『壹』 HPLC用於分析生物鹼應該注意什麼
1、生物鹼HPLC的分析模式
根據HPLC分析生物鹼時所使用固定相性質、流動相組成及極性不同，其分析模式大致可分為：正相吸附色譜法、正相硅膠反相洗脫系統色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法。
正相吸附色譜法：通常以硅膠基質為吸附固定相，流動相為不同極性的有機溶劑或不同比例混合溶劑，分離過程主要依靠生物鹼與吸附劑吸附作用的差異實現，為了改善分離，提高溶洗脫能力，常於流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等。該法應用於生物鹼分析的文獻較少。
正相硅膠一反相洗脫系統色譜法(NS-RE)：通常採用未經化學改性的普通硅膠為固定相，以極性有機溶劑(甲醇、乙腈)和高pH緩沖溶液為流動相，分析包括生物鹼在內的鹼性葯物。該法柱效高，峰形對稱，是簡便有效的方法。在實際應用中，流動相的組成是主要的影響因素，流動相中除含有調節pH 的緩沖鹽外，有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子。因此，影響保留與分離的主要因素是流動相pH、競爭離子種類及濃度 。
反相高效液相色譜法(RP-HPLC)：近年來RP-HPLC應用於生物鹼分析方面的文獻很多，已成為常規的方法。但普通存在色譜峰的展寬拖尾，導致分離效能低，這主要緣於生物鹼結構中鹼性氮原子與固定相未鍵台酸性硅醇基的相互作用。即使是所測生物鹼在較低濃度下，仍常產生峰漂移及峰對稱性差等現象。針對此缺陷，研究工作者從適用於鹼性物質分析的反相填料的設計選擇，流動相中緩沖鹽的使用，流動相添加劑(離子對試劑、有機胺改性劑)等幾方面進行了較為廣泛細致的研究，並取得了一定的進展。
離子交換色譜法：該法以陽離子交換樹脂為固定相，利用質子化的生物鹼陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達到分離生物鹼的目的，有關生物鹼高效液相離子交換色譜法的應用報道較少。
2、生物鹼HPLC分析檢測方法
目前，生物鹼HPLC分析檢測方式多以紫外法為主，在定性分析方面，紫外法檢測選擇性低，定性專屬性差。隨著二極體陣列檢測器使用的普及，顯著提高了液相分析檢測的選擇性。此外，根據生物鹼的理化性質，其它檢測方式如熒光法、電化學法、蒸發光散射法亦得到了應用。近年來，液相色譜-質譜聯用技術已應用於生物鹼分析，增強了對生物鹼的定性檢測能力，提高了檢測靈敏度。新的介面技術及離子化方法的發展．使得HPLC-MS在生物鹼的分析中得到較廣泛的應用，近年的文獻報道日漸增多。
3、生物鹼HPLC分析的樣品處理方法
因生物鹼常具有一定的鹼性，一般常用鹼化液液萃取或酸水提取等方法從中草葯、中成葯及生物樣品等較復雜體系中提取純化，以達到富集和去除雜質的目的。近年來，固相萃取(SPE)技術及超臨界流體萃取等現代提取純化技術亦應用於樣品的提取純化。
『貳』 請問一下什麼叫做反相色譜常有的高效液相色譜是屬於哪個類型的
反相色譜中，固定相非極性，流動相極性。
典型的流動相一般是水或水系緩沖液與甲醇、乙腈或四氫呋喃的混合物。典型的固定相是用脂肪烴硅完化的硅膠鍵合相，其它用於反相色譜的基質有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基質。反相色譜的性能還受殘留的硅醇基的活性的影響。硅醇基與洗脫物的極性基團作用。因此，根據硅醇基的活性不同，填料顯示出不同的選擇性。而且，常能觀察到鹼性物質在硅醇基活性高的填料上產生拖尾峰。修飾硅醇基活性的一個辦法是封端，即用硅烷化試劑把硅醇基轉變成三甲基甲硅烷基基團。不過，即使是作了封端，基質表面的硅醇基密度還是比鍵合配基的密度大。硅醇基的活性也和硅膠的預處理（基質滅活）、硅膠純度有關。鹼性分析物的色譜分析推薦使用高純度硅膠基質、充分封端的鍵合相。未封端的填料在許多應用中有可以獲得不同選擇性的優點。
使用帶有離子電荷的固定相，使根據洗脫物電荷進行分離成為可能。對於硅膠基質的離子交換填料，離子基團通過標準的硅烷化技術鍵合到硅膠表面。對於聚合物基質的離子交換填料，離子交換基團分布於交聯聚合物的整體（through the matrix）。有四種離子交換填料：強/弱陽離子交換填料和強/弱離子交換填料。弱離子交換填料的特徵是電量與pH值有函數關系。以羧酸基為功能基的離子交換劑是弱陽離子交換劑的代表。弱陰離子交換劑由一級、二級、三級銨為功能基。大部分強離子交換劑的電荷與pH值無關。四級銨形成強陰離子交換劑，而磺酸基構成了強陽離子交換劑。所有這些離子交換基團都可以在聚合物基質上見到，主要用於分離生物大分子。除了弱陽離子基團外，其它功能基都可以鍵合到硅膠上。
反相色譜柱 C18、C8柱
『叄』 HPLC用於分析生物鹼應該注意什麼
1、生物鹼HPLC的分析模式
根據HPLC分析生物鹼時所使用固定相性質、流動相組成及極性不同,其分析模式大致可分為：正相吸附色譜法、正相硅膠反相洗脫系統色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法.
正相吸附色譜法：通常以硅膠基質為吸附固定相,流動相為不同極性的有機溶劑或不同比例混合溶劑,分離過程主要依靠生物鹼與吸附劑吸附作用的差異實現,為了改善分離,提高溶洗脫能力,常於流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等.該法應用於生物鹼分析的文獻較少.
正相硅膠一反相洗脫系統色譜法(NS-RE)：通常採用未經化學改性的普通硅膠為固定相,以極性有機溶劑(甲醇、乙腈)和高pH緩沖溶液為流動相,分析包括生物鹼在內的鹼性葯物.該法柱效高,峰形對稱,是簡便有效的方法.在實際應用中,流動相的組成是主要的影響因素,流動相中除含有調節pH 的緩沖鹽外,有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子.因此,影響保留與分離的主要因素是流動相pH、競爭離子種類及濃度 .
反相高效液相色譜法(RP-HPLC)：近年來RP-HPLC應用於生物鹼分析方面的文獻很多,已成為常規的方法.但普通存在色譜峰的展寬拖尾,導致分離效能低,這主要緣於生物鹼結構中鹼性氮原子與固定相未鍵台酸性硅醇基的相互作用.即使是所測生物鹼在較低濃度下,仍常產生峰漂移及峰對稱性差等現象.針對此缺陷,研究工作者從適用於鹼性物質分析的反相填料的設計選擇,流動相中緩沖鹽的使用,流動相添加劑(離子對試劑、有機胺改性劑)等幾方面進行了較為廣泛細致的研究,並取得了一定的進展.
離子交換色譜法：該法以陽離子交換樹脂為固定相,利用質子化的生物鹼陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達到分離生物鹼的目的,有關生物鹼高效液相離子交換色譜法的應用報道較少.
2、生物鹼HPLC分析檢測方法
目前,生物鹼HPLC分析檢測方式多以紫外法為主,在定性分析方面,紫外法檢測選擇性低,定性專屬性差.隨著二極體陣列檢測器使用的普及,顯著提高了液相分析檢測的選擇性.此外,根據生物鹼的理化性質,其它檢測方式如熒光法、電化學法、蒸發光散射法亦得到了應用.近年來,液相色譜-質譜聯用技術已應用於生物鹼分析,增強了對生物鹼的定性檢測能力,提高了檢測靈敏度.新的介面技術及離子化方法的發展．使得HPLC-MS在生物鹼的分析中得到較廣泛的應用,近年的文獻報道日漸增多.
3、生物鹼HPLC分析的樣品處理方法
因生物鹼常具有一定的鹼性,一般常用鹼化液液萃取或酸水提取等方法從中草葯、中成葯及生物樣品等較復雜體系中提取純化,以達到富集和去除雜質的目的.近年來,固相萃取(SPE)技術及超臨界流體萃取等現代提取純化技術亦應用於樣品的提取純化.