盐析过后盐离子怎样去

① 盐析法得到的蛋白质如何脱盐

常用的是凝胶过滤层析脱盐，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

蛋白质溶液中盐分子和蛋白质分子大小相差较大，盐分子较小，会随着层析流动相进入孔径较小的固定相，在层析中迁移速率小，而蛋白质分子尺寸较大，不能随流动相进入固定相，迁移速率大，首先从层析术中流出，实现脱盐。

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盐析作用的实质是高浓度的强电解质破坏蛋白质分子表面的水化膜，同时电解质离子中和了蛋白质所带的电荷，蛋白质的稳定因素被消除，使蛋白质分子相互碰撞而凝聚沉淀。

蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。

同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。

由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

② 盐析后的蛋白质,有哪些方法可以将蛋白质与盐分离

盐析是通过改变盐浓度来影响蛋白质的溶解度，是蛋白质的溶解度降低并析出，所以过滤就可以了。

③ 盐析法怎么去除杂质离子

首先，我们要明白盐析的原理，然后再来谈方法。
盐析的原理是利用蛋白质在较高浓度盐的溶液中，随着盐浓度的逐渐增加，由于蛋白质水化膜被破坏，溶解度下降而从溶液中沉淀出来。
一些公司提供的蛋白分离服务目的旨在从复杂的混合物中分离出单种类型的蛋白。蛋白质为两性物质，一定pH下表面显示一定的电性，由于经典斥力作用，使分子间互相排斥；同时由于蛋白质分子周围，水分子成有序排列，在其表面上形成了水化膜，水化膜层能保护蛋白质粒子，避免其因碰撞而聚沉。因此蛋白质等生物大分子物质是以一种亲水胶层形式存在于水溶液中，无外界影响时，呈分散状态。
当向蛋白质溶液中逐渐加入中性盐时，会产生2种现象：低盐情况下，随着中性盐粒子强度的增高，蛋白质溶解度增大，称盐溶现象。但是在高盐浓度时，蛋白质溶解度随之减小，发生了盐析作用。产生盐析作用的一个原因是由于盐离子与蛋白质表面具有相反电性的离子基团结合，形成离子对，因此盐离子部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间电排斥作用减弱而能相互靠拢、聚集起来。盐析作用的另一个原因是由于中性盐的亲水性比蛋白质大，盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀。
由此可见，盐析法的沉淀物中含有大量的盐析剂，也会吸附部分杂质。这部分杂质可采取洗涤的方法除去。

④ 盐析后的蛋白质有哪些方法可以将蛋白质与盐分离，得到纯度高的蛋白质

如果你对蛋白的纯度要求比较低，那你就先过滤，再透析吧（透析完最好对残余的盐离子进行检测一下，如果是硫酸铵就奈斯试剂）

纯度要求较高，那就先透析，再过柱子吧（一般使用离子交换色谱）

⑤ 高中化学: 盐析蛋白质怎么溶解

盐析
向蛋白质溶液中假如高浓度的中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出的现象,叫做盐析.
原理:破坏了蛋白质在水中存在的两个因素(水化层和电荷),从而使蛋白质沉淀.
中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；

盐溶
在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐[即稀浓度]，如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。这种现象称为盐溶。
稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合，具有保护蛋白质不易变性的优点，因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐，一般以0.15摩尔/升浓度为宜。缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析.

将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。
影响盐析的因素有：
（1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶解度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析。
（2）pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶介度最低。
（3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。
蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。 其中应用最多的硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大（25度时饱和溶液为4.1M，即767克/升；0度时饱和溶解度为3.9M，即676克/升），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来；另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好，不易引起蛋白质变性。硫酸铵溶液的pH常在4.5-5.5之间，当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。
蛋白质在用盐析沉淀分离后，需要将蛋白质中的盐除去，常用的办法是透析，即把蛋白质溶液装入透析袋内（常用的是玻璃纸），用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，因透析所需时间较长，所以最好在低温中进行。此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。
变性
能使蛋白质变性的化学方法有加强酸，强碱，重金属盐，尿素，乙醇，丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热，紫外线照射，剧烈振荡等。 重金属盐使蛋白质变性，是因为重金属阳离子可以和蛋白质中游离的羧基形成不溶性的盐，在变性过程中有化学键的断裂和生成，因此是一个化学变化。
强酸、强碱使蛋白质变性，是因为强酸、强碱可以使蛋白质中的氢键断裂。也可以和游离的氨基或羧基形成盐，在变化过程中也有化学键的断裂和生成，因此，可以看作是一个化学变化。
尿素、乙醇、丙酮等，它们可以提供自己的羟基或羰基上的氢或氧去形成氢键，从而破坏了蛋白质中原有的氢键，使蛋白质变性。但氢键不是化学键，因此在变化过程中没有化学键的断裂和生成，所以是一个物理变化。 加热、紫外线照射，剧烈振荡等物理方法使蛋白质变性，主要是破坏了蛋白质分子中的氢键，在变化过程中也没有化学键的断裂和生成，没有新物质生成，因此是物理变化。否则，鸡蛋煮熟后就不是蛋白质了。

⑥ 蛋白质盐析离心后除去上层清液沉淀中是否含有盐离子

肯定会有的。盐析后所得的蛋白质是粗蛋白，会含有盐析过程中残留的盐离子。

⑦ 分离提纯蛋白质时常需去盐,常用去盐的方法有哪些

蛋白质沉淀的定义： 蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。 蛋白质沉淀的方法： 盐析法 ——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化； 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的pH至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。影响盐析的因素包括：蛋白质浓度、离子强度和类型、PH值、温度等。针对温度这一条，需要强调：在低离子强度或纯水中，蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。但在高浓度下，蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降。在一般情况下，蛋白质对盐析温度无特殊要求，可在室温下进行，只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-四℃进行。 使用硫酸铵沉淀蛋白需要注意：硫酸铵中常含有少量的重金属离子，对蛋白质巯基有敏感作用，使用前必须用H二S处理：将硫酸铵配成浓溶液，通入H二S饱和，放置过夜，用滤纸除去重金属离子，浓缩结晶，一00℃烘干后使用。另外，高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性（PH=5.0左右），使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH。 有机溶剂沉淀法 ——多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化； 有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。该法优点在于：一）分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；二）沉淀不用脱盐，过滤较为容易；三）在生化制备中应用比盐析法广泛。但是，在常温下，有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变性。例如酒精消毒灭菌就是如此。因此，操作要求在低温下进行。有机溶剂的选择首先是能和水混溶，使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮，还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和二-甲基-二,四戊二醇等。 等电点沉淀法 ——此法单独应用较少，多与其它方法结合使用； 两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。如工业上生产胰岛素时，在粗提液中先调PH吧.0去除碱性蛋白质，再调PH三.0去除酸性蛋白质。利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性，不然盲目使用十分危险。不少蛋白质与金属离子结合后，等电点会发生偏移，故溶液中含有金属离子时，必须注意调整PH值。等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联合使用，以提高其沉淀能力。 重金属盐沉淀法 ——常用于抢救误服重金属盐中毒的病人； 许多有机物质包括蛋白在内，在碱性溶液中带负电荷，能与金属离子形成沉淀。根据有机物与它们之间的作用机制，可分为羧酸、胺及杂环等含氮化合物类，如铜锌镉；亲羧酸疏含氮化合物类，如钙镁铅；亲硫氢基化合物类，如汞银铅。蛋白质-金属离子复合物的重要性质是它们的溶解度对溶液的介电常数非常敏感，调整水溶液的介电常数（如加入有机溶剂），即可沉淀多种蛋白。沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜。重金属沉淀的蛋白质常是变性的，但若在低温条件下，并控制重金属离子浓度，也可用于分离制备不变性的蛋白质。临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的这种性质，抢救误服重金属盐中毒的病人，给病人口服大量蛋白质，然后用催吐剂将结合的重金属盐呕吐出来解毒

⑧ 透析后的蛋白质浓度和盐析后相比为什么会降低

这是两种不同的概念。
盐析：向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液版后,可以使蛋白质凝聚权而从溶液中析出。
既然是析出，就意味着蛋白局部浓度增大，最终形成不溶物。离心收获蛋白，可根据自己的需要将蛋白重新溶解，进而得到不同浓度的蛋白溶液。
透析（dialysis）：是通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。蛋白置于透析袋内，在透析过程，小分子盐类透出，同时因为盐浓度差，透析袋外侧的水渗入透析袋，所以袋内的蛋白被不断稀释，但最终会达到平衡。
所以，两者的蛋白浓度出现差异。

⑨ 如何去除RNA中的盐离子

RNA纯化及获得纯化要求RNA样品中不应存在对酶（如逆转录酶）有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子。避免其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染。排除DNA分子的污染。纯化方法及沉淀1、有机溶剂抽提法氯仿抽提：在使用RNA提取试剂进行RNA提取时，常使用氯仿进行抽提，以去除蔗糖、蛋白等杂质，并促进水相与有机相的分离，从而达到纯化RNA的目的。沉淀：氯仿抽提RNA后，一般采用异丙醇或乙醇来沉淀水相RNA。加入0.6倍水相体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇，室温沉淀20-30分钟，高速离心，可获得RNA沉淀。洗涤沉淀：加入无RNase的75％乙醇，将RNA沉淀振荡悬浮，使RNA沉淀中的盐离子被充分溶解。然后再离心10-30分钟，再次沉淀RNA。离心后，小心倒掉上清（注意不要倒出RNA沉淀），随后快速离心1-2秒，将残留在管壁上的乙醇收集到管底后，用小枪头吸净，超净台中风干1-2分钟（注意不要晾得太干，否则RNA沉淀不易溶解）。溶解沉淀：加入适量的RNase-freeddH2O溶解RNA沉淀。2、硅基质吸附法随着实验方法的改进，现已发展出一种采用吸附材料纯化核酸的方法。目前较常见的有：硅基质吸附材料、阴离子交换树脂和磁珠等。硅基质吸附材料因其具有可特异吸附核酸，使用方便、快捷，不使用有毒溶剂如苯酚、氯仿等优点，成为核酸纯化的首选。Solarbio公司总RNA提取试剂盒就是采用硅基质吸附达到RNA分离纯化目的。通过专一结合RNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，使样品在高盐条件下与硅胶膜特异结合，而蛋白、有机溶剂等杂质不能结合到膜上而被洗脱，盐类则被含有乙醇的漂洗液洗涤，最后用RNase-freeddH2O将RNA从硅胶膜上洗脱下来。一些特殊组织的RNA提取纤维组织：心脏/骨骼肌等纤维组织提取RNA的关键在于彻底破碎组织。这些组织细胞密度低，单位重量的组织中RNA含量较低，建议增加起始量。此外，一定要在液氮中将组织彻底磨碎。蛋白/脂肪含量高的组织：脑或植物脂肪含量高，酚/氯仿抽提后，上清含白色絮状物。必须用氯仿再次对上清进行抽提。核酸RNase含量高的组织：脾、胸腺等组织的核酸和RNase含量很高。在液氮中研磨，再快速匀浆，能有效灭活RNase，如加入裂解液后过于粘稠，酚/氯仿抽提不能有效分层，则加入裂解液可以解决此问题。多次酚/氯仿抽提可以去除残留的DNA。如果加入乙醇后马上有白色沉淀形成，表明可能有DNA污染，可以在核酸溶解后用酸性酚/氯仿再次抽提或者用DNaseI消化，去除DNA污染，植物组织和真菌组织：植物组织和真菌组织比动物组织更为复杂，一般选择在液氮条件下对样品进行研磨，以避免内源RNase降解RNA。如果RNA降解问题不能解决，大多数情况下是样品中含有的杂质所致。许多植物和真菌中所含杂质如多糖、多酚等都会残留，因为这些杂质分子与RNA有一些相似性，可与RNA同时沉淀或者吸附，因此在植物和真菌组织的提取中，需要用一些特别的步骤或者特别的试剂来去除多糖多酚等杂质的干扰和污染

⑩ 为什么盐析沉淀的蛋白质可以通过透析而脱盐

因为盐析不会是蛋白质变性失活，而透析是盐会电离形成离子，因此盐离子会通过半透膜出去，而蛋白质是大分子不会出去。
如此就得到目的了。