粗蛋白加碱蒸馏为什么变成黑色

❶ 用5%预混料配置饲料，粗蛋白含量如何计算

用5%预混料配置饲料，如预混料是买的现成的，它应该附上配方，否则是配不准确的，也无法配出的，因鱼粉、玉米等基础料中含有钙磷，预混料中也含有钙磷，这样就不准了。

配的方法：用鱼粉、玉米等基础料，共占95%,将各种料所占粗蛋白含量相加,使其达到17%，同时代谢能也要达到11.50兆焦/kg。

通过变动各种料用量比例，达到各项营养指标符合标准。如玉米含粗蛋白8.0%,用量为40%，能提供粗蛋白量为8.0%×40%＝3.2%粗蛋白质量。

饲料原料中粗蛋白含量测定的影响因素：

1、粉碎

以豆粕为例：豆粕因为其生物结构特性：表皮较脆软易粉碎，但蛋白含量低；豆粕芯质地较硬难粉碎，蛋白含量高。故实际操作中会出现粉碎不均匀的现象。

2、样品称量

用分析天平准确称取0.2-0.5g（精确到0.0001g），以保证式样的含氮量在30-40mg。使滴定时盐酸滴定液的消耗体积保持在10-20ml之间，会较大程度上避免滴定液体积过小带来的误差，提高结果准确性。

浓缩饲料（粗蛋白含量≥40%），称量范围可在0.2-0.3g之间；配合饲料（粗蛋白含量≤20%），称量范围可在0.4-0.5g之间。

3、消化时间及温度

消化时间要达到4h，时间不充分会造成消化不完全，消化时间过长会造成蛋白的损失已及浪费能源。

要使消化温度达到420℃，使消化完全，温度低会造成消化不完全，温度过高会使氮气逸出影响结果。

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蒸馏时间对粗蛋白含量测定结果的影响：

把握好蒸馏时间，适宜的时间是5min。低于5min，结果蛋白质含量偏低；高于5min对结果没有明显改善，还会造成时间和资源的浪费。严格把控蒸馏时间，保证结果准确性。

加入碱的浓度：

选用40%的NaOH水溶液50ml，分5次加入，使其充分与试样溶液反应，从蓝绿色变成黑色。只有与NaOH溶液充分反应，才能使氨气充分逸出。

滴定原理：

用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。

在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-溴甲酚绿混合指示剂颜色变化来判断。测定出的含氮量是样品的总氮量，包括有机氮和无机氮。

❷ GB 6432-1986 饲料粗蛋白测定方法是什么呢

不知道，只知道现在用凯氏定氮法

一、原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4

反应式为：

2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04（其中CuSO4做催化剂）

2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中

反应式为:

(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O

3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量

反应式为：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3

二、试剂

所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

2.1硫酸铜。

2.2硫酸钾。

2.3硫酸。

2.42%硼酸溶液。

2.5混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

2.640%氢氧化钠溶液。

2.70.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液。

三、仪器

定氮蒸馏装置：如图所示。

凯氏定氮法仪器1.安全管

2.导管

3.汽水分离管

4.样品入口

5.塞子

6.冷凝管

7.吸收瓶

8.隔热液套

9.反应管

10.蒸汽发生瓶

四、操作方法

1、样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。

2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

3、向接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。

同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。

计算：

X=(（V1-V2）*N*0.014)/(m*（10/100）)*F*100%

X：样品中蛋白质的百分含量，g；

V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；

V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml；

N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；

0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；

m：样品的质量（体积），g（ml）；

F：氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。

五、注意事项

（1）样品应是均匀的。固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。

（2）样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。

（3）硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢（H2O2）2-3ml，促使氧化。

（4）在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。

（5）如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。

（6）加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。

（7）混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。

（8）氨是否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液是否为碱性。

（9）吸收液也可以用0.01当量的酸代表硼酸，过剩的酸液用0.01N碱液滴定，计算时，A为试剂空白消耗碱液数，B为样品消耗碱液数，N为碱液浓度，其余均相同。

（10）以硼酸为氨的吸收液，可省去标定碱液的操作，且硼酸的体积要求并不严格，亦可免去用移液管，操作比较简便。

（11）向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀物，这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀。有时铜离子与氨作用，生成深l蓝色的结合物[Cu(NH3)4]2+

（12）这种测算方法本质是测出氮的含量，再作蛋白质含量的估算。只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量。

❸ 粗蛋白检测时加碱不变黑

向消化液中加氢氧化钠溶液时,会产生蓝色溶液或黑色沉淀,这是由于消化液中的专铜离子属与氨生成铜氨配离子,或与碱生成氢氧化铜,氧化铜之故,这是正常现象.硫酸铜起催化剂和显色剂作用反之若颜色不改变,则说明碱加得不够,要补加.影响沉淀颜色的因素还有好多,例如环境的光线,一些不反应的杂物间杂到氢氧化物里面,产生的金属络合物等等.

❹ 在蛋白液中加氢氧化钠的目的是什么

粗蛋白消化和凯式定复氮制的原理：消化过程中加入浓硫酸和催化剂是为了将样品中的蛋白质转化成硫酸铵；定氮的过程加过量氢氧化钠是将硫酸铵在碱性条件下与氢氧化钠反应转化为氨气，随蒸汽蒸馏到吸收液中，然后用已知浓度酸来滴定，就可以换算出样品中的氮含量了。加氢氧化钠过程可以使催化剂中的Cu与OH反应成Cu（OH）2，氢氧化铜在高温下分解为CuO黑色的，所以通过黑色来判断碱是否过量，如果没有变颜色，说明溶液还是酸性的，需要再继续加氢氧化钠。

❺ 请教：为什么粗蛋白空白太高！

直接用硼酸接收液吸收空蒸出来的液滴，空白达到升皮1.10ml，且你所使用的是定氮仪，那么与此测定值相关的就只有如下几个因素： 1、硼酸不纯或被污染。可以加入甲基红-溴甲酚绿指示剂，如果呈酒红色，无问题，呈蓝色，有问题。估计你在做实验时已观察到无问题。 2、检查你所使用的定氮仪，有无碱倒吸情况。由于你的硫酸氨测定结果稳定，故此可能性不大，但不排除同时存在漏气（氨气）所产生的假象。 3、检查你定氮仪蒸汽发生器装置中所吸入的蒸馏水是否有闹纳问题，估计吵弯差最大的可能就在于此。 查看原帖>>

❻ 凯氏定氮法测定食品中蛋白质的操作要点及注意事项、常见问题解答汇总！

蛋白质作为生物体细胞组织的重要构成成分，在食物中起着至关重要的作用。它们是人体氮的主要来源，具有不可替代的重要性。蛋白质区别于其他有机化合物的一个重要标志是其含氮量。在检测食品中的蛋白质时，通常先测定食品中的总氮量，然后乘以蛋白质换算系数，以此得出蛋白质含量。凯氏定氮法，由Kieldahl于1883年首次提出，至今仍是标准检测方法。

凯氏定氮法的原理是：在样品中加入浓硫酸和催化剂，使其充分混合并加热消化，使样中的碳和氢被氧化为二氧化碳和水，而有机氮转化为硫酸铵。通过碱化蒸馏使氨游离，使用硼酸吸收后，以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即可得出蛋白质的含量。

样品消化过程中，浓硫酸的作用是脱水性和氧化性，使有机物中的碳、氢氧化为二氧化碳和水，并使蛋白质分解为氨，氨随后与硫酸结合生成硫酸铵。为了提高消化效率，通常会加入硫酸钾和硫酸铜作为催化剂。硫酸钾能提高溶液的沸点，而硫酸铜则作为催化剂，且能指示消化终点，当有机物完全消化后，溶液会呈现清澈的蓝绿色。

蒸馏过程中，消化液中的硫酸铵在碱性环境下转化成氨。为了防止水蒸气发生器中的氨气逸出，需要保持水的酸性。消化液中的氨通过硼酸溶液吸收，硼酸吸收氨的作用微弱酸性，不影响后续滴定时指示剂的变色反应。

滴定步骤中，待吸收完全后，使用硫酸或盐酸标准溶液进行酸碱滴定。滴定液的浓度直接影响结果准确性，必须按照要求进行配制和标定。滴定终点时，指示剂呈灰色。

在进行凯氏定氮法时，需注意以下几点：所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制；取样应具有代表性，取样前需充分混匀；样品称量放入凯氏烧瓶时，切勿使样品粘附在瓶颈部；消化过程中需不时转动凯氏烧瓶；消化脂肪或糖含量较高的样品时，应先消化加热并不断摇动；消化液浑浊或未澄清透明时，可先将凯氏烧瓶放冷至室温，再加入过氧化氢继续消化；加碱后需进行水封，避免氨逸出影响结果准确性；蒸馏时需保证蒸汽均匀、充足，防止发生倒吸；若加碱后消化液呈蓝色而未生成氢氧化铜沉淀，说明碱量不足，需适量补加碱；蒸馏前检查蒸馏装置是否漏气，使用碎瓷片或玻璃珠消泡，冷凝管下端要插入硼酸吸收液液面以下，蒸馏完毕后先提离液面，再蒸1min清洗管口，最后移开吸收瓶并关闭热源，避免发生倒吸。

对于凯氏定氮法，常见问题解答如下：消化过程中沾壁和黑色残留物，可通过在消化较完全时摇动定氮瓶解决；硫酸钾的作用是提高溶液沸点，加快有机物分解；硫酸铜作用为催化、指示消化终点以及蒸馏时碱性反应指示剂；混合指示剂必须临用时混合；蒸馏后需冲洗冷凝管下端，以防止产生结果误差；蒸馏装置检漏可通过滴加少量水在接口和瓶塞处观察气泡产生；硼酸使用量需按国标要求，10mL足够；滴定时消耗盐酸溶液量不宜更改国标浓度；空白消耗标准滴定液的体积即为试剂空白实验消耗的标准滴定溶液的体积；同时含有多种蛋白质，需按复合配方食品换算蛋白质系数。

总结，凯氏定氮法是一个经典且准确的检测方法，适用于食品中蛋白质的测定。然而，由于样品中可能含有的非蛋白质含氮化合物，凯氏定氮法测得的结果为样品中粗蛋白质含量，而非蛋白质含量。在实际实验操作中，应严格遵循标准规定进行每一步操作，以确保结果准确性。本文为作者日常实验总结所得，希望能为实验者提供一些帮助。

❼ 牛奶的粗蛋白跟粗脂肪怎么测

在检测牛奶中的粗脂肪含量时，罗紫一哥特里法是一种常用的方法。首先，通过氨—乙醇溶液破坏乳的胶体性质，使非脂成分溶解，脂肪则游离出来。然后，用乙醚与石油醚提取出脂肪，通过蒸馏去除溶剂，留下的残留物即为乳脂肪。

进行测试时，需要准备一系列仪器和试剂，包括抽脂瓶、25％氨水、96％乙醇、乙醚（不含过氧化物）及石油醚（沸程30—60℃）。取一定量的牛奶样品，加入适量氨水并充分混匀，在60℃水浴中加热5分钟后，再加入乙醇，冷却后加入乙醚和石油醚，静置后取上层液，蒸馏回收溶剂并干燥。

测试过程中需要注意一些事项。首先，乳类脂肪在乳中被酪蛋白钙盐包裹，处于高度分散的胶体分散系中，因此需要预先用氨水处理。其次，此方法适用于各种液状乳制品、炼乳、奶粉、奶油及冰淇淋等能在碱性溶液中溶解的乳制品。若无抽脂瓶，可用容积100ml的具塞量筒替代。

氨水加入后需充分混匀，否则会影响脂肪的提取效果。加入乙醇的作用是沉淀蛋白质，防止乳化，并溶解醇溶性物质，避免进入醚层。石油醚的加入是为了降低乙醚的极性，使其与水不混溶，从而只提取脂肪，使分层更加清晰。

对于已结块的乳粉，使用此方法测定脂肪含量时，结果往往偏低，因此在操作时需特别注意。