磁珠分選最後用過濾嗎

① 要正確的選擇磁珠需要注意什麼

要正確的選擇磁珠需要注意：

1、磁珠的單位是歐姆，而不是亨利，這一點要特別注意。因為磁珠的單位是按照它在某一頻率 產生的阻抗來標稱的，阻抗的單位也是歐姆。磁珠的 DATASHEET上一般會提供頻率和阻抗的特性曲線圖，一般以100MHz為標准，比如600R@100MHz，意思就是在100MHz頻率的時候磁珠的阻抗相當於600歐姆。

2、普通濾波器是由無損耗的電抗元件構成的，它在線路中的作用是將阻帶頻率反射回信號源，所以這類濾波器又叫反射濾波器。當反射濾波器與信號源阻抗不匹配時，就會有一部分能量被反射回信號源，造成干擾電平的增強。

為解決這一弊病，可在濾波器的進線上使用鐵氧體磁環或磁珠套，利用滋環或磁珠對高頻信號的渦流損耗，把高頻成分轉化為熱損耗。

3、不同的鐵氧體抑制元件，有不同的最佳抑制頻率范圍。通常磁導率越高，抑制的頻率就越低。此外，鐵氧體的體積越大，抑制效果越好。

在體積一定時，長而細的形狀比短而粗的抑制效果好，內徑越小抑制效果也越好。但在有直流或交流偏流的情況下，還存在鐵氧體飽和的問題，抑制元件橫截面越大，越不易飽和，可承受的偏流越大。

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磁珠種類很多，製造商應提供技術指標說明，特別是磁珠的阻抗與頻率關系的曲線。

有的磁珠上有多個孔洞，用導線穿過可增加元件阻抗（穿過磁珠次數的平方），不過在高頻時所增加的抑制雜訊能力不可能如預期的多，而用多串聯幾個磁珠的辦法會好。

鐵氧體是磁性材料，會因通過電流過大而產生磁飽和，導磁率急劇下降。大電流濾波應採用結構上專門設計的磁珠，還要注意其散熱措施。

特別是在數字電路中，由於脈沖信號含有頻率很高的高次諧波，也是電路高頻輻射的主要根源，所以可在這種場合發揮磁珠的作用。

② 免疫磁珠分選後陽性細胞極少

博凌科為解答：以前曾遇到跟樓主類似的問題，後來增加了孵育時間（從原來的內15min增加到30min以上）和抗體的量（比說容明書增加了一倍），陽性細胞明顯增 多。樓主就不要吝惜抗體了，做磁珠本來就是燒錢的，何必省這么點。還有就是上柱前後，可以取少量的細胞液塗片，進行細胞計數和在熒光顯微鏡下觀察陽性細胞數。分別對分選前後進行細胞計數，對比分選前後細胞總數，看 是否大致相等，如果分選後細胞總數減少了，說明肯定是有細胞殘留在分選柱內。在熒光顯微鏡下分別觀察陽性細胞數，可以粗略知道陽性細胞的比例（我的做法 是：在熒光顯微鏡下拍照，取三個以上的不同視野，分別對總細胞和陽性細胞進行細胞計數，大致計算平均陽性率），這樣就可以決定你分選後的陽性率是否跟預計 的是否大致一致的。如果發現分選後陽性率比分選前減低或者分選後細胞陽性率比預計的要低的多，說明肯定是標記過程或者分選過程出了問題，這時就沒有必要進 行流式分析了，可以節約開支。

③ 免疫磁珠細胞分選的簡介

把細胞用超級順磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特異性地標記，磁性標記完後，把這些細胞通過一個放在強而穩定磁場中的分選柱。分選柱里的基質造成一個高梯度磁場。被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場後，滯留柱內的磁性標記細胞就可以被洗脫出來，這樣就完全可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。
超順磁性的MACS MicroBeads 的體積很小，其直徑約為50nm，體積約小於真核細胞的一百萬份之一，可與病毒的大小相比。標記細胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標記物間的反應可在幾分鍾內完成。
由於微型磁珠的體積極小，所以不會對細胞造成機械性壓力，而且使孵育時間短，操作過程快。MicroBeads 形成一個穩定的膠體液，它們在磁場中既不沉澱又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份（氧化鐵和多糖）使其可被生物降解，且不會激活細胞或影響細胞的功能和活力，細胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除，因此，陽性分選出的細胞（即磁性標記細胞）可立即用於分析和隨後的實驗。
用MACS 細胞分選系統可以分離出非常純的細胞群體，而且有極好的回收率和存活率。依據細胞頻率和標記表達水平的不同，MACS分離細胞的純度可達95%-99.9%，回收率>90% 。

④ 如何 磁珠分選 CD4+CD25-T細胞

都可以啊，看實驗的要求和目的了。磁珠比較便宜，但是一次只能使用一種抗體。而流式可以多個指標同時染色，比如CD4，CD3雙染。一般來說，用流式比較普遍一些。

⑤ 為什麼分選cd4不用流式細胞儀 而用免疫磁珠

都可以啊，看實驗的要求和目的了。磁珠比較便宜，但是一次只能使用一種抗體。而流式可以多個指標同時染色，比如CD4， CD3雙染。一般來說，用流式比較普遍一些。

⑥ 為什麼加入磁珠的量不同，篩選片段不同

商業化磁珠產品體系一般包含：磁珠、聚乙二醇（PEG）、鹽離子等。基於SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization )技術， DNA在一回定濃度的PEG存在條件下，NaCl或答MgCl2促進條件下，DNA分子構象會發生急劇變化，會暴露出磷酸骨架上大量的帶負電荷的磷酸基團，與表面帶負電荷的羧基磁珠結合。目前認為這種負負電荷間的作用是由於帶正電荷的鹽離子的作用（如Na+）。帶負電磷酸基團藉由解離的鹽離子（如Na+）與羧基形成離子橋，使DNA被特異性吸附到羧基磁珠表面。利用磁珠的磁性，可通過外加磁場進行收集洗脫。

由於二代測序段短讀長的局限性，因而最終的NGS文庫需滿足一定的長度要求。因而NGS建庫中可能會分選特定長度區間的片段，滿足上機需求。分選精度則是評估不同的磁珠投入比例分選得到的片段大小。一般以Agilent 2100儀器檢測。

在特定磁珠比例（0.45×/0.15×）條件下，不同樣本分選後片段分布范圍集中在同一位置。較好的分選效果應該是頂部窄而圓潤的獨峰。

⑦ 幹細胞磁珠分選和流式分選的區別

• 應管理員要求，我來比較一下流式分選和磁珠分選的優缺點，本來想列一個表，但表格可能表述不清楚，還是用通俗的語言寫啊，個人體會歡迎拍磚。

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• 簡單說一下原理：

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• 現在流式分選一般都是電荷式分選，即對感興趣的目標細胞所在的液滴充上電荷，液滴經過電極板，通過電場作用發生偏轉，從而實現分選。

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• 磁珠分選首先使用磁珠偶聯的抗體去標記細胞，然後把標記好的細胞過柱子（柱子周圍連磁鐵），帶磁珠的細胞就留在柱子上，不帶磁珠的細胞就流走了，從而實現分選。

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• 現在可以比較不同了：

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• 1、對細胞的刺激。 我覺得磁珠分選最大的優勢就是對細胞的刺激要小一點。因為流式分選細胞首先要經過幾十微米的噴嘴，然後要被充電，還要經過幾千伏的電場，最後以幾十米每秒的速度落到收集管裡面，有些原代細胞就受不了，分選免疫細胞也要考慮細胞活化的影響；而磁珠分選相對來說就對細胞沒什麼刺激。

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• 2、設備要求。 磁珠分選小的實驗室就能做，買一些專用的磁鐵和柱子就可以了，而流式分選就需要分選型的流式細胞儀，都是幾百萬以上的。對操作員的要求來說，流式分選也要高一點，需要專門培訓，需要注意的細節也要多很多。

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• 當然如果你周圍有什麼流式平台的話，磁珠分選和流式分選的成本應該是差不多的，流式分選一次大約1-2千（各地方不同），磁珠分選的柱子磁珠差不多也要燒這么多錢。

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• 3、試劑不同。 這個最好理解，流式分選用的是熒光素偶聯的抗體，磁珠分選用的是磁珠結合的抗體。

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• 下面就要說下流式分選的優勢了：

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• 4、分選純度。這個肯定是流式分選的純度高，磁珠分選如果操作好的話也能達到80-90%的純度，但流式分選一般都能達到90％以上（樣本制備和儀器條件正常的條件下）。

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• 5、多參數分選。流式細胞術很大的優勢就是多參數，比如我可以分選CD4+CD25+CD127low的Treg，三色的一次就能分選。磁珠分選就必須先分CD4，再分CD25，更多參數的就沒法進行。

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• 6、低表達群細胞分選。比如有些幹細胞它的表達比例只有百分之零點幾，比例太少磁珠分選無法操作，流式就可以把這些細胞富集起來。

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• 7、胞內熒光分選。流式分選在分子生物學中很大一部分應用就是分選GFP、YFP等陽性細胞，還有可以用Hoechst染精子的單倍體進行分選，這些針對胞內成分的分選也是磁珠分選無法實現的。

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• 另外要說明的是，現在都很流行磁珠分選和流式分選相結合的方法，像上面舉的例子分選CD4+CD25+CD127low的Treg，如果僅用流式分選可能時間太長，純度也有影響。那麼可以選擇先用磁珠純化出CD4陽性的細胞，再過流式分選CD4+CD25+CD127low的群體，這樣既節省了時間保證了活性，也可以提高分選的純度。

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⑧ 細胞磁珠分選的 MACS Cell Separation Columns 可以重復使用嗎

最好不要重復用。本來就是一次性的東西。

理論上來說，反復沖洗後柱子可以恢復原回樣，但是之前過濾答的東西可能有些物質物理吸附在柱子上。之前分選中吸附柱子的雜質，是否會影響重復使用，不好說；分選效率也不好說。

之前我曾經用這個重復分過骨髓，還是能夠分離出目的細胞，但是分離效率什麼的沒具體測過，沒把握。

⑨ 免疫磁珠法可以分離Th1和Th2細胞嗎

免疫磁珠法可以分離Th1和Th2細胞
(以下轉載)
免疫磁珠法 (MACS)：免疫磁珠法是 2O世紀 80年代出現的技術方法。1983年 Ugelstad提出將免疫磁珠用於細胞分選，1990年，Mihenyi建立了 MACS。這一方法的核心是在磁珠表麵包被具免疫反應性的抗體進行抗原抗體反應，在細胞表面形成玫瑰花結，這些結合了磁珠的細胞一旦置於強大的磁場下，就會與其他未被結合的細胞分群，具超強順磁場的磁珠脫離磁場後立即消失磁性，這樣就可以篩選或去除所標記的細胞 ，從而達到陽性或陰性選擇細胞的目的。這一技術 目前已經廣泛運用於細胞及分子生物學，分離基因、靶細胞及造血幹細胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及 FACS等方法的確認。免疫磁珠可以有效地分選細胞，從而決定了這一方法在神經幹細胞分選中應 用的技術可行性 。
CD4+亞群（Th細胞）根據自身所分泌的細胞因子，分為Th1和Th2兩個亞群。Th1細胞主要分泌IL-2、IFN- γ和TNF-β 等細胞因子。Th1細胞主要介導細胞免疫反應，在誘發器官特異性自身免疫病，器官移植排斥反應和抗感染免疫中起著重要的免疫調節作用。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。Th2細胞主要調節體液免疫反應，在誘發過敏反應中起著決定性的作用。