠層析
實驗原理：根據分子大小分離蛋白混合物的最有效的方法之一。混合物隨流動相流經裝有凝膠固定相的層析柱時，其中各物質因分子大小的的不同而被分離的技術。
三、離心
1、速率區帶離心法
實驗原理根據分離的粒子在離心力作用下，因其在梯度液中沉降速度的不同，離心後具有不同沉降速度的粒子處於不同的密度梯度層內，形成幾條分開的樣品區帶，達到彼此分離的目的。
由於此法是一種不完全的沉降，沉降受物質本身大小的影響較大，一般是應用在物質大小相異而密度相同的情況。容量小，只能用於少量的制備。
2、差速離心法
實驗原理：利用樣品中各組分沉降系數的差異，對不同的微粒施以不同的離心力，經過多次離心，離心速度逐步加大，將不同的微粒依次沉降，從而實現離心分離。
四、膜分離
1、超濾法
是利用加壓膜分離技術，在一定的壓力下，使小分子溶質和溶劑穿過一定孔徑的特製薄膜，大分子溶質滯留，從而使大分子物質得到部分的純化。常和離子交換，凝膠過濾聯合使用。
2、透析
是利用小分子經過半透膜擴散到水( 或緩沖液) 的原理，將無機鹽等小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術，常和鹽析，鹽溶等方法聯合使用。
G. HRV3C是什麼意思
HRV3C蛋白酶（重組型）是經過基因工程改造後的重組蛋白酶，該酶特異性識別Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro八氨基酸序列，並高特異性、高活性剪切（剪切位點在Gln-Gly之間）。該酶（47KD）自身含有GST和His標簽，作用完畢後可通過GSH樹脂或Ni柱進行去除。
H. 蛋白純化填料有哪幾種其應用特點是什麼
PurKineHis-TagNi-IDAResin PurKine組氨酸標簽Ni【鎳】-IDA樹脂 Abbkine BMR20000
PurKineHis-TagCu-IDAResin PurKine組氨酸標簽Cu【銅】-IDA樹脂 Abbkine BMR20040
PurKineGST-TagGlutathioneResin PurKine谷胱甘肽S轉移酶標簽谷胱甘肽樹脂 Abbkine BMR20100
PurKineMBP-TagDextrinResin6FF PurKine麥芽糖結合蛋白標簽糊精樹脂（6%交聯） Abbkine BMR20206
PurKineBiotin-TagStreptavidinResin6FF PurKine生物素標簽鏈霉親和素樹脂（6%交聯） Abbkine BMR20306
PurKineBiotin- PurKine生物素標簽鏈霉親和素預裝柱（6%交聯） Abbkine BMC20306
PurKineStrepII-TagStrep-TactinResin4FF PurKineStrepII標簽Strep-Tactin樹脂（4%交聯） Abbkine BMR20400
PurKineProteinAResin PurKine蛋白A樹脂 Abbkine BMR20500
PurKineProteinGResin PurKine蛋白G樹脂 Abbkine BMR20600
PurKineProteinA/GResin4FF PurKine蛋白A/G樹脂（4%交聯） Abbkine BMR20704
PurKineProteinLResin PurKine蛋白L樹脂 Abbkine BMR20800
PurKineProteinATResin4FF PurKine蛋白AT樹脂（4%交聯） Abbkine BMR20904
PurKine抗體純化SulfoLink樹脂 Abbkine BMR21000
-ActivatedResin4FF PurKine抗體純化NHS-激活樹脂（4%交聯） Abbkine BMR21100
PurKineHeparinResin6FF PurKine肝素樹脂（6%交聯） Abbkine BMR21206
PurKineBenzamidineResin4FF PurKine苯甲脒樹脂（4%交聯） Abbkine BMR21306
PurKineEndotoxinRemovalResin PurKine內毒素清除樹脂 Abbkine BMR21400
I. His鎳柱標簽蛋白純化用什麼填料比較好
當然是用PALL的IMAC HyperCel金屬親和層析填料了。
動態載量高，而且是一次離子螯合操作，多次穩定的純化 。
價格也便宜，目前還在搞買一送一的活動。
J. 已知某肽基因全長120bp.擬通過DNA重組技術構建含6×his標簽的重組融合蛋白...
根據目的基因序列設計引物；PCR目的基因片段；跑膠，產物回收，純化；連接T載體（如PMD18t）；轉化宿主菌；篩選單克隆；測序；大量培養，提取重組質粒；酶切，電泳，回收，純化，連接表達載體（如pET系列），轉化；篩選單克隆；酶切鑒定，測序；誘導表達；裂解細胞；過Ni親和層析；注意：可溶蛋白和包涵體處理根據實驗目的是不一樣的。若對蛋白純度不滿意可以綜合使用其他分離技術，如離子交換樹脂等。如his標簽影響蛋白活性可切除，此外如果目標蛋白活性較低或失活，可以共表達一些其他蛋白（如分子伴侶等）。若蛋白活性需要糖基化則應該考慮真核表達系統。總之，沒有一種表達體系能夠完美表達每一種蛋白，根據目的蛋白的結構（是否有稀有密碼子、二硫鍵、糖基化、膜蛋白、復雜折疊、其他翻譯後修飾系統）來選擇合適的系統，才能達到理想的目的。