質粒提取為什麼用純水

1. 為什麼能在細菌破碎後的細菌提取液中分離到質粒DNA

首先要知道，質粒是 共價，閉合，環狀的DNA（cccDNA）。以常用的鹼裂解法為例：
當菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液後，質粒的cccDNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，而其他形式存在的DNA則會依然以絮狀形式存在；離心時質粒DNA留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉澱下來。

2. 質粒提取加的是什麼水

到了這一步基本沒太大影響了，跑完電泳看下條帶，DNA又不是RNA那麼脆弱，只要條帶對應該就沒問題，按步驟切膠回收就可以了

3. 用TE稀釋質粒與用超純水稀釋有什麼不一樣的

正如樓上所說，來TE溶液有利於源保證核酸物質的穩定性，但我猜測你想知道其中的道理。我做補充如下：1）T（tris）是弱鹼性，不容易導致核酸水解（DNA在酸性下更易自行水解）；2）E（EDTA）可螯合DNA 水解酶的輔酶鎂離子，抑制DNase活性，阻止DNA被酶解。但由於TE（主要是E）對一些 精密實驗 比如酶切 甚至PCR 有負面影響（也作為酶的抑制劑），多使用很稀的TE 如0.1X 的TE作為buffer。
我們實驗室做法：若很短時間就用掉的DNA溶液 就用純水溶解直接做實驗， 此時DNA沒時間降解；若是長時間要保存的 就用10倍稀釋的TE保存成濃的DNA溶液，用前稀釋一下降低EDTA的影響。 供參考，祝順利！

4. 用TE稀釋質粒與用超純水稀釋有什麼不一樣的

和ddH2O相比，TE溶液有利於保證核酸物質的穩定性，便於長時間的保存。個人經驗：TE配置不合格的話會影響下游的一些操作，一般都是直接用ddH2O。

5. 細菌提質粒最後一步為什麼要加入無rna酶得水.

只要是純水就可以了，在無金屬離子輔助下，DNA酶一般不起作用。
要沒RNA酶，可能是為了之後的實驗考慮吧。。。

6. 什麼情況下需對提取的質粒進行純化

在製作酶譜、測定序列、制備探針等實驗中需要高純度、高濃度的質粒DNA，為此需要大量提取質粒DNA。大量提取的質粒DNA一般需進一步純化，常用柱層析法和氯化絕梯度離心法。
另外，鹼法提取的質粒DNA即使用RNA酶處理，仍會含有少量RNA。當有些試驗需無RNA污染的DNA製品時，則需進行進一步純化。一般常用Sepharose2B或Sepharose4B進行純化。

7. 質粒提取的基本原理

質粒抽提方法即去除 RNA，將質粒與細菌基因組 DNA分開，去除蛋白質及其它雜質，以得到相對純凈的質粒。
實驗原理
提取質粒DNA的方法有很多種，從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為鹼裂解法、煮沸法、牙簽法等，各種不同的方法各有其優缺點，根據不同的實驗目的可以採用合適的提取方法。詳細內容請參考《分子克隆實驗指南》。[1] 另外，復旦大學生化與分子生物學實驗室一篇文章，提供了質粒提取機理的詳細解說。
鹼裂解法
人們使用鹼與SDS裂解法從E. coli（大腸桿菌）中分離制備質粒DNA已有30多年的歷史。將細菌懸浮液暴露於高pH值的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質變性，將質粒DNA釋放到上清中。
盡管鹼性溶劑使鹼基配對完全破壞，閉環的質粒DNA雙鏈仍不會彼此分離，這因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。只要OH-處理的強度和時間不要太過，當pH值恢復到中性時，DNA雙鏈就會再次形成。在裂解過程中，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體DNA會相互纏繞成大型復合物，後者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用K+取代Na+時，復合物會從溶液中有效地沉澱下來，離心除去變性劑後，就可以從上清中回收復性的質粒DNA。
在SDS存在的條件下，鹼水解是一項非常靈活的技術，它對E. coli的所有菌株都適用，並且其細菌培養物的體積可以從1-500mL以上。
煮沸法
煮沸法是將細菌懸浮於含有Triton X-100和能消化細胞壁的溶菌酶的緩沖液中，然後加熱到100℃使其裂解。加熱除了破壞細菌外壁，還有助於解開DNA鏈的鹼基配對，並使蛋白質和染色體DNA變性。但是。閉環質粒DNA鏈彼此不會分離，這是因為它們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結構。當溫度下降後，閉環DNA的鹼基又各就各位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體DNA和蛋白質，就可從上清中回收質粒DNA。煮沸裂解法對於小於15kb的小質粒很有效，可用於提取少至lmL（小量制備），多至250mL（大量制備）菌液的質粒，並且對大多數的大腸桿菌菌株都適用。但對於那些經變性劑、溶菌酶及加熱處理後能釋放大量碳水化合物的大腸桿菌菌株，則不推薦使用該法。這是因為碳水化合物很難除去，會抑制限制酶和聚合酶活性。若碳水化合物的量很大，在CsCl-溴化乙錠梯度離心中會使超螺旋質粒DNA帶變得模糊不清。大腸桿菌菌株HBl01及其衍生菌株（其中包括TGl）能產生大量的碳水化合物，不適於用煮沸法裂解。
質粒小提試劑盒
用於大腸桿菌中質粒DNA的小量提取，它結合了優化的鹼裂解法，以及方便快捷的硅膜離心技術，具有高效，快捷的特點，能在30min內完成全部操作。利用試劑盒能從1-5mL過夜培養的大腸桿菌菌液中純化得到10-40μg高質量的質粒DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此質粒DNA可直接用於DNA序列分析，各種酶促反應，PCR以及部分細胞系的轉染等。

8. 提取質粒的實驗中，為什麼加入溶液二溶液變得粘稠了

原因：當改變的DNA和蛋白質加入溶液II，細菌溶解，蛋白質和DNA變性和溶解。這使得整個溶液非常粘稠，拉出了絲。

將溶液添加到基礎處理中。NaOH主要用於裂解細胞和釋放DNA，因為在強鹼性條件下，膜由雙層膜結構轉變為微膠囊結構。SDS與NaOH配合使用，增強NaOH的強鹼性，SDS作為陰離子表面活性劑，破壞脂質雙層膜。

這一步的注意事項：

首先，不要太久，因為基因組DNA片段在這樣的鹼性條件下會慢慢分解。

第二，加入溶液2後，操作一定要輕柔，劇烈混合會導致基因組DNA污染。

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注意事項：

1、 洗脫緩沖液在60℃洗脫時，洗脫緩沖液或去離子水效果更好。

2、 細菌應該完全懸浮。如果菌體沒有完全懸浮，加入溶液II後，剩餘菌體將成為難以完全分解的菌體。加入溶液III後，仍有一部分蛋白質殘留在溶液中，成為蛋白質殘渣的最大來源。

3、測量DNA溶液體積，按lg/ mL准確加入固體CsCl，加熱至30℃溶解。輕輕地混合溶液直到鹽溶解。

9. 質粒抽提實驗中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什麼作用

溶液Ⅱ主要成分為氫氧化鈉(NaOH)和SDS。DNA在pH5～9的溶液中是穩定的，但當pH＞12或pH＜3時，就會引起DNA雙鏈之間氫鍵的解離而變性。溶液Ⅱ中NaOH濃度為0.2mob/L，加入溶液Ⅱ後，該系統的pH為12.0～12.6，因而促使染色體DNA與質粒的變性解離成單鏈。SDS是一種陰離子去垢劑，它的主要作用有：①溶解細胞膜上的脂肪與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜；②解聚細胞中的核蛋白，使蛋白質與DNA分開；③SDS能與蛋白質結合成為SDS-蛋白質復合物，使蛋白質變性而沉澱；④SDS能抑制核酸酶的作用，防止對DNA的降解。
(3)溶液Ⅲ的主要成分為KAc(pH4.2)。用pH4.2的KAc溶液是為了調整溶液pH至中性，使變性的質粒DNA能夠復性，並能穩定存在。而高鹽的3mol/L醋酸鉀(KAc)有利於變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白質復合物凝聚而沉澱。

10. DNA可不可以溶於水啊

DNA可溶於水。我們提取質粒很多時候是直接用純水溶解的。

樓上不要亂說。