反相色譜柱為什麼不能用純水

A. 色譜柱為什麼不能用水洗

你說的太籠統，到底是氣相色譜柱，還是液相色譜柱？是其中的哪一類型的？
有的色譜柱是可以用水洗的，這要看固定相的類型。

B. 何為正相色譜及反相色譜在應用上有何特點

正相色譜基本上可以看作液固吸附色譜。其柱填料為吸附劑，表面有活性吸附點。溶劑和溶質分子可以吸附在活性中心。反相色譜是流動相極性大於固定相極性的色譜。

反相色譜的應用特點：反相介質性能穩定。分離效率高，它能分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾體、脂類、脂肪酸、碳水化合物、生物鹼等含有非極性基團的物質。

正相色譜法的應用特點：全多孔型的微球型或無定型硅膠，然而，球形硅膠更適合於有效分離。用球形硅膠填充的正相柱具有較好的滲透性、較低的操作壓力和較好的穩定性。

(2)反相色譜柱為什麼不能用純水擴展閱讀：

反相色譜中最常用的有機溶劑有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氫呋喃、異丙醇和二氧六環等常用作改性劑。有機溶劑的梯度也會影響解析度。梯度越小，解析度越大。

正相色譜的保留機理類似於吸附過程。極性樣品分子和溶劑分子吸附在柱填料表面的極性基團（吸附劑）上。對於常用於正相的氰基、氨基或二醇基固定相柱，吸附中心通常為鍵合配體或硅烷。在使用硅膠時，吸附位點為硅烷醇(一SiOH)。

C. 苯基鍵合硅膠色譜柱柱為什麼不能用純水沖洗

這個問題比較難回答。因為注意的東西比較多，比如：
首先是色譜柱的方向問題。大多數色譜柱會標明方向。這個傻子都知道，安裝的時候要順著方向安裝。不過也有一些色譜柱沒有方向，這些是雙相填料的色譜柱。第一次使用時的方向就是它的方向。不過所有的色譜柱都是，一旦開始使用，就不要轉換方向。這樣會損毀色譜柱。
第二個是柱壓問題。一般的色譜柱壓力最好不要超過20MPa，壓力過高會加速損毀色譜柱。
第三，柱溫。色譜柱溫度最好不要超過45℃。也是會加速損毀色譜柱。
還有pH值。色譜柱的pH值范圍是不同的。大多數色譜柱的pH值范圍是4-7左右。有些偏向酸性，有些偏向鹼性的，還有一些pH值廣泛的。這些按照說明書操作即可。
除此之外，色譜柱還有別的一些需要注意的事情。
首先，鍵合硅膠色譜柱分成幾種。比如C18、C8、苯基柱這些的使用方法都差不多。是反相色譜柱。它們的流動相中還有大量的水，還有無機鹽。這個時候需要注意，無機鹽是不能夠長時間留在色譜柱裡面的。色譜柱最好保存在純甲醇或者純乙腈裡面。但是無機鹽不能溶於純甲醇或者純乙腈。所以中間要過渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色譜柱比較特殊，比如氨基柱、氰基柱。他們是可以用於正相，也可以用於反相。所以使用的時候注意區分。配置流動相的時候也避免使用大量的水相。
其他的暫時想不到。或者說你想問的問題可以提出來，大家討論討論。

D. 純水是否能通過高效液相色譜柱

看是什麼柱子，有一些做糖的柱子就是要求純水做流動相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有機相，以防對色譜柱傷害

E. 為什麼普通C18色譜柱不能用純水沖洗

容易引起疏水坍塌，把強保留物質沖出來，會毀了柱子的，所以水相不能超過95%，最開始的梯度淋洗也是高
有機相
到高水相，但是不是純水相。

F. 如何反向沖洗液相色譜柱

轉載」《分析測試網路網》實用資料！色譜柱沖洗一點意見！！

主要針對的反向色譜柱而講！

1.色譜柱簡介

最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性添充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等)也有使用,正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用於離子交換色譜;凝膠或高分子多孔微球等填充劑用於分子排阻色譜;手性鍵合填充劑用於對映異構體的拆分分析。

填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含炭量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充，直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在15nm(1nm=10埃)以下的填料適合於分析分子量小於 2000的化合物，分子量大於2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用PH2~8的流動相。當PH大於8時，可使載體硅膠溶解;當PH小於2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用PH大於8的流動相時，應選用耐鹼的填充劑，如採用高純硅膠為載體並具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等;當需使用PH小於2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。

2.色譜柱的沖洗體積確定

一般情況都是沖洗色譜柱10-20倍柱體積，具體可以這樣計算，根據柱內徑和柱長算出色譜柱內體積。短柱一般時間就是30分鍾、長柱一般沖洗60分鍾就可以了。舉例：內經為4.6mm、長250mm，其柱內體積=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分鍾，折中取15被柱內體積，則沖洗時間就出來了。

3.色譜柱沖洗

沖洗色譜柱最好在分析結束後，用流動相沖洗到基線平穩，然後用10%左右的有機溶劑沖洗色譜柱，主要是沖洗干凈流動相中的緩沖鹽。然後用100有機溶劑沖洗。最好是梯度變化沖洗。分析物可能為一些能溶解在水中，有些需要用純溶劑才能完全去除。如果分析時間緊迫一定要把鹽分沖洗干凈，一般情況不要用純水沖洗色譜柱，特別是反向柱的填料的鍵合集團容易折斷，對色譜柱造成損傷。色譜柱被使用在某種程度上就是開始被污染了，所以色譜柱的壽命和我們使用的情況有很大的關系。雖然被污染但是對我們分析目標物沒有造成影響我們也就是認為還能用。

4.色譜柱維護沖洗

常見故障篩板阻塞，解決辦法是：a、過濾流動相;b、過濾樣品;c、運用在線過濾或保護柱。

柱頭塌陷解決方法是：：a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子);b、使用保護柱 ;c、使用預柱(飽和色譜柱)。

前面談到的不管用什麼溶劑一定要加入一定比例的用機溶劑，主要是考慮到一些疏水基團在有機溶劑裡面容易伸展利於沖洗其包藏的雜質等。當我們的色譜柱在壓力和柱效下降時，我可以拆開泵近端柱頭的螺絲取出篩板，清洗篩板以及觀察裡面的填料，如填料污染嚴重，就要進行挖取一部分被污染的填料然後用其他廢棄的柱子相同填料來填補，用新的篩板或清洗好的篩板擰好螺絲。然後沖洗觀察柱壓變化和測試柱效等。

5.特殊沖洗
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。

清洗方法：

1.未使用緩沖鹽：每天分析完成後，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。

2. 使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱 60min。

3.補救方法：

水——乙腈——氯仿(或異丙醇)——乙腈——水

每一步以 1.0ml/min 流速反向沖洗色譜柱 60min。

希望大家提出更好的建議和辦法。

朋友可以到行業內專業的網站進行交流學習！
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G. 在沖洗高效液相C18反相柱的時候，為什麼不能用純水

相C18色譜柱（即憎水柱子）如果用純水沖洗後，如果立即停泵則由於其憎水（疏水專）的緣故使得柱子內屬的水因而流失掉，長時間停泵使得柱子幹掉（變干），會造成柱子內固定相填料表面鍵合的硅烷基結構塌陷（也說成是失去支撐倒下），柱子就這樣報廢了。那麼一旦沖洗柱子用了純水相怎麼辦呢？誒！不要驚慌，只要你不停泵，上述情況不會立即發生，我們只要保證最後用有機相沖洗柱子，停泵後使柱子內留存的是有機相，就無大礙，

H. 離子色譜柱能用純水沖洗嗎，這樣是否會影響柱子的性能。

按看說明書或咨詢色譜柱廠商，防止損害色譜柱，離子柱都不便宜，小心為上。
用純水短時間內沖洗色譜柱，通常不會對色譜柱造成較大的損傷，但如果長時間用水沖洗色譜柱則
可能引起固定相流失和相塌陷現象，所以若非必要請盡量避免用純水沖洗色譜柱，建議在水中加入一定
量的甲醇或乙腈進行沖洗，通常水的含量<90%不會對色譜柱造成任何影響。
原因分析：
首先，由於目前所用的色譜柱大多以硅膠為基質，硅膠的溶解特點是在純水中的溶解度比在含有一
定濃度有機溶劑的流動相中要大得多，所以長時間的用純水沖洗會導致固定相的流失，引起柱效下降。
其次，對於常規的 C18 柱而言，由於C18 長鏈與水是不互溶的，C18 長鏈之間的相互作用力大於
C18 與水分子的作用力，長時間的用水沖洗，使得C18 長鏈之間相互靠近，水流的沖刷，導致相互聯結
的C18 長鏈倒伏在硅膠基質的表面，對疏水性物質的保留能力下降，即相塌陷。針對用純水沖洗容易出
現相塌陷的現象，有些廠家推出了純水柱（如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱），這種純水柱可以用純
水作流動相而不會產生相塌陷，這對只溶於純水的樣品的分析提供了一個很好的選擇。
第三，如使用過含緩沖鹽的流動相的色譜柱，用純水沖洗，並一定能將緩沖鹽完全洗去。因為，由
於緩沖鹽難溶於有機溶劑，C18 反相柱中用的填料是在硅膠表面上接上許許多多的C18 長鏈，相當於一
個疏水的有機相，而硅膠基體被有機物質包裹著，所以用純緩沖鹽水溶液做流動相時也許緩沖鹽不容易
到達硅膠基質，不至損害基體。但所用的流動相通常會含一部分有機溶劑，而且這些有機溶劑與C18
長鏈是互溶的，因此有機溶劑的加入增強了流動相滲入硅膠基質的能力，能使部分緩沖鹽達到硅膠基質。
同樣的道理，用純水沖洗只能洗掉表面的緩沖鹽，而滲入深處的緩沖鹽則仍然殘留在那裡。所以最好在
水中加入部分有機溶劑進行沖洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要視分析
時使用的流動相來定，原則上，用於沖洗的流動相中水的比例應該等於或高於（緩沖鹽用後清洗的情況，
推薦使用「等於」）分析時所用流動相中水的比例。

I. 反相與正相色譜法有何區別

反相還是正相，是根據流動相相對於固定相的極性而言的。 流動相極性強於固定相的，稱作反相色譜；流動相極性弱於固定相的，稱作正相色譜。

反相色譜流動相的極性強，容易帶著極性分子走，而留下非極性分子。這主要用於非極性樣品的分離。常用的高壓液相色譜都是這種，也有人喜歡說反相液相色譜，其實是一個意思，就是顯得博學一點。
正相色譜固定相極性強，容易把極性分子留下，故主要用於極性樣品的分離。如離子色譜。

實際應用好像沒有太注意正相還是反相，倒是都很注意柱子能承受什麼樣極性的物質。反相液相色譜柱不可以用強極性的純水，都是要加入至少5%的有機溶劑來弱化水的極性。 正相的離子色譜柱則堅決不可以進入有機物質。但是氣相色譜實際也是一種正相色譜，卻往往要求不可以有水進入。

J. 液相色譜裡面能只用水做流動相嗎

這個得看你的色譜柱。
一般的反相色譜柱不耐純水。如果用的話會特別費。專
我當初做過屬一個實驗，流動相是0.025mol/L的KH2PO4，色譜柱是C18柱，大概半個月換一根吧。
特殊的色譜柱可以耐受純水，但是可能分離效果不好，峰型也不一定好。

另外，純水很 容 易 長微生物。一般純凈水開瓶之後在25℃放置1天，過濾的速度就會緩慢，放三天就渾濁了。如果你的流動相是純水，那麼系統、色譜柱很容易堵塞。所以不建議使用。