『壹』 什麼是超濾液
這個問題是這樣的，你首先要知道滲透壓分為晶體滲透壓和膠體滲透壓。在機回體內，晶體滲透答壓是無機小分子維持的，它保持細胞內外的水平衡；膠體滲透壓是血漿蛋白維持的，它維持血容量，即維持血液和組織液的平衡，所以營養不良等原因造成的膠體滲透壓下降會使患者出現水腫。超濾液指的是血液第一次被腎小球濾過形成的液體，即原尿，之後超濾液在腎小管中會被稀釋，其中的蛋白質、鈣離子、水分、鈉離子等絕大多數會重吸收，最終形成的才是排出體外的尿液，正常人的尿液中是檢不出蛋白質和鈣離子的！說了這么多，你可以知道超濾液中的蛋白質決定超濾液的膠體滲透壓大小。
『貳』 電泳怎麼跑酶或者說怎麼跑蛋白
酶是蛋白質，蛋白質電泳可以用SDS-PAGE。電泳完後可以用考馬斯亮藍染色，也可以用銀染，還可以用該酶抗體做western-blot。
『叄』 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。
『肆』 sds page 跑蛋白的菌液處理（具體見說明，請勿復制）
marker看你買的是復什麼樣的，有的還是粉末制狀呢，那個用水溶解後也需要加loading buffer沸水浴處理的。不過現在賣的很多都是那種直接點樣的。說明書一般都有說的，一般10微升。
loading buffer就是上樣緩沖液的英文。
另外，你的實驗步驟裡面，你打錯了，第三步是10000rpm*2min，我非常肯定這個步驟一定是高速離心。
第一個步驟，我們一般取1ml菌液離心10000rpm*5min吧，具體記得不太清楚了。然後加loading buffer好像是120微升，1倍的，100微升也OK啦，然後沸水浴5到10分鍾，然後高速離心，點樣。為了避免串樣，維持各點樣孔之間的那種壓力吧，具體怎麼說我記不清楚了，反正就是防止別的孔的樣品跑到空白泳道，很難看的。所以在空白處也點上1倍的loading buffer
你按照一個固定的數字做下來，點樣的時候開始要摸索一下，多點幾個樣，看看點多少微升合適，因為你的菌液濃度什麼的我們也不知道。你要有條件，可以給蛋白定量，因為跑電泳蛋白濃度過高會很難看，濃度低了看不清楚。
『伍』 350kDa的蛋白怎麼跑western，求具體步驟
western和蛋白分子量無關，常規步驟就可以了。350KD算比較大的蛋白，你做PAGE的時候，把膠配稀點，8%的就可以了。轉膜的時候，需要注意的是轉的時間需要長一點，具體多長時間根據你的方法（干轉還是濕轉）和儀器品牌決定，這需要自己摸條件。
『陸』 SDS PAGE電泳跑蛋白膠跑成這個樣子。。。求問原因。。電壓150v時電流只有13mA...謝謝
看圖中短板上的泡沫，應該沒漏。這種哭臉形狀，可能是電壓過高，散熱不及時造成的。如果電泳緩沖液用了很長時間，粘稠、起泡，也會使電流變小。
『柒』 跑sds-page前怎麼處理蛋白樣品
(1) SDS-PAGE凝膠抄配製 SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配製，也可以使用碧雲天生產的SDS-PAGE凝膠配製試劑盒(P0012A)。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配製各種濃度SDS-PAGE的配方。(主要分為濃縮膠和分離膠，配方可自己上...
『捌』 350kDa的蛋白怎麼跑western,
western和蛋白分子量無關,常規步驟就可以了.350KD算比較大的蛋白,你做PAGE的時候,把膠配稀點,8%的就可以專了.轉膜的時候,需要屬注意的是轉的時間需要長一點,具體多長時間根據你的方法（干轉還是濕轉）和儀器品牌決定,這需要自己摸條件.
『玖』 跑蛋白的樣品緩沖液每次都得現配嗎
跑蛋白來是跑蛋白電泳（自SDS-PAGE）嗎?
如果是SDS-PAGE的樣品緩沖液（一般是用5×Loading buffer）的話
不需要現配的,可以配置完成後放置在-20度保存.只需要在使用前加入2-ME就可以了
如果是加好2-ME的Loading buffer可以在室溫下保存1個月左右
『拾』 7KD蛋白怎麼跑電泳才能看到
7KD蛋白怎麼跑電泳才能看到
蛋白Marker：一般14 kD到200 kD 高分子量 低分子量 廣譜 多肽 未染回色 預染 500UL 雙色預染
一般不答知道跑的蛋白質分子量就用廣譜的
蛋白質電泳方法：據帶電量分離的等電點電泳(二維電泳)，根據分子量分的是用SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳（常用）
雙向電泳(2DE)
原理：2DE就是第一向採用等電聚焦分離，第二向為SDS-PAGE分離。由於2DE是依據蛋白質的兩種不同性質，即等電點和分子量進行分析，因此解析度遠高於其他任何一種單一的電泳方法，是目前分析混合蛋白質樣品最有效的手段。