凱氏蒸餾裝置時間

Ⅰ 有誰知道凱氏定氮的具體步驟，注意事項，！！

1、消化:精密稱取大豆樣品1.0g左右，放入乾燥的250 ml消化管中，加入0.4g CuSO4 7g K2SO4 10ml H2SO4先200'C炭化，待泡沫停止後提高溫度到450'C，加熱至液體沸騰，待瓶內液體呈藍綠色透明後，再繼續加熱0.5h。

冷卻後加入20ml水，移入100ml容量瓶中，用少量水洗滌消化管2~3次，洗液合並於容量瓶中定容。

2、蒸餾:連接凱氏定氮裝置，於水蒸氣發生瓶內裝水至2/3處，加甲基紅指示劑數滴及數ml硫酸，保持水呈酸性。加入數粒玻璃珠以防暴沸，調節火力加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。

3、向吸收瓶內加入20g/L硼酸溶液20ml及混合指示劑2滴，並使冷凝管下端插入液面以下，吸取10ml樣品消化稀釋液由進樣口進入反應室，並以10ml水洗滌進樣口使其流入反應室內，將400g/L NaOH溶液10ml倒入進樣口，立即夾緊螺旋夾，並加入少量蒸餾水，密封進樣口。

當蒸汽通入反應室時，准確計時，反應產生的氨氣通過冷凝管進入吸收瓶，蒸餾5min，移動吸收瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾Imin，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下吸收瓶。

停止加熱，使反應室內的液體進入汽水分離器，打開進樣口的螺旋夾，將汽水分離器的液體放出。再向反應室內加入蒸餾水，夾緊螺旋夾，再次進行加熱至水蒸汽放出，停止加熱，使反應室內的水進入汽水分離器，進行洗滌。

4、滴定:用0.025mol/L硫酸標准溶液滴定吸收液至灰色。

5、計算:X= 2cVX 14X5.71/m

X為樣品中蛋白質的含量，%；c為硫酸標准溶液的濃度，molL；V為樣品消化液消耗硫酸標准溶液的體積，ml；m為樣品的質量，g。

注意事項

(1) 樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

(2) 樣品放入定氮瓶內時，不要沾附頸上。萬-沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低。

(3) 消化時如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷後，慢慢加入30%過氧化氫(H2O2)2-3ml，促使氧化。

(4) 在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

(5)如硫酸缺少， 過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。

(6)加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作鹼性反應的指示劑。

(7)混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

(8) 氨是否完全蒸餾出來，可用PH試紙試餾出液是否為鹼性。

(1)凱氏蒸餾裝置時間擴展閱讀：

凱氏定氮法原理

凱氏定氮法首先將含氮有機物與濃硫酸共熱，經一系列的分解、碳化和氧化還原反應等復雜過程，最後有機氮轉變為無機氮硫酸銨，這一過程 稱為有機物的消化。

為了加速和完全有機物質的分解，縮短消化時間，在消化時通常加入硫酸鉀、硫酸銅、氧化汞、過氧化氫等試劑，加入硫酸鉀可以提高消化液的沸點而加快有機物分解，除硫酸鉀外，也可以加入硫酸鈉、氯化鉀等鹽類類提高沸點，但效果不如硫酸鉀。

硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有氧化汞、汞、硒粉、鉬酸鈉等，但考慮到效果、價格及環境污染等多種因素，應用最廣泛的是硫酸銅。

Ⅱ 發煙硝酸瓶裝有什麼方法密封有圖片嗎我公司生產的500m1發煙硝酸，瓶蓋總是裂開

飼料中粗蛋白測定方法（畜禽飼料與添加劑）
本標准參照採用ISO 5983―1979 《動物飼料——氮含量的測定和粗蛋白含量計算》。
1 主題內容與適用范圍 本標准規定了飼料中粗蛋白含量的測定方法。 本標准適用於配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2 引用標准 GB 601 化學試劑滴定分析（容量分析）用標准溶液的制備
3 原理 凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強鹼進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
4 試劑
4.1 硫酸（GB 625）：化學純，含量為98％，無氮。
4.2 混合催化劑：0.4g硫酸銅，5個結晶水（GB 665），6g硫酸鉀（HG 3—920）或硫酸鈉（HG 3—908），均為化學純，磨碎混勻。
4.3 氫氧化鈉（GB 629）：化學純，40％水溶液（m／V）。
4.4 硼酸（GB 628）：化學純，2％水溶液（m／V）。
4.5 混合指示劑：甲基紅（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚綠（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
4.6 鹽酸標准溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標定，按GB 601制備。
4.6.1 鹽酸標准溶液：c（HCl）＝0.1mol／L。8.3mL鹽酸（GB 622，分析純），注入 1000mL蒸餾水中。
4.6.2 鹽酸標准溶液：c（HCl）＝0.02mol／L。1.67mL鹽酸（GB 622，分析純），注入1000mL蒸餾水中。
4.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析純。
4.8 硫酸銨（GB 1396）：分析純，乾燥。
4.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1％甲基紅乙醇溶液7mL，4％氫氧化鈉水溶液0.5mL，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序用）。
5 儀器設備
5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽。
5.2 分樣篩：孔徑0.45mm（40目）。
5.3 分析天平：感量0.0001g。
5.4 消煮爐或電爐。
5.5 滴定管：酸式，10、25mL。
5.6 凱氏燒瓶：250mL。
5.7 凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式。
5.8 錐形瓶：150、250mL。
5.9 容量瓶：100mL。
5.10 消煮管：250mL。
5.11 定氮儀：以凱氏原理製造的各類型半自動，全自動蛋白質測定儀。6 試樣的選取和制備 選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎後全部通過40目篩，裝於密封容器中，防止試樣成分的變化。
7 分析步驟
7.1 仲裁法
7.1.1 試樣的消煮
稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，放入凱氏燒瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化劑（4.2），與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶（5.6）置於電爐（5.4）上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失後，再加強火力（360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然後再繼續加熱，至少2h。
7.1.2 氨的蒸餾（蒸餾步驟的檢驗見附錄A）
7.1.2.1 常量蒸餾法 將試樣消煮液（7.1.1）冷卻，加入60～100mL蒸餾水，搖勻，冷卻。將蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端浸入裝有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示劑（4.5）的錐形瓶內。然後小心地向凱氏燒瓶（5.6）中加入50mL氫氧化鈉溶液（4.3），輕輕搖動凱氏燒瓶（5.6），使溶液混勻後再加熱蒸餾，直至流出液體積為100mL。降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續蒸餾1～2min，並用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。
7.1.2.2 半微量蒸餾法 將試樣消煮液（7.1.1）冷卻，加入20mL蒸餾水，轉入100mL容量瓶中，冷卻後用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示劑（4.5）的錐形瓶（5.8）內。蒸汽發生器 （5.7）的水中應加入甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。准確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置（5.7）的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶（5.8）使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。 註：7.1.2.1和7.1.2.2蒸餾法測定結果相近，可任選一種。
7.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗 精確稱取0.2g硫酸銨（4.8），代替試樣，按7.1.2或7.2.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應檢查加鹼、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
7.1.3 滴定 用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸餾後的吸收液立即用0.1mol／L（ 4. 6. 1）或0 .02mol／L（4.6.2）鹽酸標 准溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
7.2 推薦法
7.2.1 試樣的消煮 稱取0.5～1g試樣（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（儀器自備）或6.4g混合催化劑（4.2），12mL硫酸（4.1），於420℃下在消煮爐上 消化1h。取出放涼後加入30mL蒸餾水。7.2.2 氨的蒸餾 採用全自動定氮儀（5.11）時，按儀器本身常量程序進行測定。 採用半自動定氮儀（5.11）時，將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上，以25mL硼酸（4.4）為吸收液，加入2滴混合指示劑（4.5），蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內，然後向消煮管中加入50mL氫氧化鈉溶液（4.3）進行蒸餾。蒸餾時間以吸收液體積達到100mL時為宜。降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內。7.2.3 滴定 用0.1mol／L的標准鹽酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
8 空白測定 稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第7章進行空白測定，消耗0.1mol／L鹽酸標准溶液（4.6.1）的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol／L鹽酸標准溶液（4.6.2）體積不得超過0.3mL。
9 分析結果的表述
9.1 計算見下式：
粗蛋白質（％）＝（V2－V1）c×0.0140×6.25／（m×V′／V）
式中： V2—— 滴定試樣時所需標准酸溶液體積，mL；
V1—— 滴定空白時所需標准酸溶液體積，mL；
C—— 鹽酸標准溶液濃度，mol／L；
m—— 試樣質量，g；
V—— 試樣分解液總體積，mL；
V′—— 試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140—— 與1.00mL鹽酸標准溶液〔c（HCl）＝1.000mol／L〕相當的、以克表示的氮的質量。 6.25—— 氮換算成蛋白質的平均系數。
9.2 重復性 每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。 當粗蛋白質含量在25％以上時，允許相對偏差為1％。 當粗蛋白含量在10％～25％之間時，允許相對偏差為2％。 當粗蛋白質含量在10％以下時，允許相對偏差為3％。

我有個現成的 其他的我現在沒時間 你自己找吧
http://www.china-animal.com.cn/standard/article/2006-10-20/2253-1.htm
牧草我沒做過 如果粗蛋白的含量比較低的話建議取樣加倍

補充一下
．飼料中Ca的測定方法 GB/T 6436-92

1. 簡述：本標准適應於配合飼料，濃縮料，預混合料和單一飼料。
2. 原理：將試樣中有機物破壞，使鈣溶解制備成溶液，用三乙醇胺、乙二胺、和澱粉溶液消除干擾離子的影響，在鹼性溶液中以鈣黃綠素為指示劑，用EDTA標准溶液絡合滴定鈣，可快速測定鈣的含量。
3. 試劑：
1) 鹽酸羥胺（AR）；
2) 鹽酸 1+1（V1+V2）；
3) 氫氧化鉀溶液 200g/L；
4) 三乙醇胺水溶液1+1( V1+V2)；
5) 乙二胺水溶液1+1（V1+V2）；
6) 澱粉溶液；10 g/L （1%） 稱取1 g可溶性澱粉加入200ml燒杯中，加5ml水潤濕。加95ml沸水攪勻，煮沸，冷卻備用（現配現用）；
7) 孔雀綠水溶液：1 g/L；
8) 鈣黃綠素-甲基百里香酚藍指示劑：0.1g鈣黃綠素與0.10g甲基麝香草酚藍與0.3克百里香酚藍，5g氯化鉀研細混勻，貯存於磨口瓶中備用；
9) EDTA 標准滴定溶液 (對鈣的滴定度為0.4 g/ml)。
4.試樣制備:
方法: 稱取試樣適量(預混料1 g，濃縮料，全價料，魚粉等 2-4 g 於坩堝中)，精密稱定，在電爐上小心炭化，再加入高溫爐於550oC下灼燒3h（或測定粗灰分連續進行），在盛灰坩堝中加入鹽酸溶液（1+1）10ml，小心煮沸，冷卻至室溫，將此溶液過濾（脫脂棉）轉入容量瓶中（100ml），用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
5．測定
准確移取試樣分解液5 ml，加水50 ml，加澱粉溶液10 ml，三乙醇胺2 ml， 乙二胺1 ml， 1滴孔雀石綠，滴加氫氧化鉀溶液10 ml，加0.1g鹽酸羥胺(每滴一種試劑都需搖勻)，加鈣黃綠素少許，在黑色背景下立即用EDTA標准滴定溶液，滴定至綠色消失呈現紫紅色為滴定終點.

6． 計算
鈣的含量：X（%）=
式中： T--------EDTA標准滴定溶液對鈣的滴定度，mg/ml
V0-------試樣分解液的總體積，ml
V1-------分取試樣分解液的體積，ml
V2--------實際消耗EDTA標准滴定溶液的體積，ml
m---------試樣的質量，g
所得結果應表示至二位小數

7． 重復性：
每一試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。
含鈣量在5%以上，允許相對偏差3%；
含鈣量5%--1%時，允許相對偏差5%；
含鈣量1%以下，允許相對偏差10%。

四．飼料中總磷量的測定方法。分光 光度法 CB/T 6437—92
1． 簡述：本標准適應於配合飼料、濃縮飼料、預混合飼料和單一飼料。
測定范圍磷含量 0——20mg/ml。
2． 方法原理：
將試樣中的有機物破壞，使磷游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的(NH )3PO4NH4VO316MoO3，，在波長420mm下進行比色測定。
3． 試劑：
1) 鹽酸（1+1水溶液） 硝酸 高氯酸
2) 釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g，加硝酸250ml，另稱取鉬酸銨25g，加水400ml加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容成1000ml。避光保存，若生成沉澱，則不能繼續使用。（註：鉬酸銨倒入偏釩酸銨中）。
3) 磷標准液：將磷酸二氫鉀在105oC乾燥1h，在乾燥器中冷卻後稱取0.2195g溶解於水，定量轉入1000ml容量瓶中，加入硝酸3ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即為50mg/ml的磷標准液。
4. 試樣的分解
干法: 與Ca測定試樣的制備方法一致，在實際中，Ca，P 使用同一分解液.
5. 標准曲線的制備：
准確移取磷酸標准液，取0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0ml於50ml容量瓶中，各加釩鉬酸銨顯色劑10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，常溫下放置10min以上，以0ml溶液為參比，用10mm比色池，在420nm波長下，用分光光度計測定各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標准曲線。
6．試樣的測定：
准確移取試樣分解液0.5ml—10ml（含磷量50—750mg）（實際中取0.5ml）於50ml容量瓶中，加入釩鉬酸胺顯色劑10ml，按5的方法顯色和比色測定，測得試樣分解液的吸光度，用標准曲線查得試樣分解液的含磷量。
7． 計算：
樣品中總磷含量（P%）=
式中： m---------試樣的質量，g；
m1----------由標准曲線查得試樣分解液磷含量，mg；
V1---------移取試樣分解液的體積，ml；
V-------試樣分解液的總體積，ml；
所得到的結果應精確到0.01%
8． 允許差
每個試樣稱取兩個平行樣品進行測定，以其算術平均值為測定結果，其間分析結果的相對偏差不大於下表所列相對允許偏差：
磷含量 % 允許偏差 %
＞0.5 10
≥0.5 3

五、飼料中粗灰分的測定方法
1、 簡述：本標准適用於配合飼料、濃縮飼料及各種單一飼料中粗灰分的測定。
2、 方法原理：
試料在550℃灼燒後所得殘渣，用質量百分率來表示。殘渣中主要是氧化物、鹽類等礦物質，也包括混入飼料中的砂石、土等，故稱粗灰分。
3、 測定步驟：
將干凈坩堝放入高溫爐，在550±20℃下灼燒30min，取出，在空氣中冷卻約1min，放入乾燥器冷卻30min，稱其質量。再重復灼燒冷卻至恆重。
在已恆重的坩堝中稱取2g試料，精密稱定，在電爐上小心炭化，在炭化過程中，應將試料在較低溫度狀態加熱灼燒至無煙，爾後升溫灼燒至樣品無炭粒，再放入高溫爐，於550±20℃下灼燒3h。取出，在空氣中冷卻約1min，放入乾燥器冷卻至30min，稱取質量。再同樣灼燒1h，至恆重。
4、 計算結果：

式中： m0——為恆重空坩堝質量，（g）；
m1——為坩堝加試料後質量，（g）；
m2——為灰化後坩堝加灰分的質量，（g）；
所得結果應表示至0.01%
5、 允許誤差：
粗灰分含量在5%以上，允許相對偏差為1%；
灰分含量在5%以下，允許相對偏差為5%。

六、飼料中水溶性氯化物的測定方法 快速測定法（GB/T 6439-92）
1． 簡述：本標准用於測定配合飼料和單一飼料中水溶性氯化物的測定，以及原料中水溶性氯化物的測定。
2． 方法原理：使試樣中氯離子溶解於水中，用硝酸銀標准滴定液使氯化物形成氯化銀沉澱，過量的硝酸銀使鉻酸鉀指示液變色。
3． 試劑：
1) 10%的鉻酸鉀指示劑
2) 0.1mol/L硝酸銀標准滴定液（
4． 測定方法：
稱取5-10g樣品，准確至0.001g，准確加蒸餾水100ml，攪拌15min，放置至澄清（或過濾），准確移取上清液25ml，10%鉻酸鉀指示劑1ml，用硝酸銀標准溶液滴定，呈現出磚紅色，且1min不褪色為終點。
5． 計算：

式中：V0——試樣稀釋的總體積，ml；
V2——滴定用硝酸銀溶液的體積，ml；
V1——移取試液的體積，ml；
C——硝酸銀溶液的麾爾濃度，mol/L；
m——稱取試樣的重量，g；
實際中：V0=100ml；V1=25ml；

氯含量在3%以下（含3%），允許絕對誤差0.05；氯含量在3%以上，允許相對偏差3%。

七、飼料中粗蛋白的測定方法 GB/T 6432—1994
1、 簡述：本標准適用於配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2、 原理：凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮量轉化成硫酸銨。加入強鹼進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
3、 試劑：
1) 硫酸：化學純、含量為98%，無氮；
2) 混合催化劑：0.4g硫酸銅，6g硫酸鉀或硫酸鈉，磨碎混合均勻；
3) 氫氧化鈉：40%水溶液（m/v）；
4) 硼酸：2%水溶液；
5) 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
6) 鹽酸標准溶液：0.1mol/L（8.3ml鹽酸注入1000ml蒸餾水中）。
標定：
4、 試樣的消煮：
稱取試樣0.5g，精密稱定，放入凱氏燒瓶中，加入3.4g混合催化劑，再加和10ml濃硫酸和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置於電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失後，再加強火力直至呈透明的藍綠色，然後再繼續加熱，共加熱3小時。
5、 常量蒸餾法
將試樣消煮液冷卻，加入60~100ml蒸餾水，搖勻，冷水冷卻。將蒸餾裝置的冷凝管來端浸入裝有50ml硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶內。然後小心地向凱氏燒瓶中加入50ml氫氧化鈉溶液，輕輕搖動凱氏並行瓶，使溶液混勻後再加熱蒸餾，直至流出液體積為100ml。降下錐形瓶使冷凝管末端離開液面，繼續蒸餾1~2min，並用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。
6、 蒸餾步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按上述步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.1g±0.2%，否則應檢查加鹼，蒸餾和滴定各步驟是否正確。
7、 滴定
用0.1mol\L的標准鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍色變成灰紅色為終點。
8、 計算：

式中： V2——滴定試樣時所需用的標准鹽酸溶液的體積，ml；
V1——滴定空白時所需標准鹽酸溶液的體積，ml；
C——鹽酸的標准溶液的濃度，mol/L；
m——稱取試樣的質量，g。
0.0140——每毫克當量氮的克數；
6.25——氮換算成蛋白質的平均系數。
9、 重復性
每個試樣的平行樣進行測定，以其算術平均什為結果。
當粗蛋白質在25%以上時，允許相對偏差為1%；
當粗蛋白質在10%~25%之間時，允許相對偏差為2%；
當粗蛋白質在10%以下時，允許相對偏差為3%。

真蛋白的檢測

1）稱1克樣品於200ml燒杯中
2）加50ml水煮沸
3）加10%硫酸銅20ml
4）加2.5%氫氧化鈉20ml邊加邊攪拌
5）放置1小時後過濾
6）用70度的熱水反復洗殘渣,直到濾液無硫酸根離子為止
7）放入烘箱65~75度,乾燥兩個小時
8）其餘和做粗蛋白一樣(硫酸過量一點)

八、飼料中粗脂肪測定方法。GB/T 6433—1994
1、 簡述：本標准適用於各種單一、混合飼料和預混料中粗脂肪的測定方法。
2、 方法原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取試樣，稱提取物的重量，除脂肪外還有有機酸，磷脂、脂溶性維生素，葉綠素等，因而測定結果稱粗脂肪或乙醚提取物。
3、 試劑與儀器
2) 無水乙醚（AR）
3) 索氏脂肪提取器（帶球形冷凝管）：100或150ml。
4) 索氏脂肪提取儀。
4、 使用索氏脂肪提取器測定：
索氏提取器應乾燥無水。抽提瓶（內有沸石數粒）在105±2℃烘箱中烘乾60min，乾燥器中冷卻30min，稱重，再烘乾30min，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小於0.0008g為恆重。
稱取試樣1---5g，於濾紙筒中，或用濾紙包好，放入105℃烘箱中，烘乾120min（或稱測水分後的干試樣，折算成風干樣重），濾紙筒應高於提取器虹吸管的高度，濾紙包長度應以可全部浸泡於乙醚中為准。將濾紙筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加無水乙醚60----100ml，在60---75℃的水浴（用蒸餾水）上加熱，使乙醚迴流，控制乙醚迴流次數為每小時約10次，共迴流約50次（含油高的試樣約70次）或檢查抽提管流出的乙醚揮發後不留下油跡為抽提終點。（將試樣在無水乙醚中浸泡三小時，效果更佳）
取出試樣，仍用原提取器回收乙醚直到抽提瓶全部收完，取下抽提瓶，在水浴上蒸去殘余乙醚，擦凈瓶外壁。將抽提瓶放入105+-2℃烘箱中烘乾120min，乾燥器中冷卻30min稱重，再烘乾30min，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小於0.001g這恆重。
5、 計算：
粗脂肪（%）=
式中：m-----風干試樣重量，g
m1-----已恆重的抽提瓶重量，g；
m2----已恆重的盛有脂肪的抽提瓶重量，g.
6、 重復性
每個試樣取兩平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。
粗脂肪含量在10%以上（含10%）允許相對偏差為3%。
粗脂肪含量在10%以下時，允許相對偏差為5%。

九、飼料中粗纖維的測定
1 適用范圍
本標准規定了飼料中粗纖維含量的測定方法。適用於各種混合飼料、配合飼料、濃縮飼料及單一飼料。
2、 原理
用濃度准確的酸和鹼，在特定條件下消煮樣品，再用乙醇除去可溶物，經高溫灼燒扣除礦物質的量，所餘量為粗纖維，它不是一個確切的化學實體，只是在公認強制規定的條件下測出的概略成分，其中以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質素。
3、 試劑
3.1 硫酸溶液0.128±0.005mol/L：
3.2 氫氧化鈉溶液，0.313±0.005mol/L：
3.3 酸洗石棉、95％乙醇、乙醚、正辛醇（防泡劑）。
4.4消煮器：有冷凝球的600mL高型燒杯或有冷凝管的錐形瓶。
4.5抽濾裝置：抽真空裝置，吸濾瓶和漏斗。（濾器使用200目不銹鋼網或尼龍濾布）
4. 6古氏坩堝：30mL，預先加入酸洗石棉懸浮液30mL（內含酸洗石棉0.2～0.3g）再抽干，以石棉厚度均勻，不透光為宜。上下鋪兩層玻璃纖維有助於過濾。
7、 分析步驟
7.1 仲裁法
稱取1～2g試樣，准確至0.0002g，用乙醚脫脂（含脂肪大於10％必須脫脂，含脂肪不大於10％，可不脫脂），放入消煮器（或大的三角燒瓶中），加濃度准確且已沸騰的硫酸溶液（3.1）200mL和1滴正辛醇，立即加熱，應使其在2min內沸騰，調整加熱器，使溶液保持微沸，且連續微沸30min，注意保持硫酸濃度不變。試樣不應離開溶液沾到瓶壁上。隨後抽濾，殘渣用沸蒸餾水洗至中性後抽干。用濃度准確且已沸騰的氫氧化鈉溶液（3.2）將殘渣轉移至原容器中並加至200mL，同樣准確微沸30min，立即在鋪有石棉的古氏坩堝上過濾，先用25mL硫酸溶液洗滌，用沸蒸餾水洗至中性，再用15mL乙醇洗滌，抽干。將坩堝放入烘箱，於130±2℃下烘乾2h，取出後在乾燥器中冷卻至室溫，稱重，再於550±25℃高溫爐中灼燒30min，取出後於乾燥器中冷卻至室溫後稱重。
7.2 推薦法
稱1～2g試樣（脫脂步驟同手工方法）於G2玻璃沙漏斗中，用坩堝夾將漏斗插入熱萃取器；從頂部加入預先煮沸的硫酸溶液200mL和兩滴正辛醇，將加熱旋扭開到最大位置，待溶液沸騰後，將旋扭調到合適位置，使溶液保持微沸30min，抽濾，用沸蒸餾水洗至中性，加入預先煮沸的氫氧化鈉溶液200mL，同樣准確微沸30min，抽濾，用沸蒸餾水洗至中性，將坩堝轉移至冷萃取器，加入25mL95％乙醇，抽干，將漏斗轉移到烘箱，於130±2℃下烘乾2h，取出後在乾燥器中冷卻至室溫，稱重。再放入500±25℃高溫爐中灼燒1h，乾燥器中冷卻至室溫後稱重。型號不同的儀器具體操作步驟見該儀器使用說明書。
8 測定結果的計算
8.1 計算公式
粗纖維（％）＝（m1－m2）/m
式中：m1——130℃烘乾後坩堝及試樣殘渣重，g；
m2——550℃（或500℃）灼燒後坩堝及試樣殘渣重，g；
m—— 試樣（未脫脂）質量，g。
8.2 重復性
每個試樣取兩平行樣進行測定，以算術平均值為結果。
粗纖維含量在10％以下，絕對值相差0.4。粗纖維含量在10％以上，相對偏差為4％。

Ⅲ 做一套凱氏定氮法需要多少時間

凱氏定氮法需要多少時間,主要是兩個時間，第一個是消化時間，第二個是蒸餾時間，最後的滴定時間不長。一般需要4個小時，難消化的樣品需要一天。

Ⅳ 凱氏定氮儀的使用步驟

蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內進行的。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成。
1、儀器的洗滌
儀器安裝前，各部件需經一般方法洗滌干凈，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min，水洗、水煮10min，再水洗數次，然後安裝並固定在一隻鐵架台上。儀器使用前，微量全部管道都須經水蒸氣洗滌，以除去管道內可能殘留的氨，正在使用的儀器，每次測樣前，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器，重復蒸氣洗滌，不得少於三次，並檢查儀器是否正常。仔細檢查各個連接處，保證不漏氣。 首先在蒸氣發生器中加約2/3體積蒸餾水，加入數滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，並放入少許沸石（或毛細管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經插管流入反應室，但玻杯內的水不要放光，塞上棒狀玻塞，保持水封，防止漏氣。蒸氣發生後，立即關閉廢液排放管上的開關，使蒸氣只能進入反應室，導致反應室內的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應室上埠通過定氮球進入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水。從定氮球發燙開始計時，連續蒸煮5min，然後移開煤氣燈。沖洗完畢，夾緊蒸氣發生器與收集器之間的連接橡膠管，由於氣體冷卻壓力降低，反應室內廢液自動抽到反應室外殼中，打開廢液排出口夾子放出廢液。如此清洗2～3次，再在冷凝管下換放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒在溶液中，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內的溶液是否變色。如不變色，表示蒸餾裝置內部已洗干凈。移去錐形瓶，再蒸餾1～2min，用蒸餾水沖洗冷凝器下口，關閉煤氣燈，儀器即可供測樣品使用。
2、無機氮標准樣品的蒸餾吸收
由於定氮操作繁瑣，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術，初學者宜先用無機氮標准樣品進行反復練習，再進行有機氮未知樣品的測定。常用巳知濃度的標准硫酸銨測試三次。 取潔凈的100mL錐形瓶五隻，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基藍-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3～4滴，蓋好瓶口待用。取其中一隻錐形瓶承接在冷凝管下端，並使冷凝管的出口浸沒在溶液中。注意：在此操作之前必須先打開收集器活塞，以免錐形瓶內液體倒吸。准確吸取2mL硫酸銨標准液加到玻杯中，小心提起棒狀玻塞使硫酸銨溶液慢慢流入蒸餾瓶中，用少量蒸餾水沖洗小玻杯3次，一並放人蒸餾瓶中。然後用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液，使鹼液慢慢流入蒸餾瓶中，在鹼液尚未完全流入時，將棒狀玻塞蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸餾水，再慢慢打開玻塞，使一半水流入蒸餾瓶，一半留在小玻杯中作水封。關閉收集器活塞，加熱蒸氣發生器，進行蒸餾。錐形瓶中的硼酸-指示劑混合液由於吸收了氨，由紫紅色變成綠色。自變色時起，再蒸餾3～5min，移動錐形瓶使瓶內液面離開冷凝管下口約lcm，並用少量蒸餾水沖洗冷凝管下口，再繼續蒸餾1min，移開錐形瓶，蓋好，准備滴定。 在一次蒸餾完畢後，移去煤氣燈，夾緊蒸氣發生器與收集器間的橡膠管，排除反應完畢的廢液，用水沖洗小玻杯幾次，並將廢液排除。如此反復沖洗干凈後，即可進行下一個樣品的蒸餾。按以上方法用標准硫酸銨再做兩次。另取2mL蒸餾水代替標准硫酸銨進行空白測定二次。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定。
3、未知樣品及空白的蒸餾吸收
將消化好的蛋白樣品三支，空白對照液三支，依次作蒸餾吸收。 加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到反應室中，再用熱蒸餾水洗滌小玻杯3次，每次用水量約3mL，洗滌液一並倒入反應室內。其餘操作按標准硫酸銨的蒸餾進行。 由於消化液內硫酸鉀濃度高而呈粘稠狀，不易從凱氏燒瓶內倒出，必須加入熱蒸餾水5 mL稀釋之，如果有結晶析出，必須微熱溶解，趁熱加入玻杯，使其流入反應室。此外，還應當注意趁儀器洗滌尚未完全冷卻時立即加入樣品或空白對照液，否則消化液通過冷卻的管道容易析出結晶，造成堵塞。 樣品和空白蒸餾完畢後，一起進行滴定。打開接受瓶蓋，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的標准鹽酸溶液進行滴定。待滴至瓶內溶液呈暗灰色時，用蒸餾水將錐形瓶內壁四周淋洗一次。若振搖後復現綠色，應再小心滴入標准鹽酸溶液半滴，振搖觀察瓶內溶液顏色變化，暗灰色在一二分鍾內不變，當視為到達滴定終點。若呈粉紅色，表明已超越滴定終點，可在已滴定耗用的標准鹽酸溶液用量中減去0.02mL，每組樣品的定氮終點顏色必須完全一致。空白對照液接受瓶內的溶液顏色不變或略有變化尚未出現綠色，可以不滴定。記錄每次滴定耗用標准鹽酸溶液毫升數，供計算用。

Ⅳ 凱氏定氮法測定蛋白質含量的基本原理

樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳、氫被氧化為CO2和H2O逸出回，而樣品中的答有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨，硫酸銨用NaOH中和生成NH3`H2O，加熱又分解為氨，用硼酸吸收，吸收氨後的硼酸再以標准鹽酸或硫酸溶液滴定，根據標准酸消耗量計算蛋白質的含量。

Ⅵ 請問半微量凱式定氮法的詳細步驟，謝謝！！順便問下全量半微量和微量的區別是什麼呢

(一) 方法原理

樣品與硫酸一同加熱消化, 分解有機質, 釋放出的NH3 與硫酸結合成硫酸銨留在溶液中。在定氮消化瓶中,用氫氧化鈉中和硫酸銨生成氫氧化銨,加熱又分解NH3 ,用硼酸吸收, 用標定過的鹽酸或硫酸滴定, 從而計算出總氮量, 換算為蛋白質量。
(二) 儀器、設備

1. 儀器
分析天平: 感量0.0001克；實驗用粉碎機；半微量凱氏蒸餾裝置；半微量滴定管, 容積10毫升；硬質凱氏燒瓶: 容積25毫升, 50毫升；錐形瓶: 容積150毫升；電爐: 600瓦。

2. 試劑
(1) 鹽酸: 分析純, 0.02mol/L, 0.05mol/L標准溶液(鄰苯二甲酸氫鉀法標定)；
(2) 氫氧化鈉: 工業用或化學純, 40%溶液(W/V)；
(3) 硼酸: 分析純, 2%溶液(W/V)；
(4) 硼酸混合指示劑: 溴甲酚綠0.1克, 甲基紅0.1克分別溶於95%乙醇中,混合後稀至100毫升, 將混合指示劑與2%硼酸溶液按 1:100比例混合, 用稀酸或稀鹼調節PH值為4.5, 使呈灰紫色, 此溶液放置時間不宜過長, 需在1個月之內使用；
(5) 加速劑: 五水合硫酸銅(分析純)10克, 硫酸鉀(分析純)100克在研缽中研磨, 仔細混勻, 過40目篩；
(6) 濃硫酸: 比重1.84, 無氮；雙氧水: 分析純,30%；蔗糖: 分析純；
(7) 雙氧水硫酸混合液(簡稱混液): 雙氧水、硫酸、水的比例為3:2:1, 即在100毫升蒸餾水中,慢慢加入200毫升濃硫酸, 待冷卻後, 將其加入300毫升30%雙氧水, 混勻, 此混液可一次配製500～1000毫升貯藏於試劑瓶中備用, 夏天最好放入冰箱或陰涼處貯藏, 室溫(20℃)上下時不必冷藏, 貯藏進間不超過1個月 。

(三) 操作步驟

1. 樣品的選取和制備 選取有代表性的種子(帶殼種子需脫殼)挑揀干凈, 按四分法縮減取樣, 取樣量不得少於20克。將種子放於60～65℃烘箱中乾燥8小時以上, 用粉碎機磨碎, 95%通過40目篩, 裝入磨口瓶備用。
2. 稱樣 稱取0.1克試樣兩份(含氮1～7毫克), 精確至0.0001克, 同時測定試樣的水分含量。
3. 消煮1 將試樣置開25毫升凱氏瓶中, 加入加速劑粉末。除水稻為1克外, 其它均為2克。然後加3毫升硫酸, 輕輕搖動凱氏瓶, 使試樣被硫酸濕潤, 將凱氏瓶傾斜置於電爐上加熱, 開始小火, 待泡沫停止後加大火力, 保持凱氏瓶中的液體連續沸騰, 沸酸在瓶頸中部冷凝迴流。待溶液消煮到無微小的碳粒並呈透明的藍綠色時, 谷類繼續消煮30分鍾,豆類繼續消煮60分鍾。
4. 消煮2 將試樣置於50毫升凱氏瓶中, 加入0.5克加速劑和3毫升混液,在凱氏瓶上放一曲頸小漏斗, 傾斜在電爐上加熱, 開始小火(用調壓器將電壓控制在175伏左右), 保持凱氏瓶中液體呈微沸狀態。5分鍾後加大火力(將電壓控制在200伏左右)。保持凱氏瓶中液體連續沸騰, 消煮總時間, 水稻、高粱為30分鍾, 其它均為45分鍾。
注: 消煮中列入兩種消煮條件, 經與國際穀物化學協會標准法(ICC)比較, t值測驗均不顯著, 准確度與精密度也基本一致,在具體工作中可根據實際情況取其一種。
5. 蒸餾 消煮液稍冷卻後加少量蒸餾水, 輕輕搖勻。移入半微量蒸餾裝置的反應室中,用適量蒸餾水沖洗凱氏瓶4～5次。蒸餾時將冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸指示劑混合液的錐形瓶中, 向反應室中加入40%氫氧化鈉溶液15毫升(如採用消煮2的條件, 加10毫升即可)。然後通氣蒸餾, 當餾出液體積約達50毫升時,降下錐形瓶。使冷凝管末端離開液面, 繼續蒸餾1～2分鍾, 用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶中。
6. 滴定 谷類以0.02mol/L, 豆類以0.05mol/L標准鹽酸或硫酸滴定至錐形瓶中的溶液由藍綠色變成灰紫色為終點。空白用0.1克蔗糖代替樣品作空白測定。消耗標准酸溶液的體積不得超過0.3毫升。

(四) 結果計算

式中:
V2 滴定試樣時消耗標准酸的體積(毫升)
V1 滴定空白時消耗標准酸的體積(毫升)
N標准酸溶液的濃度(mol/L)
K 氮換算成粗蛋白質的系數
W 試樣重量(克)
X 試樣水分含量
0.0140每毫摩爾氮的克數
平行測定的結果用算術平均值表示,保留小數後二位。
兩份試樣粗蛋白質的平行測定結果為15%以下時, 其相對相差不得大於3%；15%～30%進為2%；30%以上為1%。

凱氏定氮法中的常量，微量，和半微量區別：
區別在於檢測用樣品量，你可以按標准進行操作，沒有必要拘泥於某一方法
主要看你樣品量是否足夠
1、常量由於可以把全部消化液一同蒸餾測定，故較適合蛋白質含量低的樣品。
2、微量、半微量差別在裝置上，二者皆屬於水蒸汽蒸餾操作，只是前者把蒸汽直接導入反應室內，後者把蒸汽導入反應室外加熱，由於二者皆取消化液的一部份操作，可平行蒸餾操作，但檢測限要較常量法高。
3、純粹從回收率的角度看，半微量要稍好。

Ⅶ 凱氏定氮法，為什麼蒸餾時，液體變成藍綠色透明後，還要繼續加熱

一、實驗原理
蛋白質是含氮的有機化合物。蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液 滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，蛋白質含量。含氮量*6.25=蛋白含量
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4

凱氏定氮法
凱氏定氮法反應式為：
2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與鹼作用，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集於H3BO3 溶液中反應式為:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

3. 用已知濃度的H2SO4（或HCI）標准溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量

反應式為：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

二、操作
1、 樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支於有小孔的石棉網上，小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止後，加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明後，再繼續加熱0.5小時。取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中，並用少量水洗定氮瓶，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。但是此法比較危險，不易在實驗室演示，現在大多數實驗室有消煮儀一次可以進行多個（一次可以消煮16個樣品）樣品處理，並有通風櫥進行通風，溫度可以自己設定，更加安全和可操作性，因此逐步成為主要的凱氏定氮法的首選處理方法。
一般消解溫度都設在240度及240度以上，如果想快速消解可以適當提高溫度甚至可以用最大溫度進行消解。
2、按圖裝好定氮裝置，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅 指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
3、向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，不能立即將玻璃蓋塞緊，這樣易使玻璃塞粘在進樣口，應先用蒸餾水沖洗然後再蓋，並加水於小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標准溶液定至灰色或藍紫色為終點。
同時吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。

三、計算
X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100%
X：樣品中蛋白質的百分含量，g；
V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標准液的體積，ml；
V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准溶液的體積，ml；
N：硫酸或鹽酸標准溶液的當量濃度；
0.014：1N硫酸或鹽酸標准溶液1ml相當於氮克數；
m：樣品的質量（體積），g（ml）；
F：氮換算為蛋白質的系數 。蛋白質中的氮含量一般為15～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.70，玉米、高粱為6.24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其製品為5.71，肉與肉製品為6.25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為 5.30。

Ⅷ 凱氏定氮法測定食品中蛋白質含量的原理和基本操作方法是什麼

原理：有機含氮化合物與濃硫酸共熱消化，氮轉化為氨，再與硫酸結合成硫酸銨。硫酸銨與強鹼反應，放出氨。將氨蒸餾到過量的標准無機溶液中，再用標准鹼溶液進行滴定。根據測得的氨量，計算樣品的總氮量。

、試劑與材料：

濃硫酸、硫酸鉀-硫酸銅粉末(稱取80g硫酸鉀和20g硫酸銅(五水)，0.3g二氧化硒研細混合)、30%氫氧化鈉溶液、2%硼酸溶液、0.01M標准鹽酸、混合指示劑(田氏指示劑)儲存液(取50ml0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅溶液混合，儲存於棕色瓶中備用。此指示劑在PH5.2為紫色;PH為5.4為暗灰色或灰色;PH5.6為綠色;變色點為PH5.4)、硼酸-田氏指示劑混合液(100ml2%硼酸溶液，滴加約1ml田氏指示劑，搖勻後，溶液呈紫紅色)、蛋白質樣品、容量瓶、吸管、凱氏燒瓶、凱氏定氮蒸餾裝置、微量滴定管、電爐

三、操作方法

1、樣品處理：固體樣品，應在105℃乾燥至恆重。液體樣品可直接吸取一定量，也可經適當稀釋後，吸取一定量進行測定，使每一樣品的含氮量在0.2-1.0mg范圍內。

2、消化：取一定量樣品，於50ml乾燥的凱氏燒瓶內。加入300mg硫酸鉀-硫酸銅混合粉末，再加入3ml濃硫酸。用電爐加熱，在通風廚中消化，瓶口加一小漏斗。先以文火加熱，避免泡沫飛濺，不能讓泡沫上升到瓶頸，待泡沫停止發生後，加強火保持瓶內液體沸騰。時常轉動燒瓶使樣品全部消化完全，直至消化液清澈透明。

另取凱氏瓶一個，不加樣品，其它操作相同，作為空白試驗，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質，以對樣品進行校正。

3、蒸餾：將微量凱氏蒸餾裝置洗滌(先用水蒸氣洗滌)干凈。將凱氏燒瓶中的消化液冷卻後，全部轉入100ml的容量瓶，用蒸餾水定容至刻度。

吸取20ml稀釋消化液，置於蒸餾裝置的反應室中，加入10ml30%氫氧化鈉溶液，將玻璃塞塞緊，於漏斗中加一些蒸餾水，作為水封。

取一三角瓶，加入10ml硼酸-田氏指示劑混合液，置於冷凝管之下口，冷凝管口應浸沒在硼酸液面之下，以保證氨的吸收。

加熱水蒸汽發生器，沸騰後，夾緊夾子，凱氏蒸餾。三角瓶中的硼酸-指示劑混合液，吸收蒸餾出的氨，由紫紅色變為綠色。蒸餾15min，讓硼酸液面離開冷凝管口，再蒸1-2min以沖洗冷凝管口。空白試驗按同樣操作進行。

4、滴定：樣品和空白均蒸餾完畢後，用0.01M標准鹽酸滴定，至硼酸-指示劑混合液由綠色變回淡紫色，即為滴定終點。

四、計算 樣品總氮量(mg)=(A-B)×c×14×100/20

式中：A：樣品滴定時消耗的標准鹽酸體積 B：空白滴定時消耗的鹽酸體積 C：標准鹽酸的當量濃度 14：氮的相對分子量 20：用於蒸餾的稀釋消化液體積 100：稀釋消化液的體積

樣品中粗蛋白含量(mg)=樣品總氮量(mg)×6.25

Ⅸ 凱氏定氮法一般做得做多長時間

我做蛋白一般要3個小時 1.稱重(約5g) 2.把凱氏燒瓶放在電磁爐上燒烤2小時（等裡面的硫酸變綠開始計時） 3.從電磁爐上把燒瓶拿下來，放半小時（用手摸瓶底，溫溫為止） 4.蒸餾125ML左右