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強陽離子交換柱能不能反沖

發布時間:2021-02-26 00:35:52

離子交換柱再生時,用順洗好還是反洗好

洗冷水浴是有健身的功效、洗的順序是正確的、可以一直這樣洗的、但是也不是每個人都能夠堅持的、一般最好的時機為、每年的立秋節氣開始、洗完淋浴後出來最好是在進行泡熱水腳半小時至額頭出汗、、用毛巾將全身搓紅皮膚、讓身體內的熱量向外揮發、有全身發熱的感覺、這樣才不會有寒氣存留在體內-----

⑵ 哪些是陽離子交換柱 哪些是陰離子交換柱

交換柱內載體是陽離子交換樹脂為陽離子交換柱,載體為陰離子交換樹脂就是陰離子交換柱…。。華粼水質

⑶ 強酸性陽離子交換樹脂柱催化實驗步驟需要特別注意

先裝部分液體嗎,然後倒入色譜填料(色譜調料配置成懸浮液),倒的時候注意液面在填料上面,防止產生氣泡。色譜柱可以適當放液,增加填料的沉積速度

⑷ 在陽離子交換柱中為什麼極性強的先洗脫下來

雜陽離子交換柱上我們一般用的是苯乙烯和二乙烯苯組成的聚合物,是非極性的;根據相似相溶,自然極性強的先洗脫下來

⑸ 陽離子交換柱能否和陰離子交換柱調換位置

鈣、鎂離子濃度下降

⑹ 強陽離子交換(SCX)色譜柱與以強陽離子交換鍵和硅膠為填充劑的柱子有什麼區別

強陽離子交換(SCX)色譜柱與以強陽離子交換鍵和硅膠為填充劑的柱子有什麼區別

⑺ 用強酸型陽離子交換樹脂柱交換時應該注意什麼,才可以讓含量比較高呢

淋洗時少用淋洗劑

⑻ 急求~離子交換柱清洗方法

離子交換層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:21:00
材料與儀器

DEAE-32纖維素,pH8.0 0.01 mol/L Tris-HCl,工程菌破碎離心後的上清液;

層析柱

二、 方法與步驟

1) 裝柱:

用水清洗層析柱,柱內留存水距底部約1cm,加入18ml介質(凝膠溶液)。

2) 平衡:

加0.01M,PH8.0,tris-HCl緩沖液,直至流出液PH與緩沖液一致。

3) 上樣:

用量筒量出上清液體積,再加入等體積緩沖液混合,取EP管留1.5ml。待柱中水流出,至剛好覆蓋凝膠表面,靠璧緩慢加樣。

4) 用50ml緩沖液洗滌,用EP管隨機收集樣品穿出液和洗滌穿出液。

5) 洗脫:

將梯度洗滌儀和層析柱連接,洗脫瓶A(混合器)加200µl緩沖液,開口打開至兩瓶液面相平,相通管道出無氣泡,關閉連接,A中加入6gNaCl溶解,把裝置放在梯度混合儀上,開動攪拌器開關,打開A和B的連接通道,層析柱下端連收集器,收集洗脫流出液。

6) 控制流速,約4min/管,2-3ml/管。

分子篩的是凝膠層析
Sephadex G-100凝膠層析
Tina 發表於 2006-2-21 12:27:00
材料與儀器

Sephadex G-100,0.5 mol/L pH8.0 Tris-HCl,濃縮液

層析柱

二、 方法與步驟

1) Sephadex G-100 凝膠預處理

a) 100ml燒杯,稱取5克sephadex G-100,加入50ml去離子水,浸泡溶脹24小時。

b) 傾去sephadex G-100溶脹後凝膠上層的水,加入凝膠等體積的1.0 mol/L NaOH液處理,用攪棒輕輕攪動,並浸泡1小時處理後傾去。用去離子水洗滌。洗滌過程中,用傾去法除去細顆粒。其方法是用攪棒將凝膠攪勻(注意不要過分用力攪拌,以防止顆粒破碎),放置數分鍾,將未沉澱的細顆粒隨上層水倒掉。浮選3-5次,直至上層沒有細顆粒為止,再浸泡水洗至PH中性。

c) 將Sephadex G-100凝膠水溶液盛放於抽濾瓶中,用洗耳球塞住杯口,減壓抽氣30分鍾,除去凝膠溶液內的氣泡,將脫氣後的凝膠溶液輕輕倒入燒杯中,其中盛有1/2去離子水。

2) 裝柱

a) 層析柱(1.0Î50cm)用水清洗干凈,柱的上、下端聯接塑料管接上小乳膠管,裝上螺旋夾。將層析柱垂直裝好。校直過程用下端綁有鑰匙的繩子掛於鐵架的不同位置,從多角度校正使柱垂直。打開柱上埠,從柱底下出口管朝柱內注入水,使柱底全部充滿水而不留氣泡,關閉柱出口。最終柱內留存有2 cm的水。從出口處接上一根直徑2 mm細塑管,塑管另一端固定在柱的上端部位。

b) 攪動凝膠溶液(切勿攪動太快,以免空氣再逸入),使形成均一的薄膠漿,並立即沿玻棒倒入層析管內,讓加入的凝膠在柱內自然沉降,待柱底面上積起約1-2 cm的凝膠床後,打開柱出口水流。隨著柱內水的流出,上面不斷加入凝膠液,使形成的凝膠床面上有凝膠連續下降(如果凝膠床面上不再有凝膠顆粒下降,應該用攪棒均勻地將凝膠床攪起數厘米高,然後再加凝膠,不然就會形成界面,影響層析效果)。

c) 凝膠沉積到柱內凝膠是否均勻,有否「紋路」或氣泡。若層析柱不均一,必須重新裝柱。

3) 平衡

柱裝好後,使層析床穩定15-20分鍾,然後連接洗脫瓶出口和層析柱頂端,用3-5倍體積地緩沖液平衡層析柱。平衡過程中控制上柱緩沖液地進柱操作壓保持恆定。保持流速每滴/10秒。直至流出液的PH與上柱緩沖液完全相同。

4) 樣品洗脫

a) 上樣准備:

i) 上樣前打開層析柱上端,先檢查凝膠床界面是否平整,如果傾斜不平整,可用玻棒將凝膠床界面輕輕攪起後,再使凝膠自然沉降,形成平整狀態的凝膠床界面。用毛細吸管小心吸去大部分清液,然後讓液面自然下降,直至幾乎露出凝膠床界面。

ii) 樣品放入高速離心機,12000r/min、離心5 min。

iii) 上樣前吸取50µl樣品於EP管中,以備走電泳。

b) 樣品上樣:

i) 將樣品由玻棒引流沿管壁加入到凝膠床面上,注意不要將床面凝膠沖起。同時打開層析柱下面流出液開關(控制流速1滴/20秒),保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致,控制凝膠床界面不能脫水,並控制樣品區帶盡量狹窄。

ii) 當1.5ml樣品全部加入後,用 1-2 ml的0.5mol/L PH8.0 Tris-HCl洗脫液同上樣時一樣地保持層析柱下面流出滴速與上樣的滴速一致以控制凝膠床界面不能脫水,小心清洗凝膠床界面表面,使黏附著的樣品全部洗入凝膠床。

iii) 然後開始控制上樣的滴速大於層析柱下面流出滴速,使幾乎與凝膠床界面相平的洗脫液液面慢慢提高至凝膠床界面高出2cm左右,封閉層析柱上端。

iv) 保持層析柱上柱洗脫液入口處與層析柱下面流出處有一定勢壓。控制上柱緩沖液的進柱操作壓保持恆定。

c) 洗脫:

用0.1 mol/L PH8.0 Tris-HCl 緩沖液洗脫,用部分收集器收集,4分鍾/管(約2-3ml/管),收集約1-30管。

5) 酶活、酶濃度測定,參見2.6.2,2.6.3

6) 最高酶活收集管洗脫液留50µl,以備走電泳。

7) 將酶活較高的收集液10~14管合並,測定總體積為7.1 ml,精確測定酶活性。並用考馬思亮藍測定蛋白濃度。測酶活時體系稀釋了200倍,定蛋白時無稀釋。

⑼ 離子交換柱相關問題

只要能保證出水合格就可以了,沒有必要從下面進料.
降液面繼續反洗是什麼意思?降液面了還怎麼可以反沖啊?

⑽ 過離子交換柱時,pH梯度洗脫緩沖液一般用什麼緩沖液

如果不限定純抄化方法,可以考慮親和層析或離子交換,但根據你問題的意思,是選定離子交換。
此時就要考慮你蛋白的等電點了,如果等電點在你穩定pH之上,就用陽離子交換柱:
設計陽離子交換層析:將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running
buffer。同時裝柱,平衡,然後上樣,平衡,洗脫(因為你的pH不穩定,建議鹽洗脫),收峰。得你的蛋白;
如果你的等電點在穩定pH之下,就用陰離子交換柱,其步驟如上,只是改變柱子類型。

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