A. 【求助】超滤能否脱盐和浓缩一步完成啊
昨天有个millipore的技术人员就是这样说的~HarveyWang(站内联系TA)本人主要是从发酵液中提取酶,文献上一般的步骤是先用硫酸铵沉淀,然后透析,再用超滤浓缩,最后冷冻干燥, 这要看你需要做多大的体积了。:) (1)硫酸铵沉淀法:我的观点是,如果你1000 mL的发酵液的话,硫酸铵沉淀可以用,但是这浪费多少硫酸铵啊?!做学术研究可以,如果你的课题是计划做提取酶的工艺和中试的话,这种硫酸铵沉淀并不有太大的实用性。 (2)超滤步骤的选用要看你的酶溶液有多大的体积。 如果发酵液的酶的量并不是很浓的话,例如50 mL 10 mg/L的酶量,用这种超滤膜会损失掉大部分你的目地酶,都粘到膜上去了,很难洗下来(稀的NaOH可以)。不能轻信某品牌销售说的话,用用就知道了。如果你的浓缩液体积比较大,例如100-500 mL,酶的浓度也很高,这是可以用超滤膜的。 (3)对于小体积的脱盐透析,透析袋很好用的。这里是指10 mL-100 mL。从操作方便性上看,这个在小型试验中我最喜欢用。好简单啊。。。。 自己顶一个,解答的详细的有重奖!(金币可以再加) (1)发酵液的酶蛋白浓度大约是多少,纯度是多少?发个SDS-PAGE看看,注明上样量。 (2)硫酸铵沉淀后和透析后可上离子交换,这可以浓缩10-1000倍,还可以有纯化效果,然后再冷冻浓缩啊。HarveyWang(站内联系TA)哈哈哈哈,回帖就有金币拿:Ddaidai0124(站内联系TA)本人现在只是小规模的提取酶,马上要上发酵罐,需要大规模的提取酶液,不是做酶学性质,所以酶的纯度要求不高,和工业用酶的纯度差不多就可以了!希望大家推荐个适合工业化提取酶液的工艺,主要考虑成本问题.请版主帮忙在增加悬赏金币20个lvgl158(站内联系TA)起码知道 它的分子量 才能知道是否可以用同一个膜 如果小于一万可能就有点难度 可以先用少量的硫酸铵澄清 离心后 进行超滤 在超滤前 必须的保证液体 清澈hezhao999(站内联系TA)体积的在200ml以上用超滤仪,200ml以下可以用超滤离心管,如果不知分子量选用1000的膜完全可以了,如果知道分子量,则选择酶分子量1/5的超滤膜。zhaocy8903(站内联系TA)多大规模的发酵 多大规模的发酵
B. 用超滤膜或透析袋可否除去生物碱中的氯化钠
可以,生物碱系大分子,不能通过超滤膜或透析袋,而Na+与Cl-离子能。
C. 超滤与透析的区别
一、原理不同
超滤:超滤是血液通过机器泵或者血压流经体外滤器,在人工肾小球跨膜压的作用下,液体从压力高的一侧向压力低的一侧移动,通过对流的方式获得超滤液。
透析:透析依靠半透膜进行弥散和渗透。半透膜两侧的溶质浓度差就是驱动溶质移动的原动力,溶质从浓度高的一侧通过平衡膜向浓度低的一侧(弥散作用),水分子移向渗透浓度高的一侧(渗透作用)。
二、使用的膜不同
超滤:超滤膜的孔径在0.05 um–1 nm之间,主要用于截留去除水中的悬浮物、胶体、微粒、细菌和病毒等大分子物质。
透析:透析所使用的半透膜厚度为10-20微米,膜上的孔径平均为3纳米,所以只允许分子量为1.5万以下的小分子和部分中分子物质通过,而分子量大于3.5万的大分子物质不能通过。
三、装置不同
超滤:超滤装置一般由若干超滤组件构成。
透析:透析所使用的装置是血液透析器。
(3)超滤管可以代替透析袋吗扩展阅读
超滤的操作影响因素:料液流速、操作压力、温度、运行周期、进料浓度、料液的与处理、膜的清洗。
操作温度主要取决于所处理的物料的化学、物理性质。由于高温可降低料液的黏度,增加传质效率,提高透过通量,因此应在允许的最高温度下进行操作。
超滤膜透过通量与操作压力的关系取决于膜和凝胶层的性质。超滤过程为凝胶化模型,膜透过通量与压力无关,这时的通量称为临界透过通量。
D. 透析袋和超滤膜有什么不同
透析是生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜, 商品透析袋制成管状,其扁平宽度为23 mm~50 mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。
超滤是介于微滤和纳滤之间的一种膜过程,膜孔径在0.05um至1000分子量之间。超滤是一种能够将溶液进行净化、分离、浓缩的膜分离技术,超滤过程通常可以理解成与膜孔径大小相关的筛分过程。以膜两侧的压力差为驱动力,以超滤膜为过滤介质。在一定的压力下,当水流过膜表面时,只允许水及比膜孔径小的小分子物质通过,达到溶液的净化、分离、与浓缩的目的。
超滤膜一般分为板框式(板式)、中空纤维、管式、卷式等多种结构。
E. 化学合成中的透析能用超滤管代替吗
除蛋白中的小分子杂质,不知道选用哪种方法,透析袋... 以及蛋白损失量大(尤其不适合微量的样本溶液),所以目前在很多实验中都被超滤代替
F. millipore 超滤管区别
1、装量:0.5ML 4ML 15ML
2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K
G. 为什么超滤离心管那么贵,离心管与超滤离心管的区别
离心管就是抄一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。
离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。。。。常用于浓缩样品。
H. 离心管和离心超滤管分别是做什么用的,这个两个有什么区别!
离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀专.离心超滤管会有一个属类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理.常用于浓缩样品.
I. 抗体透析时夹透析袋的夹子开了,抗体进入了5mM PBS透析液中怎么办如何从透析液中提取抗体呢
这个基本没有办来法。
你透析源液多在体积?如果体积小一点的话。你先把透析液分装一下。-20冻起来.留下一小部分用于你的实验看一看。如果行的话就这样用。如果浓度太低,那就没办法。
当然,你也可以试着用A蛋白纯化柱或者G蛋白纯化柱试着回收,但一个这种柱子太贵,另一个,能否回收得到还是个问题。