A. 測蛋白用的考馬斯亮藍怎麼配的
測蛋白用的考馬斯亮藍配方
稱取考馬氏亮藍G250（注意不是R250）50mg，
加95%乙醇25ml溶解，
加85%磷酸50ml，
H2O定容到500ml，
過濾去除少量未溶解物。
4度保存備用。
B. Western中考馬斯亮藍的作用是什麼
考馬斯亮藍G-250（Coomassie brilliant blue G-250）測定蛋白質含量屬於染料結合法的一種。考馬斯亮藍G-250在游離狀態下呈紅色，最大光吸收在488nm；當它與蛋白質結合後變為青色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用於蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立，試劑配製簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量，測定蛋白質濃度范圍為0～1 000μg／mL，是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由於與蛋白質的結合反應十分迅速，常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R250與蛋白質反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。
考馬斯亮藍法測定蛋白質含量流程
該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2％影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford濃染液的配製：將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50m1 95％乙醇，加入100ml濃磷酸，然後，用蒸餾水補充至200ml，此染液放4℃至少6個月保持穩定。
2．標准曲線蛋白質樣本的准備：盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標准品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標准。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之間繪制標准曲線。
3．將待測樣本溶於100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應與製作標准曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉澱，過濾除去。
5．每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液，作用5～30rain。染液與蛋白質結合後，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min．
6．根據標准曲線計算待測樣本的濃度。
C. 請問一下過慮是在配置好後還是稀釋完准備用的時候一般過濾的方法是什麼配置考馬斯亮藍的一般方法是什麼
可以用稀釋的臭氧水洗臉嗎？ 盡量不要用有化學成分的東西來洗臉 可以選用一些無添加的產品 或用天然的瓜果來進行臉部的修整 再配以適當的按摩 效果會
D. 考馬斯亮藍G-250配製時先加水後加磷酸有無影響
肯定有影響呀，而抄且你這個配方有問題，我們操作的是，100mg的考馬斯亮藍G250溶於50mL95%的乙醇，最好邊攪拌邊加入85%的磷酸100ML，繼續攪拌，溶液變為紅棕色，因為考馬斯亮藍的磷酸鹽溶液是棕紅色的。如果你們先加水再加磷酸，生成考馬斯亮藍的磷酸鹽的量會因為溶度被稀釋而大大減少，降上述操作得到的母液稀釋到1升，稀釋後的溶液一定要用雙層濾紙過濾，濾液呈棕色，且無懸浮物。一定要過濾，因為稀釋後會產生藍色的懸浮物，另外，你們工作液的濃度很重要，吸光度在0.2～0.8之間為宜，因為太高或太低都不符合BEER定律，我們可以做出0.999的標准曲線，祝你們好運
E. 考馬斯亮藍法測蛋白濃度，具體步驟有哪些，需要什麼試劑
該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2％影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford濃染液的配製：將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50m1 95％乙醇，加入100ml濃磷酸，然後，用蒸餾水補充至200ml，此染液放4℃至少6個月保持穩定。
2．標准曲線蛋白質樣本的准備：盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標准品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標准。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之間繪制標准曲線。
3．將待測樣本溶於100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應與製作標准曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉澱，過濾除去。
5．每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液，作用5～30rain。染液與蛋白質結合後，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min．
6．根據標准曲線計算待測樣本的濃度。
注意：
考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過范德華力結合，反應快速，並且穩定，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙
三、 考馬斯亮藍法測定蛋白質含量—標准曲線製作
（一）、試劑：
1、 考馬斯亮藍試劑：
考馬斯亮藍G—250 100mg溶於50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。最終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、 標准蛋白質溶液：
純的牛血清血蛋白，預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據其純度同0.15mol/LNaCl配製成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：
1、722S型分光光度計使用及原理（）。
2、移液管使用（）。
（三）、標准曲線製作：
試管編號 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml標准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考馬斯亮藍試劑 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
搖勻，1h內以1號管為空白對照,在595nm處比色
A595nm
1、
2、以A595nm為縱坐標，標准蛋白含量為橫坐標（六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐標軸上繪制標准曲線。
1）、利用標准曲線查出回歸方程。
2）、用公式計算回歸方程。
3）、或用origin作圖 ，測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相關系數應過0.999以上，至少2個9以上。
4）、繪圖時近兩使點在一條直線上，在直線上的點應該在直線兩側。
（四）、蛋白質含量的測定：
樣品即所測蛋白質含量樣品（含量應處理在所測范圍內），依照操作步驟1操作，測出樣品的A595nm，然後利用標准曲線或回歸方程求出樣品蛋白質含量。
一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間，所以上述樣品如果A595nm值太大，可以稀釋後再測A595nm值，然後再計算。
（五）、注意事項：
1、 玻璃儀器要洗滌干凈。
2、 取量要准確。
3、 玻璃儀器要乾燥，避免溫度變化。
4、 對照：用被測物質以外的物質作空白對照。
F. 考馬斯亮藍法以bsa為標准
用標准加入法,必過原點.
酸和水混合後,最好多靜置一會,要不測出來的數值會不穩定.
G. 考馬斯亮藍法注意事項！
我剛做過了，剛開始做也是這樣的，後來發現我用的考馬斯亮藍是R250，做標准曲線要用G250的，換過之後一次就測出來了，而且R有兩個9。
H. 考馬斯亮藍g250為什麼要過濾 配製考馬思量藍溶液時要用濾紙過濾,為什麼是不是和它的溶解度有關
不過濾會有凝塊,其濃度比溶液大,這樣給蛋白染色的時候會出現染色不均的現象
I. 關於考馬斯亮藍法的問題
可以都稀釋，形成的絡合物濃度降低就行，我認為正規操作是稀釋原液(或者同時稀釋染液，總之是分別稀釋，而不是加在一起後再稀釋)
J. 考馬斯亮藍g250為什麼要過濾
不過濾會有凝塊，其濃度比溶液大，這樣給蛋白染色的時候會出現染色不均的現象