磁珠分选最后用过滤吗

① 要正确的选择磁珠需要注意什么

要正确的选择磁珠需要注意：

1、磁珠的单位是欧姆，而不是亨利，这一点要特别注意。因为磁珠的单位是按照它在某一频率 产生的阻抗来标称的，阻抗的单位也是欧姆。磁珠的 DATASHEET上一般会提供频率和阻抗的特性曲线图，一般以100MHz为标准，比如600R@100MHz，意思就是在100MHz频率的时候磁珠的阻抗相当于600欧姆。

2、普通滤波器是由无损耗的电抗元件构成的，它在线路中的作用是将阻带频率反射回信号源，所以这类滤波器又叫反射滤波器。当反射滤波器与信号源阻抗不匹配时，就会有一部分能量被反射回信号源，造成干扰电平的增强。

为解决这一弊病，可在滤波器的进线上使用铁氧体磁环或磁珠套，利用滋环或磁珠对高频信号的涡流损耗，把高频成分转化为热损耗。

3、不同的铁氧体抑制元件，有不同的最佳抑制频率范围。通常磁导率越高，抑制的频率就越低。此外，铁氧体的体积越大，抑制效果越好。

在体积一定时，长而细的形状比短而粗的抑制效果好，内径越小抑制效果也越好。但在有直流或交流偏流的情况下，还存在铁氧体饱和的问题，抑制元件横截面越大，越不易饱和，可承受的偏流越大。

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磁珠种类很多，制造商应提供技术指标说明，特别是磁珠的阻抗与频率关系的曲线。

有的磁珠上有多个孔洞，用导线穿过可增加元件阻抗（穿过磁珠次数的平方），不过在高频时所增加的抑制噪声能力不可能如预期的多，而用多串联几个磁珠的办法会好。

铁氧体是磁性材料，会因通过电流过大而产生磁饱和，导磁率急剧下降。大电流滤波应采用结构上专门设计的磁珠，还要注意其散热措施。

特别是在数字电路中，由于脉冲信号含有频率很高的高次谐波，也是电路高频辐射的主要根源，所以可在这种场合发挥磁珠的作用。

② 免疫磁珠分选后阳性细胞极少

博凌科为解答：以前曾遇到跟楼主类似的问题，后来增加了孵育时间（从原来的内15min增加到30min以上）和抗体的量（比说容明书增加了一倍），阳性细胞明显增 多。楼主就不要吝惜抗体了，做磁珠本来就是烧钱的，何必省这么点。还有就是上柱前后，可以取少量的细胞液涂片，进行细胞计数和在荧光显微镜下观察阳性细胞数。分别对分选前后进行细胞计数，对比分选前后细胞总数，看 是否大致相等，如果分选后细胞总数减少了，说明肯定是有细胞残留在分选柱内。在荧光显微镜下分别观察阳性细胞数，可以粗略知道阳性细胞的比例（我的做法 是：在荧光显微镜下拍照，取三个以上的不同视野，分别对总细胞和阳性细胞进行细胞计数，大致计算平均阳性率），这样就可以决定你分选后的阳性率是否跟预计 的是否大致一致的。如果发现分选后阳性率比分选前减低或者分选后细胞阳性率比预计的要低的多，说明肯定是标记过程或者分选过程出了问题，这时就没有必要进 行流式分析了，可以节约开支。

③ 免疫磁珠细胞分选的简介

把细胞用超级顺磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。
超顺磁性的MACS MicroBeads 的体积很小，其直径约为50nm，体积约小于真核细胞的一百万份之一，可与病毒的大小相比。标记细胞上的微型磁珠即使在扫描电镜照片上也几乎看不到。磁性抗体和磁性标记物间的反应可在几分钟内完成。
由于微型磁珠的体积极小，所以不会对细胞造成机械性压力，而且使孵育时间短，操作过程快。MicroBeads 形成一个稳定的胶体液，它们在磁场中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的组成成份（氧化铁和多糖）使其可被生物降解，且不会激活细胞或影响细胞的功能和活力，细胞的生理功能也不变。磁珠不需要去除，因此，阳性分选出的细胞（即磁性标记细胞）可立即用于分析和随后的实验。
用MACS 细胞分选系统可以分离出非常纯的细胞群体，而且有极好的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同，MACS分离细胞的纯度可达95%-99.9%，回收率>90% 。

④ 如何 磁珠分选 CD4+CD25-T细胞

都可以啊，看实验的要求和目的了。磁珠比较便宜，但是一次只能使用一种抗体。而流式可以多个指标同时染色，比如CD4，CD3双染。一般来说，用流式比较普遍一些。

⑤ 为什么分选cd4不用流式细胞仪 而用免疫磁珠

都可以啊，看实验的要求和目的了。磁珠比较便宜，但是一次只能使用一种抗体。而流式可以多个指标同时染色，比如CD4， CD3双染。一般来说，用流式比较普遍一些。

⑥ 为什么加入磁珠的量不同，筛选片段不同

商业化磁珠产品体系一般包含：磁珠、聚乙二醇（PEG）、盐离子等。基于SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization )技术， DNA在一回定浓度的PEG存在条件下，NaCl或答MgCl2促进条件下，DNA分子构象会发生急剧变化，会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团，与表面带负电荷的羧基磁珠结合。目前认为这种负负电荷间的作用是由于带正电荷的盐离子的作用（如Na+）。带负电磷酸基团借由解离的盐离子（如Na+）与羧基形成离子桥，使DNA被特异性吸附到羧基磁珠表面。利用磁珠的磁性，可通过外加磁场进行收集洗脱。

由于二代测序段短读长的局限性，因而最终的NGS文库需满足一定的长度要求。因而NGS建库中可能会分选特定长度区间的片段，满足上机需求。分选精度则是评估不同的磁珠投入比例分选得到的片段大小。一般以Agilent 2100仪器检测。

在特定磁珠比例（0.45×/0.15×）条件下，不同样本分选后片段分布范围集中在同一位置。较好的分选效果应该是顶部窄而圆润的独峰。

⑦ 干细胞磁珠分选和流式分选的区别

• 应管理员要求，我来比较一下流式分选和磁珠分选的优缺点，本来想列一个表，但表格可能表述不清楚，还是用通俗的语言写啊，个人体会欢迎拍砖。

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• 简单说一下原理：

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• 现在流式分选一般都是电荷式分选，即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷，液滴经过电极板，通过电场作用发生偏转，从而实现分选。

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• 磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞，然后把标记好的细胞过柱子（柱子周围连磁铁），带磁珠的细胞就留在柱子上，不带磁珠的细胞就流走了，从而实现分选。

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• 现在可以比较不同了：

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• 1、对细胞的刺激。 我觉得磁珠分选最大的优势就是对细胞的刺激要小一点。因为流式分选细胞首先要经过几十微米的喷嘴，然后要被充电，还要经过几千伏的电场，最后以几十米每秒的速度落到收集管里面，有些原代细胞就受不了，分选免疫细胞也要考虑细胞活化的影响；而磁珠分选相对来说就对细胞没什么刺激。

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• 2、设备要求。 磁珠分选小的实验室就能做，买一些专用的磁铁和柱子就可以了，而流式分选就需要分选型的流式细胞仪，都是几百万以上的。对操作员的要求来说，流式分选也要高一点，需要专门培训，需要注意的细节也要多很多。

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• 当然如果你周围有什么流式平台的话，磁珠分选和流式分选的成本应该是差不多的，流式分选一次大约1-2千（各地方不同），磁珠分选的柱子磁珠差不多也要烧这么多钱。

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• 3、试剂不同。 这个最好理解，流式分选用的是荧光素偶联的抗体，磁珠分选用的是磁珠结合的抗体。

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• 下面就要说下流式分选的优势了：

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• 4、分选纯度。这个肯定是流式分选的纯度高，磁珠分选如果操作好的话也能达到80-90%的纯度，但流式分选一般都能达到90％以上（样本制备和仪器条件正常的条件下）。

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• 5、多参数分选。流式细胞术很大的优势就是多参数，比如我可以分选CD4+CD25+CD127low的Treg，三色的一次就能分选。磁珠分选就必须先分CD4，再分CD25，更多参数的就没法进行。

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• 6、低表达群细胞分选。比如有些干细胞它的表达比例只有百分之零点几，比例太少磁珠分选无法操作，流式就可以把这些细胞富集起来。

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• 7、胞内荧光分选。流式分选在分子生物学中很大一部分应用就是分选GFP、YFP等阳性细胞，还有可以用Hoechst染精子的单倍体进行分选，这些针对胞内成分的分选也是磁珠分选无法实现的。

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• 另外要说明的是，现在都很流行磁珠分选和流式分选相结合的方法，像上面举的例子分选CD4+CD25+CD127low的Treg，如果仅用流式分选可能时间太长，纯度也有影响。那么可以选择先用磁珠纯化出CD4阳性的细胞，再过流式分选CD4+CD25+CD127low的群体，这样既节省了时间保证了活性，也可以提高分选的纯度。

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⑧ 细胞磁珠分选的 MACS Cell Separation Columns 可以重复使用吗

最好不要重复用。本来就是一次性的东西。

理论上来说，反复冲洗后柱子可以恢复原回样，但是之前过滤答的东西可能有些物质物理吸附在柱子上。之前分选中吸附柱子的杂质，是否会影响重复使用，不好说；分选效率也不好说。

之前我曾经用这个重复分过骨髓，还是能够分离出目的细胞，但是分离效率什么的没具体测过，没把握。

⑨ 免疫磁珠法可以分离Th1和Th2细胞吗

免疫磁珠法可以分离Th1和Th2细胞
(以下转载)
免疫磁珠法 (MACS)：免疫磁珠法是 2O世纪 80年代出现的技术方法。1983年 Ugelstad提出将免疫磁珠用于细胞分选，1990年，Mihenyi建立了 MACS。这一方法的核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群，具超强顺磁场的磁珠脱离磁场后立即消失磁性，这样就可以筛选或去除所标记的细胞 ，从而达到阳性或阴性选择细胞的目的。这一技术 目前已经广泛运用于细胞及分子生物学，分离基因、靶细胞及造血干细胞等。其分离效果得到了免疫荧光、PCR、FISH及 FACS等方法的确认。免疫磁珠可以有效地分选细胞，从而决定了这一方法在神经干细胞分选中应 用的技术可行性 。
CD4+亚群（Th细胞）根据自身所分泌的细胞因子，分为Th1和Th2两个亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN- γ和TNF-β 等细胞因子。Th1细胞主要介导细胞免疫反应，在诱发器官特异性自身免疫病，器官移植排斥反应和抗感染免疫中起着重要的免疫调节作用。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13。Th2细胞主要调节体液免疫反应，在诱发过敏反应中起着决定性的作用。