① 什麼是凝膠色譜法為什麼膠凝膠色譜法
凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術,是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由於設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。
凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術,是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由於設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜法主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。 GFC一般用於分離水溶性的大分子,如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列,洗脫溶劑主要是水。凝膠滲透色譜法主 凝膠色譜法圖示
要用於有 機溶劑中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分布分析及分離,常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。凝膠色譜不但可以用於分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布,同時根據所用凝膠填料不同,可分離油溶性和水溶 性物質,分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來,凝膠色譜也廣泛用於分離小分子化合物。化學結構不同但相對分子質量相近的物質,不可能通過凝膠色譜法達到完全的分離純化的目的。凝膠色譜主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對勿子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用,不但應用於科學實驗研究,而且已經大規模地用於工業生產。
② 生物凝膠色譜法
凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術,是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由於設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜法主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。 GFC一般用於分離水溶性的大分子,如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列,洗脫溶劑主要是水。凝膠滲透色譜法主
凝膠色譜法圖示
要用於有 機溶劑中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分布分析及分離,常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。凝膠色譜不但可以用於分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布,同時根據所用凝膠填料不同,可分離油溶性和水溶 性物質,分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來,凝膠色譜也廣泛用於分離小分子化合物。化學結構不同但相對分子質量相近的物質,不可能通過凝膠色譜法達到完全的分離純化的目的。凝膠色譜主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對勿子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用,不但應用於科學實驗研究,而且已經大規模地用於工業生產。
分子篩效益
一個含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經凝膠色譜柱時,各分子在柱內同時進行著兩種不同的運動:垂直向下的移動和無定向的擴散運動。大分子物質由於直徑較大,不易進入凝膠顆粒的微孔,而只能分布顆粒之間,所以在洗脫時向下移動的速度較快。小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進入凝膠顆粒的微孔中,即進入凝膠相內,在向下移動的過程中,從一個凝膠內擴散到顆粒間隙後再進入另一凝膠顆粒,如此不斷地進入和擴散,小分子物質的下移速度落後於大分子物質,從而使樣品中分子大的先流出色譜柱,中等分子的後流出,分子最小的最後流出,這種現象叫分子篩效應。
凝膠色譜系統
具有多孔的凝膠就是分子篩。各種分子篩的孔隙大小分布有一定范圍,有最大極限和最小極限。分子直徑比凝膠最大孔隙直徑大的,就會全部被排阻在凝膠顆粒之外,這種情況叫全排阻[1]。兩種全排阻的分子即使大小不同,也不能有分離效果。直徑比凝膠最小孔直徑小的分子能進入凝膠的全部孔隙。如果兩種分子都能全部進入凝膠孔隙,即使它們的大小有差別,也不會有好的分離效果。因此,一定的分子篩有它一定的使用范圍。綜上所述,在凝膠色譜中會有三種情況,一是分子很小,能進入分子篩全部的內孔隙;二是分子很大,完全不能進入凝膠的任何內孔隙;三是分子大小適中,能進入凝膠的內孔隙中孔徑大小相應的部分。大、中、小三類分子彼此間較易分開,但每種凝膠分離范圍之外的分子,在不改變凝膠種類的情況下是很難分離的。對於分子大小不同,但同屬於凝膠分離范圍內各種分子,在凝膠床中的分布情況是不同的:分子較大的只能進入孔徑較大的那一部分凝膠孔隙內,而分子較小的可進入較多的凝膠顆粒內,這樣分子較大的在凝膠床內移動距離較短,分子較小的移動距離較長。於是分子較大的先通過凝膠床而分子較小的後通過凝膠床,這樣就利用分子篩可將分子量不同的物質分離。另外,凝膠本身具有三維網狀結構,大的分子在通過這種網狀結構上的孔隙時阻力較大,小分子通過時阻力較小。分子量大小不同的多種成份在通過凝膠床時,按照分子量大小「排隊,凝膠表現分子篩效應。
③ 凝膠色譜法的原理
凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由於設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用,不但應用於科學實驗研究,而且已經大規模地用於工業生產。 根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,凝膠色譜又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。 分離原理: 一個含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經凝膠色譜柱時,各分子在柱內同時進行著兩種不同的運動:垂直向下的移動和無定向的擴散運動。大分子物質由於直徑較大,不易進入凝膠顆粒的微孔,而只能分布顆粒之間,所以在洗脫時向下移動的速度較快。小分子物質除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進入凝膠顆粒的微孔中,即進入凝膠相內,在向下移動的過程中,從一個凝膠內擴散到顆粒間隙後再進入另一凝膠顆粒,如此不斷地進入和擴散,小分子物質的下移速度落後於大分子物質,從而使樣品中分子大的先流出色譜柱,中等分子的後流出,分子最小的最後流出,這種現象叫分子篩效應。具有多孔的凝膠就是分子篩。 各種分子篩的孔隙大小分布有一定范圍,有最大極限和最小極限。分子直徑比凝膠最大孔隙直徑大的,就會全部被排阻在凝膠顆粒之外,這種情況叫全排阻。兩種全排阻的分子即使大小不同,也不能有分離效果。直徑比凝膠最小孔直徑小的分子能進入凝膠的全部孔隙。如果兩種分子都能全部進入凝膠孔隙,即使它們的大小有差別,也不會有好的分離效果。因此,一定的分子篩有它一定的使用范圍。 一是分子很小,能進入分子篩全部的內孔隙;二是分子很大,完全不能進入凝膠的任何內孔隙;三是分子大小適中,能進入凝膠的內孔隙中孔徑大小相應的部分。大、中、小三類分子彼此間較易分開,但每種凝膠分離范圍之外的分子,在不改變凝膠種類的情況下是很難分離的。對於分子大小不同,但同屬於凝膠分離范圍內各種分子,在凝膠床中的分布情況是不同的:分子較大的只能進入孔徑較大的那一部分凝膠孔隙內,而分子較小的可進入較多的凝膠顆粒內,這樣分子較大的在凝膠床內移動距離較短,分子較小的移動距離較長。於是分子較大的先通過凝膠床而分子較小的後通過凝膠床,這樣就利用分子篩可將分子量不同的物質分離。另外,凝膠本身具有三維網狀結構,大的分子在通過這種網狀結構上的孔隙時阻力較大,小分子通過時阻力較小。分子量大小不同的多種成份在通過凝膠床時,按照分子量大小排隊,凝膠表現分子篩效應。
④ 凝膠色譜法的簡要介紹
凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術,是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術,由於設備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜法主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。 GFC一般用於分離水溶性的大分子,如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列,洗脫溶劑主要是水。凝膠滲透色譜法主要用於有 機溶劑中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分布分析及分離,常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。凝膠色譜不但可以用於分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布,同時根據所用凝膠填料不同,可分離油溶性和水溶 性物質,分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來,凝膠色譜也廣泛用於分離小分子化合物。化學結構不同但相對分子質量相近的物質,不可能通過凝膠色譜法達到完全的分離純化的目的。凝膠色譜主要用於高聚物的相對分子質量分級分析以及相對勿子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛採用,不但應用於科學實驗研究,而且已經大規模地用於工業生產。
⑤ 有沒有人裝過GE的凝膠過濾色譜柱
凝膠過濾色譜法:解析度較高,但是上樣量僅為柱體積的1%,而且對流速也有版嚴格的許可權制。
離子交換色譜法:根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質,但是解析度沒有凝膠過濾高。
親和層析法:根據生物分子的特異性分離目的蛋白,特異性很高,但是配件容易丟失 適合含有特異性的標簽的或者抗體。
疏水色譜:根據疏水性來分離蛋白質,缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低,所以應用范圍受到限制,適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質。
⑥ 大孔樹脂吸附技術和凝膠過濾色譜的區別
凝膠過來濾色譜法:解析度較高,但是上源樣量僅為柱體積的1%,而且對流速也有嚴格的限制。離子交換色譜法:根據目的蛋白質表面所含有的氨基酸殘基帶有的凈電荷分離蛋白質,但是解析度沒有凝膠過濾高。親和層析法:根據生物分子的特異性分離目的蛋白,特異性很高,但是配件容易丟失適合含有特異性的標簽的或者抗體。疏水色譜:根據疏水性來分離蛋白質,缺點是有的蛋白質在高鹽中溶解度降低,所以應用范圍受到限制,適合蛋白質表面含有較多疏水性氨基酸殘基的疏水性蛋白質。
⑦ 凝膠滲透色譜與高效液相色譜有什麼區別
都屬於液相色譜,主要不同是:
1 GPC流動相是純有機溶劑,為正相色譜;HPLC可用含量不超過95%的水溶液,為反相色譜。
2 GPC的色譜原理是體積排阻; HPLC的色譜原理是吸附-洗脫。
⑧ G-75凝膠過濾色譜圖出現拖尾現象,怎麼回事
拖尾峰可能是你的柱子裝填的不好,裝填的填料太過疏鬆就會有拖尾峰.
如果柱子裝填沒有問題,可能是你的樣品本身的結構可能不是非常均一,有部分聚體的結構也有可能出現拖尾峰的情況.