A. millipore 超濾管區別
1、裝量：0.5ML 4ML 15ML
2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K
B. 如何提取血清總蛋白
重症肌無力（myasthenia gravis， MG）主要是由乙醯膽鹼受體（acetylcholine receptor， AchR）抗體介導的，補體參與，細胞免疫依賴性，針對神經肌肉接頭處突觸後膜上乙醯膽鹼受體的自身免疫性疾病。對於MG的治療至今仍缺乏有效手段。蛋白質組技術利用其核心技術雙向電泳（two-dimen-sional gel electrophoresis， 2-DE）對組織或細胞總蛋白質進行分離〔1〕，並通過正常與疾病組織的差異表達蛋白比較，找到與該疾病相關的蛋白質分子。本研究通過建立脾腎虛型重症肌無力患者和正常人血清總蛋白質的雙向電泳圖譜，尋找有明顯差異性表達的蛋白，對差異表達的蛋白進行鑒定和研究，為進一步研究MG發病機制以及MG診斷治療提供實驗基礎。
1 材料與方法
1.1 血清採集 MG患者全血來自2004～2005年就診於遼寧中醫學院附屬醫院的門診患者。根據典型臨床表現、新斯的明試驗、低頻重復電刺激及單纖維肌電圖等確診，無其他自身免疫性疾病，未經其他免疫抑制治療，並參照1994年版《中醫病證診斷療效標准》辨證為脾腎虛型。正常人血清取自同時期健康志願者。-70 ℃冰箱冷凍保存備用。
1.2 主要試劑 固相pH梯度干膠條IPG strip（Amersham公司產品， 非線性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（膽醯胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸鹽｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫蘇糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙醯胺（iodoacetamide， IAA），丙烯醯胺（acrylamide）、甲雙丙烯醯胺（N， N'-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），過硫醯胺（am-monium persulfate， APS），三羥甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate， SDS）均為Bio-Rad公司產品。瓊脂糖為華美生物公司產品。其他試劑均使用國產分析純試劑。所有溶液均用MilliQ水配製。
1.3 主要儀器 高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司產品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司產品;P-2000分光光度儀，Hitachi公司產品;SE-600電泳儀，Amersham公司產品;純水裝置，Millipore公司產品;GS-710光密度掃描儀，Bio-Rad公司產品;冷卻水循環系統，Cole-Parmer公司產品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美國Bruker-Daltonics公司產品;LCQ Deca XP Plus，美國Thermo Finnigan公司產品。
1.4 雙向電泳
1.4.1 血清總蛋白質的提取及定量 血清-70 ℃反復凍融4次後，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column處理去除高豐度蛋白。使用Agilent 5K超濾管進行濃縮除鹽，凍干回收的樣品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制劑）進行復溶，並採用考馬斯亮藍法進行蛋白質定量。
1.4.2 等電聚焦 自-20 ℃取出的膠條，室溫下平衡10 min，以500 μg上樣量在每份樣本中加入上樣緩沖液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及標准蛋白質分子，上樣於泡脹槽中，加入礦物油覆蓋。程序設置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恆溫20 ℃。等電聚焦電泳後IPG膠條在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚藍0.002%和DTT 100 mg）中於振盪器上振盪 15 min; 然後置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙醯胺代替100 mg DTT）同樣於振盪器上振盪15 min。
1.4.3 SDS-PAGE垂直電泳 採用12.5%的均勻SDS2聚丙烯醯胺凝膠（水23.2 ml，30%丙烯醯胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl緩沖液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，膠總體積80 ml）。將平衡後的IPG膠條移至凝膠的上方，膠條一端放入低分子量蛋白質標准，0.5%的瓊脂糖封膠。上下槽加入電極緩沖液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始電流為每塊膠40 mA，電泳20 min，然後以每塊膠60 mA電流，直至溴酚藍前沿。
1.4.4 銀染色 電泳結束後，採用硝酸銀染色法，通過固定，硝酸銀染色，顯影，停顯及脫色，至背景清晰。
1.5 圖像分析 每個樣品常規進行3次二維電泳，用GS-710光密度掃描儀對電泳後的膠圖分別進行掃描，所得掃描圖像輸入計算機，採用Image-master軟體對圖像進行背景消減、蛋白質點檢測和校正，獲取蛋白質點的位置坐標和表達量等分析。選取 Ratio ≥1.5的蛋白質點認為有差異。所有數據的統計分析均採用SPSS 12.0軟體，統計學分析採用 t 檢驗。
1.6 基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜分析 用手術刀片切下膠上目標條帶，進行切膠、膠上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脫鹽後點樣，行基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飛行管長2.7 m，加速電壓 20 kV ，反射電壓23 kV）。將第1級質譜得到的肽片段質量指紋圖譜、肽質量指紋圖譜與第2級質譜得到的肽序列信息一起用來檢索蛋白質資料庫，找出匹配的蛋白質。
1.7 資料庫檢索 將質譜鑒定所得的肽質量指紋譜（peptide mass fingerprinting， PMF）數據於Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）軟體搜索相應的庫。搜索使用的資料庫為IPI human蛋白庫（SEQUEST結果過濾參數為:當Charge+1，Xcorr≥1.9;當Charge+2，Xcorr≥2.2;當Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗餘蛋白庫（rendant data-base）。檢索參數為胰蛋白酶解;氨基酸固定修飾方式為脲甲基半胱氨酸;模式為單同位素峰;肽片斷最大誤差控制在100 ppm;肽片斷最大分子量誤差為±0.5 Da;每個肽允許有1個不完全裂解位點。
2 結果
2.1 脾腎虛型重症肌無力患者血清雙向電泳圖譜 的建立及分析 經2-DE技術及銀染色後，得到了兩組血清的雙向凝膠電泳圖，並於相同的條件下重復實驗3次。在正常對照組細胞蛋白質組雙向電泳圖譜上可觀察到1 463±179個蛋白點，而脾腎虛型重症肌無力組可見到1 508±89個蛋白點。
C. millipore是哪個國家的
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millipore
['milipɔ:]
n. 微孔
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密理博
密理博（Millipore）作為全球領先的生命科學公司，為生物科學研究和生物制葯研發提供前沿的技術、工具和服務，攜手客戶共同面對人類健康問題的挑戰。
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美國密理博
微孔
超濾管
短語
Millipore Corporation 密理博公司 ; 原受讓人
millipore filtr 微孔濾膜
millipore membrane 微孔濾膜
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21世紀大英漢詞典
Millipore ['milipɔ:]
n. 【生物化學、商標】微孔過濾器[亦作 millipore]
以上來源於：《21世紀大英漢詞典》
同近義詞
n. 微孔
micropore
雙語例句權威例句
Standard MF-Millipore Membranes, white, plain.
標准混合纖維素微孔膜，白色，光面。
www.deepbluexm.com
The paper introces the principle, component and common breakdown ofMILLIPORE ultrapure water system.
本文介紹了密理博超純化水系統的簡單原理、 組成及常見故障。
www.chemyq.com
Thesecond, the human hemoglobin was isolated and purified with the ultra-filtersystem (MILLIPORE company) in order to get depuration procts.
其次，採用Millipore公司的超 濾裝置分離提純人血紅蛋白，得到血紅蛋白純品；
http://dj.iciba.com
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網路
millipore
密理博(Millipore)公司成立於1954年，總部位於美國麻省，在全世界設有47個辦事處，為100多個國家提供產品和技術服務。目前全球雇員超過5800人，在美國、法國和日本等國家擁有7家大型生產工廠，主要生產過濾膜及膜過濾產品。 20世紀80年代，密理博公司進入中國市場。先後在香港、北京、上海、廣州及成都設立了辦事機構，並於2000年4月在上海浦東外高橋保稅區建立了密理博（上海）貿易有限公司。 為了更好地滿足中國用戶的需求，密理博中國主頁於2006年11月向廣大用戶開放，介紹密理博中國有限公司的最新動態，力求為用戶打造專業的產品與服務信息交流平台。
D. 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。