半微量蒸餾法檢測飼料粗蛋白

① 粗蛋白的測定有沒有比凱氏定氮更好地方法呀

主要成分是蛋白質。檢驗方法是剴氏定氮法。

蛋白質的測定方法

pro的測定方法分為兩大類：一類是利用pro的共性，即含氮量，肽鏈和折射率測定pro含量，另一類是利用蛋白質中特定氨基酸殘基、酸、鹼性基團和芳香基團測定pro含量。但是食品種類很多，食品中pro含量又不同，特別是其他成分，如碳水化合物，脂肪和維生素的干擾成分很多，因此pro的測定通常利用經典的剴氏定氮法是由樣品消化成銨鹽蒸餾，用標准酸液吸收，用標准酸或鹼液滴定，由樣品中含氮量計算出pro的含量。由於食品中pro含量不同又分為凱氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它們的基本原理都是一樣的。

一 凱氏定氮法

這種方法是1883年Kjeldahl發明，當時凱氏只使用H2SO4來分解試樣，來定量穀物中的pro，他只知用H2SO4分解試樣，而不能闡明H2SO4分解有機氮化合物生成氨的反應歷程，所以只使用H2SO4分解試樣，需要較長時間，後來由Gunning加入改進，他改進的辦法是在消化時加入K2SO4使沸點上升，這樣加快分解速度，因為溫度由原來硫酸沸點的380上升到400℃，提高了不到67℃所以速度也就加快了，凱氏定氮法至今仍在使用。

我們在檢驗食品中pro時，往往只限於測定總氮量，然後乘以pro核算等數，得到蛋白質含量，實際上包括核酸、生物鹼、含氮類脂、葉啉和含氮色素等非蛋白質氮化合物，故稱為粗pro。

1 凱氏常量定氮法：

不論常量、半微量以及微量定氮法它們的原理都是一樣的，首先第一個步驟是消化：

（1）消化：樣品與硫酸一起加熱消化，硫酸使有機物脫水。並破壞有機物，使有機物中的C、H氧化為CO2和H2O蒸汽逸出，而pro則分解氮，則與硫酸結合成硫酸銨，留在酸性溶液中。

（2）在消化過程中添加硫酸鉀可以提高溫度加快有機物分解，它與硫酸反應生成硫酸氫鉀，可提高反應溫度，一般純硫酸加熱沸點330℃，而添加硫酸鉀後，溫度可達400℃，加速了整個反應過程。此外，也可以加入硫酸鈉，氫化鉀鹽類來提高沸點。其理由隨著消化過程硫酸的不斷地被分解，水分的逸出而使硫酸鉀的濃度增大，沸點增加。加速了有機的分解。但硫酸鉀加入量不能太大，否則溫度太高，生成的硫酸氫銨也會分解，放出氨而造成損失。

為了加速反應過程，還加入硫酸銅，氧化汞或硒粉作為催化劑以及加入少量過氧化氫，次氯酸鉀作為氧化劑。但為了防止污染通常使用硫酸銅。

所以有機物全部消化後，出現硫酸銅的蘭綠色，它具有催化功能，還可以作為鹼性反應指示劑。

（1）蒸餾：樣液中的硫酸銨在鹼性條件下釋放出氨，在這操作中，一是加入氫氧化鈉溶液要過量，二是要防止樣液中氨氣逸出。

（2）吸收與滴定：

蒸餾過程中放出的氨可用一定量的標准硫酸或標准鹽酸溶液進行氨的吸收，然後再用標准氫氧化鈉溶液反滴定過剩的硫酸或鹽酸溶液，從而計算出總氮量。

半微量或微量定氮通常用硼酸溶液吸收後，再用標准鹽酸直接滴定，硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影響指示劑變色反應，它有吸收氨的作用。

1．操作步驟：

准確稱取樣品中0.50-2.00g→於500ml凱氏瓶中→加10g無水K2SO4→加0.5gCuSO4→加20ml H2SO4→在通風櫥中先以小火加熱，待泡沫消失後，加大火力，消化至透明無黑粒後，將瓶子搖動一下使瓶壁炭粒溶於硫酸中→繼續消化30分鍾→至到樣液呈綠色狀態，停止消化，冷卻→加200ml水→連接蒸餾裝置→用硼酸作吸收液→在K氏瓶中加波動珠數粒和80ml50% NaOH→立即接好定氮球→加熱→至到K氏瓶內殘液減少到三分之一時，取出用水沖洗→用0.1N HCl滴定。

N（V2-V1）0.014

W

計算：

總氮量%= （N(V2-V1)×0.014）/W × 100

0.014----氮的毫克當量數

pro%=總氮%×K

乳製品K=6.38（N=15.7%）

小麥粉K=5.79（N=17.6%）

動物膠K=5.6（N=18.0%）

冰蛋K=6.7（N=14.8%）

大豆製品K=6.0（16.7%） K=6.25則（N=16%）

K-換稱等數

各種試劑的作用:

濃H2SO4：

A ：脫水使有機物炭化，然後有機物炭化生成碳，碳將H2SO4還原為SO2，本身則變為CO2

B： 氧化

C： pro與濃H2SO4生成NH3↑，CO2，SO2，H2O↑

D： NH3與H2SO4生成硫酸銨

（1）CuSO4的作用（催化劑）

CuSO4為紅色沉澱，當C完全消化後，反應停止，紅色消失，變為蘭色，即為消化達到完全，蘭色為CuSO4的顏色

（2）K2SO4的作用（提高沸點）

沸點由330℃提高到400℃加速了反應過程。

（3）硒粉和過氧化氫，氧化汞都為催化劑，但為了防止污染通常採用硫酸銅

（4）50%NaOH的作用

下面我就針對幾點來說明為何影響氨化完全和速度快的因素:

（1）K氏燒瓶和取樣量

如果稱1g以上的樣品，就需要K氏燒瓶最小500ml，800~1000ml的更好，這樣的K氏燒瓶對於縮短氨化時間，加熱的均勻性和完全氨化效果最好。

（2）分解劑

A H2SO4和K2SO4的添加量

有機無分解需要H2SO4量，H2SO4應根據有機物種類不同而加的量就不同，如果試樣含脂類高，則加H2SO4多，為了提高分解溫度，要大量添加K2SO4，但不能太多，也不能太少，太少則氨化不充分。K2SO4和H2SO4的添加比例是：

1g樣品 K2SO4： H2SO4=7g：12ml

這種比例在國內外都使用，是公認的

還有一種比例： K2SO4：H2SO4=10：20ml

B 催化劑

用作催化劑的有Hg、HgO、Se，硒化合物，CuSO4、TiO2，對Hg，HgO有毒但結果好，Se與CuSO4得到結果是一種，TiO2，的結果偏低，採用不同的催化劑則消化時間不同， HgO消化麥子為38，Se與CuSO4消化麥子55，TiO2消化麥子70，所以在給出測定結果時要註明催化劑的類型。

（3）熱源的強度

消化時熱源的強度同迅速消化和完全氨化關系很大，即便鹽類K2SO4加得多，如果熱源弱，也是沒有意義的，熱源過強導致H2SO4損失，使氨回收率低，另外K氏瓶的容量大小，頸部的粗細和長短等，也與熱源的強度有關。

（4）氨的蒸餾和吸收及滴定

蒸餾有兩種:

1 直接蒸餾（裝置簡便，准確性好）

2 水蒸汽蒸餾

蒸餾加NaOH是50%，加的量為H2SO4量的4倍，硫酸量為12ml，則NaOH為12×4=48ml，而且一般高於這個理論值，即加到50~55ml，如果NaOH量加的不夠就變成H2S， H2S是強酸，使顏色變紅。

吸收液有：

1標准H2SO4 用標准鹼返滴定，甲醛紅指示劑

2 硼酸 用HCl進行滴定，混合指示劑

目前都用硼酸吸收液，用硼酸代替H2SO4，這樣可省略了反滴定，H2SO4是強酸，要求較嚴，而硼酸是弱酸，在滴定時，不影響指示劑變色范圍，另外硼酸為吸收液濃度在3%以上可將氨完全吸收，為保險期間一般用4%。

〈6〉實驗注意事項

a.樣品應時均勻的，若是固體樣品應事先研細，液體樣要混合均勻。

b.樣品放入K氏燒瓶時，不要黏附瓶頸上，萬一黏附可用少量水緩慢沖下，以免被檢樣消化不完全，使結果偏低。

c.消化時，如不容易呈透明溶液，可將K氏燒瓶放冷後，加入30%過氧化氫催化劑2~3ml，促使氧化。

d.在整個消化過程中，不要用強火，保持和緩的沸騰，使火力集中在K氏燒瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

e.如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這時會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用，因此當硫酸過多底物被消耗掉或樣品中脂肪含量過高時，要添加硫酸量。

f.混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色，如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲醛紅乙醇溶液。

g.氨是否完全蒸餾出來，PH試紙檢查餾出液是否為鹼性。

h.向蒸餾瓶中加入濃鹼時，往往出現褐色沉澱無。這時由於分解促進劑與加入的硫酸銅反應，生成氫氧化銅，經加熱後又分解生成氧化銅的沉澱，有時Cu離子與氨作用生成深蘭色的絡合物。

i.消化劑綠色後繼續消化30分鍾即可。

2 K氏微量定氮儀法

3 K氏半微量定氮儀法 (2 、 3原理一樣)

操作方法大同小異，半微量法消化後，定容100ml，然後吸25ml蒸餾吸收液吸收。

N（V2-V1）0.014

W＊10／100

計算總氮%=(N(V2-V1)×0.014)/(W×10/100)×100

對於微量定氮儀法，儀器有了改進，樣液稱樣少，蒸餾消化液也少，其它基本一樣。

4 K氏自動定氮法

原理與上面一樣，儀器，採用K氏自動定氮儀：其裝置內具有自動加鹼蒸餾裝置，自動吸收和滴定裝置以及自動數字顯示裝置，消化裝置：由優質玻璃製成的K氏消化瓶以及紅外線裝置的消化爐。

二 水揚酸比色法：

1 原理： 樣品中的pro經H2SO4消化轉化為銨鹽溶液後，在一定的酸度和溫度下與水揚酸鈉和次氯酸鈉作用生成有顏色的化合物，可以在波長660nm處比色測定，求出樣品含氮量，計算蛋白質含量。

2 方法 （1）標准曲線的繪制

取6個25ml容量瓶編號 0 1 2 3 4 5 6

分別加空白酸液 2ml

分別加磷酸鹽緩沖液 5ml

稀釋至總體體積至15ml

分別加水揚酸鈉 5ml

37C水浴 15分鍾

加入次氯酸鈉 2.5ml

37C水浴 15分鍾

取出試液於660nm下進行比色，繪標准曲線。

（2）樣品處理：

准確稱樣0.20~1.00g→於K氏瓶中→加15mlH2SO4和5g催化劑→電爐上加熱到沸騰後→加大

火力消化→直到出現暗綠色時→搖動瓶子→K氏瓶全部消化後→冷卻→加水至250ml容量

瓶。

（3）樣品測定：

准確吸取上述消化溶液10ml→於100ml容量瓶中→定容→准確吸2ml→於25ml容量瓶中→加

5ml磷酸緩沖液→以下操作與標准曲線繪制的步驟相同

並以試劑空白微對照，測得樣液的光密度，從標准曲線查出其含氮量。

（4）計算

C×F

含氮%= ---------------------------× 100

W×1000×1000

C---從標准曲線中查出測定樣液的含氮量（Ug）

F---樣品溶液的稀釋倍數

W---樣品重量（g）

pro%=總氮%×K（K可為6.25，也可查）

3注意事項：

A 當天消化液最好當天測定，結果重現性好，如果樣液改至第二天比色就有變化。

B 當在PH和試劑適當范圍內加入氯源後，顏色的顯色和溫度有關，應嚴格控制反應溫度。

C 這種方法測定結果基本與K氏法一致。

4 試劑

（1）氯標液：稱經110℃乾燥2h的硫酸銨0.4719g→於燒瓶中定容10ml→此液1ml相當於

1.0mg氮標液→使用時配製成1ml相當於2.50Ug氮標液。

（2）空白酸液：稱0.50g蔗糖→加15mlH2SO4和5g催化劑→與樣品一樣消化→定容250ml→

使用時吸收此液10ml→加水至100ml為工作液備用。

（3）磷酸鹽緩沖液：稱7.1g磷酸氫二鈉→加38g磷酸三鈉→加20g三九石酸鉀鈉→加400ml水

溶解→過濾→另稱35gNaOH溶於100ml水中→冷至室溫→緩緩地攪拌加入磷酸鹽溶液中→加

入水稀釋至1000ml備用。

（4）水揚酸鈉溶液：稱25g水楊酸鈉和0.15g亞硝基鐵氰化鈉溶於200ml水中過濾，加水稀釋

至500ml

（5）次氯酸鈉溶液：吸4ml安替富民液，用水稀釋至100ml

5 儀器

（1）分光光度計

（2）恆溫水浴

三 紫外分光光度法

1 原理：

pro及其降解產物的芳香環基 ，在紫外區內對某一波長具有一定的光選擇吸收，在280nm下，光吸收與pro濃度（3~8mg/ml）成直線關系，因此，通過測定pro溶液的吸光度，並參照事先用K氏定氮法分析的標准樣品，從標准曲線查出蛋白質的含量。

2 試劑：

（1） 0.1mol/l檸檬酸水溶液。

（2）8mol/l脲[（NH2）2CO]的2NNaOH溶液。 脲的2N氫氧化鈉液

（3） 95%乙醇

（4） 無水乙醚

3 儀器

（1） 751型的紫外分光光度計

（2） 離心機

4 操作方法

（1）標准曲線的繪制：准確稱取樣品.2.00g，置於50ml燒瓶中，加入0.1mol/l檸檬酸水溶液30ml，攪拌30分鍾使其充分溶解，用四層紗布過濾於玻璃離心管中，以每秒鍾3000~5000轉的速度離心10分鍾，分別吸出上清夜0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml於6個10ml容量瓶鍾，每個容量瓶，8mol/l脲的氫氧化鈉溶液充分搖2分鍾（如果離心再次離心），取透明液於比色皿中，在280nm下測定其吸光度。（做參比值）

以事先用K氏定氮法測定的樣品中蛋白質的含量微橫坐標上面的吸光度為縱坐標，繪制標准曲線。

（2）樣品測定

准確稱取試樣1.00g→於50ml燒杯中→加0.1mol/l檸檬酸溶液30ml→攪拌10分鍾→四層紗布過濾到離心管中→用8mol/L脲的NaOH溶液定容，搖勻後於280nm下測吸光度，從標准曲線上查出pro的含量。

計算： 蛋白質= C/W× 100

C----從標准曲線上查得的pro含量（mg）

W----測定樣品溶液相當於樣品量（mg）

說明：

a.此法運用於糕點，牛乳和可溶性pro樣品，測定糕點時，應把表皮顏色去掉。

b.溫度對pro水解有影響，操作溫度應控制在20~30℃。

四 雙縮脲法-皮尼克法

1 原理：

雙縮脲在鹼性條件中，能與CuSO4結合成紅紫色的絡合物。pro分子中含有肽鏈與雙縮脲結構相似，也呈此反應。本法直接用於測定像小麥粉等固體試樣的pro含量。但作為銅的穩定劑，酒石酸鉀鈉比甘油好些。小麥粉中的pro能直接地一邊抽出一邊進行定量。

2 試劑

⑴甘油作為穩定劑：取10ml10N KOH溶液，3.0ml甘油加到937ml水中，激烈攪拌，同時加入4%CuSO450ml。

⑵酒石酸鈉作穩定劑，吸10ml10N KOH溶液和20ml25%酒石酸鉀鈉溶液加到930ml水中，激烈攪拌，同時加入4%CuSO4液40ml。

配製以上兩種溶液、試劑，必須澄清，無氫氧化銅生成，否則重配。

3 方法：樣品測定

標准曲線繪制

准確稱0.6g樣品→使用試劑（1）

准確稱0.5g樣品→使用試劑（2）

假如用試劑（2）

（1）准確稱樣→0.5g→於80ml離心管→加1mlClC4→混合→加50ml酒石酸鉀鈉穩定劑→蓋上蓋子離心10min（4000轉/分）→放置1小時→吸混合液15ml→於20ml離心管中→離心到完全透明→取上清夜5ml於→10ml容量瓶→加水定容→於550nm處測定吸光度，從標准曲線上查出pro含量。

（2）標准曲線繪制

按樣品測定方法，根據樣品中pro含量，取離心澄清樣液0.0 2.0 4.0 8.0 10.0ml於10ml容量瓶中→分別加水定容，按照樣品測定其吸光度。

事先用K氏定氮法測定樣品中pro含量為橫坐標，以上述吸光度為縱坐標繪制標准曲線。

4 計算：蛋白質%=C/W×100

C----從標准曲線上查得得pro含量（mg）

W----測定樣液時相當於樣品重量（mg）

② 什麼是半微量蒸餾法

答：半微量蒸餾法適合於各種植物樣品消煮液中氮的定量。植物樣品經開氏法消煮、定容後專，吸取屬部分消煮液鹼化，使銨鹽轉變成氨，經蒸餾，用H3BO3吸收，硼酸中吸收的氨可直接用標准酸滴定，以甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑指示終點。

③ GB 6432-1986 飼料粗蛋白測定方法是什麼呢

不知道，只知道現在用凱氏定氮法

一、原理

蛋白質是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。

1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4

反應式為：

2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04（其中CuSO4做催化劑）

2.在凱氏定氮器中與鹼作用，通過蒸餾釋放出NH3，收集於H3BO3溶液中

反應式為:

(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O

3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標准溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量

反應式為：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3

二、試劑

所有試劑均用不含氨的蒸餾水配製。

2.1硫酸銅。

2.2硫酸鉀。

2.3硫酸。

2.42%硼酸溶液。

2.5混合指示液：1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。

2.640%氫氧化鈉溶液。

2.70.025mol/L硫酸標准溶液或0.05mol/L鹽酸標准溶液。

三、儀器

定氮蒸餾裝置：如圖所示。

凱氏定氮法儀器1.安全管

2.導管

3.汽水分離管

4.樣品入口

5.塞子

6.冷凝管

7.吸收瓶

8.隔熱液套

9.反應管

10.蒸汽發生瓶

四、操作方法

1、樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支於有小孔的石棉網上，小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止後，加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明後，再繼續加熱0.5小時。取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中，並用少量水洗定氮瓶，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。

2、按圖裝好定氮裝置，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。

3、向接收瓶內加入10ml2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，立即將玻璃蓋塞緊，並加水於小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N鹽酸標准溶液定至灰色或藍紫色為終點。

同時吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。

計算：

X=(（V1-V2）*N*0.014)/(m*（10/100）)*F*100%

X：樣品中蛋白質的百分含量，g；

V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標准液的體積，ml；

V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准溶液的體積，ml；

N：硫酸或鹽酸標准溶液的當量濃度；

0.014：1N硫酸或鹽酸標准溶液1ml相當於氮克數；

m：樣品的質量（體積），g（ml）；

F：氮換算為蛋白質的系數。蛋白質中的氮含量一般為15～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.70，玉米、高粱為6.24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其製品為5.71，肉與肉製品為6.25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為5.30。

五、注意事項

（1）樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

（2）樣品放入定氮瓶內時，不要沾附頸上。萬一沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低。

（3）硝化時如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷後，慢慢加入30%過氧化氫（H2O2）2-3ml，促使氧化。

（4）在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

（5）如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。

（6）加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作鹼性反應的指示劑。

（7）混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

（8）氨是否完全蒸餾出來，可用PH試紙試餾出液是否為鹼性。

（9）吸收液也可以用0.01當量的酸代表硼酸，過剩的酸液用0.01N鹼液滴定，計算時，A為試劑空白消耗鹼液數，B為樣品消耗鹼液數，N為鹼液濃度，其餘均相同。

（10）以硼酸為氨的吸收液，可省去標定鹼液的操作，且硼酸的體積要求並不嚴格，亦可免去用移液管，操作比較簡便。

（11）向蒸餾瓶中加入濃鹼時，往往出現褐色沉澱物，這是由於分解促進鹼與加入的硫酸銅反應，生成氫氧化銅，經加熱後又分解生成氧化銅的沉澱。有時銅離子與氨作用，生成深l藍色的結合物[Cu(NH3)4]2+

（12）這種測算方法本質是測出氮的含量，再作蛋白質含量的估算。只有在被測物的組成是蛋白質時才能用此方法來估算蛋白質含量。

④ 飼料蒸餾粗蛋白以後，蒸餾體積多少餾時間以吸收液體體積達到錐形瓶ml為宜

用半微量蒸餾法做飼料粗蛋白時蒸餾發生器硫酸應加多少

蛋白質是含氮的有機化合物。食品與內硫酸和催化劑容一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。

1. 有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4

2. 反應式為：

3. 2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04 （其中CuSO4做催化劑）

4. 2.在凱氏定氮器中與鹼作用，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集於H3BO3 溶液中

5. 反應式為:

6. (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4

7. 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O

8. 3. 用已知濃度的H2SO4（或HCI）標准溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量

9. 反應式為：

10. (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3

11. (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3
    

⑤ 飼料粗蛋白測定值高的離譜什麼原因

樓上各位老師總結的都很好，做下空白、硫酸銨。這幾天一直偏高的話，操作上的錯誤可能性不大，你檢查下蒸餾水、葯品、試劑有沒有污染，或者純度能不能達標，半微量定氮的話，燒瓶里的水也要經常更換。

⑥ 如何檢測家禽類飼料中的粗蛋白

凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強鹼進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
2、試劑
2.1 硫酸（GB 625）：化學純，含量為98％，無氮。
2.2 混合催化劑：0.4g硫酸銅，5個結晶水（GB 665），6g硫酸鉀（HG 3—920）或硫酸鈉（HG 3—908），均為化學純，磨碎混勻。 2.3 氫氧化鈉（GB 629）：化學純，40％水溶液（m/V）。 2.4 硼酸（GB 628）：化學純，2％水溶液（m/V）。
2.5 混合指示劑：甲基紅（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚綠（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
2.6 鹽酸標准溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標定，按GB 601制備。 2.6.1 鹽酸標准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL鹽酸（GB 622，分析純），注入 1 000mL蒸餾水中。
2.6.2 鹽酸標准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL鹽酸（GB 622，分析純），注入1 000mL蒸餾水中。 2.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析純。 2.8 硫酸銨（GB 1396）：分析純，乾燥。
2.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1％甲基紅乙醇溶液7mL，4％氫氧化鈉水溶液0.5mL，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序用）。
3、 儀器設備

3.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽。 3.2 分樣篩：孔徑0.45mm（40目）。 3.3 分析天平：感量0.0001g。 3.4 消煮爐或電爐。
3.5 滴定管：酸式，10、25mL。 3.6 凱氏燒瓶：250mL。
3.7 凱氏蒸餾裝置：半微量水蒸氣蒸餾式。 3.8 錐形瓶：150、250mL。 3.9 容量瓶：100mL。 3.10 消煮管：250mL。
3.11 定氮儀：以凱氏原理製造的各類型半自動。
4、 試樣的選取和制備
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎後全部通過40目篩，裝於密封容器中，防止試樣成分的變化。
5 分析步驟
5.1.1 試樣的消煮
稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4g混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，將 凱氏燒瓶置於電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失後，再加強火力 （360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然後再繼續加熱，至少2h。
5.1.2 氨的蒸餾：
將試樣消煮液冷卻，加入20mL蒸餾水，轉入100mL容量瓶中，冷卻後用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶內。蒸汽發生器 的水中應加入甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。准確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。
5.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按5.1.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應檢查加鹼、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
5.1.3 滴定
用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸餾後的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）鹽酸標准溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
6 、空白測定

稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第5章進行空白測定，消耗0.1mol/L鹽酸標准溶液的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol/L鹽酸標准溶液體積不得超過0.3mL。
7、 分析結果的表述
7.1 計算見下式：
粗蛋白質（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100 式中：V2── 滴定試樣時所需標准酸溶液體積，mL； V1── 滴定空白時所需標准酸溶液體積，mL； c── 鹽酸標准溶液濃度，mol/L； m── 試樣質量，g；
V── 試樣分解液總體積，mL； V── 試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140── 與1.00mL鹽酸標准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相當的、以克表示的氮的質量。
6.25── 氮換算成蛋白質的平均系數。
7.2 重復性
每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。 當粗蛋白質含量在25％以上時，允許相對偏差為1％。 當粗蛋白含量在10％～25％之間時，允許相對偏差為2％。 當粗蛋白質含量在10％以下時，允許相對偏差為3％。

⑦ 油廠棉粕蛋白化驗蛋白的微量做法怎麼做

微量做法就是凱氏半微量定氮法，具體操作步驟如下：
飼料粗蛋白的檢測方法（凱氏半微量定氮法）
1 原理
凱氏法測定試樣含氮量，即在催化劑存在下，用濃硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨，加入強鹼（NaOH）並蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，用標准鹽酸溶液滴定測出含氮量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白質含量。
2 儀器設備
2.1實驗室用樣品粉碎機或研缽
2.2分樣篩：孔徑0.45mm（40目）
2.3分析天平：感量0.0001g
2.4消煮爐或電爐
2.5滴定管：酸式25mL
2.6凱氏燒瓶：100mL
2.7凱氏蒸餾裝置：半微量水蒸汽蒸餾式
2.8錐形瓶：150mL
2.9容量瓶：100mL
3 試劑
3.1硫酸：分析純
3.2硫酸銅：分析純
3.3硫酸鉀：分析純
3.4硒粉：分析純
3.5氫氧化鈉：分析純40g溶於100mL蒸餾水配成40%水溶液。
3.6硼酸：分析純2g溶於100mL蒸餾水配成2%水溶液。
3.7混合指示劑：甲基紅分析純0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠分析純0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內。
3.8 0.02N鹽酸標准溶液：1.67mL鹽酸分析純溶於1000mL 蒸餾水中。
3.8.10.02N鹽酸標准溶液的標定（碳酸鈉法）
精確稱取0.04g於270—300°C灼燒至恆重的基準級無水碳酸鈉，准確至0.0001g，無損失地轉入100 mL三角瓶中，加入無CO2蒸餾水(新做蒸餾水或蒸餾水煮沸數分鍾放涼後使用)50mL溶解，並加入混合指示劑10滴，用鹽酸標准溶液滴定至溶液由綠色變為暗紅色，煮沸2分鍾，冷卻後繼續滴定至溶液呈暗紅色，同時做空白試驗。
3.8.2鹽酸標准溶液當量濃度的計算
G
N =
(V1-V2)×0.05299
式中：G——無水碳酸鈉的重量，g；
V1——鹽酸標准溶液消耗的體積，mL；
V2——空白試驗所消耗鹽酸標准溶液的體積，mL；
0．05299——每毫克當量碳酸鈉的克數；
註：標定各濃度間的相對偏差不大於0.2%。
3.9蔗糖：分析純
3.10硫酸銨：分析純，乾燥。
4 試樣的選取與制備
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎後全部通過40目篩，裝於密封容器中，防止試樣成分變化。

5 測定方法及步驟
5.1試樣的消煮
稱取0.5—1g試樣 （粗蛋白含量在25%以下稱取1g，粗蛋白含量在25%以上稱取0.5g），准確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入硫酸銅0.4g，無水硫酸鉀6g，硒粉0.004g，與試樣混合，再加濃硫酸12.5mL，在消煮爐上小心加熱，待樣品焦化，泡沫消失，加強火力，至溶液澄清後，再加熱至少1h。
5.2氨的蒸餾（半微量水蒸汽蒸餾法）
將上述消煮液冷卻，無損失地轉入100 mL容量瓶中，冷卻後定容為試樣分解液，取20 mL 2%硼酸溶液，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的末端浸入此溶液，准確移取試樣分解液10 mL注入反應室中，塞好入口玻璃塞，再加入10mL 40%NaoH溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應室（加鹼時流速不可過快，否則會引起硼酸吸收液倒流），塞好玻璃塞，並在入口處加水密封好，防止漏氣，蒸餾，自吸收液變為藍色開始計時，4分鍾後，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1分鍾，用蒸餾水洗凈冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
5.3滴定
吸收氨後的吸收液立即用0.02mol/L的標准溶液滴定，溶液由藍色變成灰紅色為終點，記錄所耗標准溶液的體積。
5.4空白測定
稱取蔗糖0.5g代替試樣，重復上述操做，以校正葯品不純所發生的誤差，消耗0.02mol/LHCL應不超過0.3mL。

6 測定結果的計算與分析
6.1計算公式如下：
（V-V0）×(N×0.014×6.25) ×100
粗蛋白（%）=
W×V/V′
式中：V-----滴定試樣時所需酸標准溶液體積，mL；
V0------滴定空白時所需酸標准溶液體積，mL；
N-------鹽酸標准溶液當量濃度；
W------試樣重量，g；
V-------試樣分解液總體積，mL；
V′------試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140------氮的毫克當量數；
6.25-----氮換算成蛋白質的平均系數。
6.2重復性
每個試樣取兩個平行樣，以其算數平均值為結果；
粗蛋白含量在25%以上，允許相對偏差為1%；粗蛋白含量在10-25%之間，允許相對偏差為2%；粗蛋白含量在10%以下，允許相對偏差為3%；

7 測定步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按上述步驟操作，按上述公式計算（不乘系數6.25），測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2%，否則應檢查加鹼，蒸餾和滴定各步驟是否正確。
8 注意事項
8.1試樣消煮時，先低溫加熱，避免泡沫溢出，待泡沫消失後，再逐漸增加溫度，使之微沸，避免劇烈沸騰，否則會使氮分子損失。
8.2加鹼必須過量，鹼除了與銨鹽和剩餘的硫酸作用，還與硫酸銅作用生成藍色氫氧化銅，然後分解為黑色氧化銅。
8.3消化過程中，若硫酸損失過多，可酌量補加硫酸，勿使瓶內乾涸。

⑧ 半微量蒸餾法

和普通蒸餾基本一樣，只是所用儀器小一些，是因為所用試劑比普通蒸餾少一半

⑨ 化驗飼料中真蛋白含量使用的氫氧化鈉溶液的配製與標定

一、原理 蛋白質在一定鹼性條件下能與重金屬鹽類發生鹽析作用而析出沉澱．此沉澱物不溶於熱水。而非蛋白氮類物質易溶於水。用熱水洗滌沉澱．將水溶性含氮物質洗去，剩下的沉澱物質再用凱氏定氮法測定即可得出飼料真蛋白質的含量。 二、測定所需的材料 1．儀器和設備 實驗室用台式粉碎機、分樣篩(20目)、分析天平(感量0．1mg)、燒杯(250m1)、玻璃棒、玻璃漏斗、中速定量濾紙(直徑15cm)、表面皿(直徑10cm)、乾燥箱(可控溫度65～70℃)、凱氏燒瓶(100m1)、燒煮爐或電爐、半微量定氮蒸餾器、容量瓶(100m1)、錐形瓶(250m1)、酸式滴定管(50m1)。 2．試劑與試液 硫酸AR、10％ 硫酸銅水溶液、硫酸鉀或無水硫酸鈉AR、氫氧化鈉AR、40％ 氫氧化鈉水溶液、2．5％氫氧化鈉水溶液、2％ 硼酸水溶液、0．05％mo]／]鹽酸標准溶液、氯化鋇試液、5％氯化鋇水溶液、0．1％ 甲基紅乙醇溶液、0．5％ 溴甲酚綠乙醇溶液。 三、樣品的選取與制備 取有代表性的樣品約lkg。用四分法分為兩份。一份裝瓶加封作為留用樣品。另一份粉碎過20目。裝於廣口瓶中貼標簽待測。 四、測定步驟 1．試樣的前處理 准確稱取試樣1～2g(精確到0．1mg)於250ml燒杯中，加蒸餾水50ml煮沸．依次加入10％硫酸銅水溶液20ml和25％氫氧化鈉溶液20rnl，邊加邊攪拌，加完後繼續攪拌幾分鍾。放置2小時或靜置過夜，沉澱物以中速定量濾紙過濾。用70℃以上熱水18ml反復洗滌沉澱．直至濾液無沉澱為止(取氯化鋇試液滴於表面皿中。加2mol／l鹽酸溶液1滴．滴人濾液．在黑色背景下觀察應無白色沉澱)。然後，將濾紙和沉澱物包好，放人烘箱中在65～70℃下乾燥2小時。 2．試樣的消化 將烘乾的試樣連同濾紙一起放人凱氏燒瓶中．依次加入硫酸鉀或無水硫酸鈉9 硫酸銅1 濃硫酸25ml，搖勻，爾後置於電爐上先低溫(100～200~C)加熱，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失後再提高加熱溫度(約410~C)至沸騰，消化至溶液澄清無黑點並呈藍綠色，再繼續加熱30分鍾，然後將凱氏燒瓶移出電爐放冷。 3．定容 將冷卻後的消化液加蒸餾水約10～20ml，』搖勻後轉入100ml容量瓶中，再加10～20ml蒸餾水洗滌凱氏燒瓶。溶液並入容量瓶中，如此反復洗滌，直至消化液全部轉入容量瓶中。待冷卻至室溫後，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。即為試樣分解液。 4．蒸餾 採用半微量凱氏定氮蒸餾法。先將水蒸汽發生器與半微量凱氏定氮蒸餾器連接好。在水蒸汽發生器的水中加入甲基紅指示劑3滴與硫酸數滴，使水溶液保持橙紅色，否則應補加少許硫酸。取20ml2％硼酸水溶液於250ml錐形瓶中，加0．1％甲基紅乙醇溶液5～6滴，0．5％溴甲酚綠乙醇溶液2～3滴，搖勻。然後將錐形瓶置於半微量凱氏定氮蒸餾器的末端．使冷凝管末端浸入此吸收液面下2／3處。准確移取試樣分解液10～15ml注入半微量定氮蒸餾器中，用少量蒸餾水沖洗進樣口，爾後緩慢加入40％氫氧化鈉水溶液20ml。用少量蒸餾水沖洗進樣口，用玻璃塞塞好進樣口。再加適量蒸餾水封住進樣口以防止漏氣。蒸餾3～5分鍾以後待冷凝管末端管口之餾出液呈中性(紅色石蕊試紙不變色)時將冷凝管末端離開吸收液面並沖洗冷凝管末端管口，洗液並入吸收液。再蒸餾1～2分鍾後用蒸餾水沖洗冷凝管末端管口，洗液並入吸收液。然後將錐形瓶移出，准備滴定。此時應夾斷氣源。排出廢液，准備下一個樣品的測定。 5．滴定 吸收氨後的吸收液立即用0．05tool／1的鹽酸標准溶液滴定使溶液顏色由藍綠色變為灰紅色即為滴定終點。同時記錄鹽酸標准溶液的耗用量。 6．空白 在進行樣品測定的同時進行空白測定。空白測定除不加試樣外其他操作步驟與試樣相同。空白試驗消耗的鹽酸標准溶液的體積不得超過0．5ml。 7．結果計算 五、注意事項 1．在試樣的前處理過程中，「煮沸」要求是加熱至沸並保持30分鍾，目的是使試樣中的非蛋白氮類物質充分溶解於水中。加10％硫酸銅溶液和25％氫氧化鈉溶液時最好採用移液管移取，然後沿著燒杯內壁緩慢滴加，一方面防止局部氫氧化鈉太濃將溶解部分蛋白質，這樣會導致最終結果偏低；另一方面是為了使試樣中的真蛋白質充分鹽析：放置2小時或靜置過夜也是這個道理。沉澱物宜以雙層中速定量濾紙過濾，雙層濾紙可以加快過濾速度，同時又不致於將沉澱物過濾掉。濾液無SO+2表明了已充分洗滌沉澱物，因為如果濾液中仍有SO+2 。則表明沉澱物中間仍可能夾雜有部分可溶性非蛋白氮類物質(如NH )，若不繼續洗滌則將導致最終結果偏高。將濾紙和殘渣(沉澱物)包好放入烘箱中於65～70cc下乾燥2小時是為了使沉澱物充分乾燥。一方面是為了避免沉澱物中仍夾雜有一些氨類物質(盡管這種情況一般不會發生。因為濾液已經過了氯化鋇試液的檢驗，但仍不能排除因人眼觀察的局限性使其中間仍夾雜有部分熱烘乾的過程中揮發掉)；另一方面也是為了下一步試樣消化的順利進行。因為如果試樣潮濕，炭化升溫過快，氣體驟然膨脹不易從凱氏燒瓶中散發出去，很容易使試樣與氣體一同沖出凱氏燒瓶從而導致消化失敗。 2．消化時應經常轉動凱氏燒瓶以便使消化進行得迅速而完全。在炭化時如有黑色碳粒濺在瓶壁上應將凱氏燒瓶移出。待冷卻後加少量蒸餾水沖洗之。爾後再繼續消化 3．對膠體物質或脂肪含量較高的樣品。消化時應防止泡沫溢出瓶口．如發現有泡沫溢至瓶頸時應立即移開火源，並加1～2滴蒸餾水再繼續消化。 4．蒸餾過程中要注意氣體通路。即管夾要有一個打開，以免燙傷。在加試樣分解液或鹼液於反應室時要快。應先檢查氣源是否夾斷。廢液流出口是否暢通。開始蒸餾時應先通蒸汽後夾斷廢液排出口。否則所加液迴流排出。 核心提示：飼料特別是植物性飼料中含量較多的非蛋白氮化合物如氨化物不能或不能完全被單胃動物(如豬、禽等)利用，只有真蛋白質才能被單胃動物消化、吸收與利用。因此飼料真蛋白質含量比飼料粗蛋白含量更能反映出飼料的營養價值。

⑩ 有誰能告訴我怎樣測定魚粉的粗蛋白他的具體操作步驟。

1 魚粉質量標准概述
魚粉目前國內執行的標准為SC／T3501—1996[1]具體指標為感觀指標：色澤、組織、氣味三項，理化指標：粉碎粒度、粗蛋白，粗脂肪、水分、鹽分、灰分、砂分七項，標准中還規定了魚粉中不允許添加非魚粉原料的含氮物質，諸如植物油餅粕、皮革粉、羽毛粉、尿素、血粉等，亦不允許添加加工魚露後的廢渣。魚粉的衛生指標應符合GBl3078—2001飼料衛生標準的規定[2]，
具體指標有：砷、鉛、氟、黴菌、汞、鎘、亞硝酸鹽、滴滴涕、細菌總數等9項，SC／T350l—1996標准還規定了魚粉不得有蟲寄生，還單獨列出魚粉中金屬鉻(以六價鉻計)允許量小於10mg／kg。並把魚粉酸價作為強制性指標，在用戶或檢驗機構提出時才進行檢驗，其酸價指標有明確規定，最低等級的魚粉的酸價要求小於(等於)7mg KOH／g。以上所述是國家標准所規定的魚粉的具體技術指標要求。有關資料[3～6]介紹判定魚粉質量的營養指標還應測定真蛋白質、動物蛋白的胃
蛋白酶消化率，衛生指標還應測定乙氧基喹、甲醛等指標。
魚粉的摻假檢驗有許多項目，其中主要有摻羽毛粉、骨粉、木質素、鞣革粉、碳酸鈣粉、貝殼粉、蛋殼粉、澱粉質、粗纖維類物質、血粉、雜餅粉、尿素態氮、氨態氮等多項，摻假檢驗屬定性檢驗，SC／T350l—1996標准中規定有魚粉內雜質的顯微鏡鑒別方法，但只能作出雜質的確認，無法作出定量的結論，沒有確切的數據說明其質量情況，作者認為要做完上述檢驗是一件很麻煩的事，在日常的生產檢驗中，企業只要掌握好以下幾項定量分析的指標，就能較確切地反映出魚粉質量的情況，現將這些分析項目及操作方法概述如下：
2 在日常生產的質量控制中如何運用定量化學分析方法檢驗魚粉的質量
飼料生產廠家和經銷商如何運用定量化學分析方法檢驗和判定魚粉的質量，是一個至關重要的問題。作者從多年生產實踐中總結出定量化學分析檢驗魚粉的質量，主要抓好如下幾個檢測項目的檢驗。
2．1 粗蛋白質的檢驗
粗蛋白質的含量是檢驗魚粉質量的主要項目，國家行業標准以粗蛋白質含量作為衡量魚粉質量和分等級的主要指標，也是首要的檢測項目，按照GB／T6432[7]的規定測定粗蛋白質的准確度、精密度高，是經典的檢測方法，但該方法耗費試劑，消解時間長，資料介紹的強鹼直接蒸餾快速測定法、提高消化溫度快速測定法、H2SO4-H2O2快速消解測定法都是可以運用於生產實踐的測定方法。作者在生產實踐中常用H2S04—H2O2快速消解法測定粗蛋白，這是一種快速易於掌握的常規分析方法，與國家標准測定的結果基本一致。至於蒸餾裝置的運用方面，全量蒸餾裝置的准確度、精密度高，但蒸餾時間長；半微量蒸餾裝置的速度較快，但操作上要掌握好才能滿足准確度的要求。作者設計配套的快速定氮裝置[8]，是一種加熱抽氣吸收滴定裝置，集加熱蒸餾吸收於一體，不用冷卻水(即不用冷凝管)，可連續進行樣品的測定而不需要更換器皿，整個測定過程約10min完成；測定準確度、精密度也較高，在生產實踐應用效果良好(見圖1)。
2．2 真蛋白質的檢驗
在生產實踐中證明，光測定魚粉粗蛋白質一項指標是不能確定其質量等級的，因為粗蛋白質含量是通過測定總氮的含量，再乘以6．25的系數而得出來的，它不能排除非蛋白質的干擾，關於非蛋白氮的概述和檢測方法，許多資料都有介紹，從動物學的營養角度來說，測定真蛋白質的含量是較為重要的，目前測定真蛋白質的含量的方法還沒有列入國家標准，但許多出版的資料和國家教育部門的正規教材早有介紹，它們所介紹的測定方法的基本原理、操作步驟是大體一致的，其原理是試樣在硫酸銅溶液中，加入氫氧化鈉溶液呈鹼性，蛋白質即沉澱下來與非蛋白質的可溶性
含氮物質分離，測定沉澱物中的含氮量，換算成真蛋白質的含量。資料介紹魚粉真蛋白質占粗蛋白質含量的百分比為：進口魚粉大於80％，國產魚粉大於75％，國家標准對比此項指標目前還沒有作出規定，但作者認為在生產實踐中檢驗此項是非常重要的，作者曾檢驗過某生產廠家生產的魚粉，其粗蛋白質達55％～60％，而真蛋白質只有10％左右，這樣的魚粉絕對是劣質魚粉不能作為飼料使用。市場流通的一些質量較差的魚粉，其真蛋白質占粗蛋白質的比例往往達不到75％的要求。
2．3 胃蛋白酶消化率的測定
魚粉質量好壞的另一個重要的定量指標是胃蛋白酶消化率，它表示可被胃蛋白酶分解的蛋白質與粗蛋白質之間的比例。國家標准沒有規定魚粉的胃蛋白酶消化率，資料介紹進口魚粉要求≥90%。國產魚粉≥85％，有關資料和國家標准GB／T17811—1999對動物蛋白質飼料消化率的測定方法——胃蛋白酶法都作了介紹，測定這項指標能鑒別魚粉是否摻入其它高蛋白而又不容易吸收的原料，例如羽毛粉、皮革粉等。摻入了這些原料的魚粉，其粗蛋白質、真蛋白質含量都很高，但其胃蛋白酶的消化率往往是較低的，一般只有50％～60％，甚至有的只有30％～40％，值得注意的是衡量魚粉蛋白質質量的好壞，還應從粗蛋白質、真蛋白質、胃蛋白酶消化率這三項指標綜合來分析，這樣才能確定其質量情況。作者在生產實踐中檢驗過一些魚粉，其粗蛋白質達到5％—60％，胃蛋白酶消化率也達到85％以上，但其真蛋白質只有10％左右，這就說明了這些魚粉是劣質的魚粉。
2．4 其它定量分析項目的測定
作者認為魚粉的質量分析項目除了上述三項營養成分指標外，根據定性判定情況還可測定總、粗纖維、磷、鈣等幾項指標。總鉻含量的指標SC／T3501—1996標准作出了小於10mg／kg的規定，如果超過該項指標，則說明了魚粉摻人了鞣革粉，作者在日常檢驗工作中發現過多起本地區市場銷售魚粉的含總鉻量高達400—500mg／kg，這些魚粉是明顯摻假的劣質魚粉。酸價的指標國家標准也做出了規定，一些腐爛變質的魚粉其酸價都是比較高的。一般都會超過標准規定的7mg KOH／g的要求。對粗纖維的指標要求，國家標准沒有作出規定，資料介紹魚粉粗纖維含量為0．2％～1．5％， 如果魚粉摻入其它高蛋白質的植物原料，則粗纖維含量就會超過此含量范圍。關於磷、鈣的測定問題，有關專家認為某產地的魚粉其磷、鈣的含量都在一定的范圍，並符合一定的比例，過高過低都屬不正常的。
以上是作者從多年的檢驗工作中總結出來的實踐經驗。當然魚粉還有許多切實可行的摻假定性檢驗方法，但是作為檢測部門，定性分析往往不能確切地說明魚粉的具體質量問題，只有掌握好以上幾項定量分析方法，並在分析檢驗報告中具體列出真實數據，才能為生產和銷售單位作出一個確切的結論和判斷。