1765半微量定氮蒸餾器

『壹』 半微量蒸餾裝置的原理與用法是什麼

原理：

其原理以分離雙組分混合液為例.將料液加熱使它部分汽化,易揮發組分在蒸氣中得到增濃,難揮發組分在剩餘液中也得到增濃,這在一定程度上實現了兩組分的分離。

兩組分的揮發能力相差越大,則上述的增濃程度也越大。在工業精餾設備中,使部分汽化的液相與部分冷凝的氣相直接接觸,以進行汽液相際傳質,結果是氣相中的難揮發組分部分轉入液相,液相中的易揮發組分部分轉入氣相,也即同時實現了液相的部分汽化和汽相的部分冷凝。

液體的分子由於分子運動有從表面溢出的傾向.這種傾向隨著溫度的升高而增大。

如果把液體置於密閉的真空體系中,液體分子繼續不斷地溢出而在液面上部形成蒸氣,最後使得分子由液體逸出的速度與分子由蒸氣中回到液體的速度相等,蒸氣保持一定的壓力。

此時液面上的蒸氣達到飽和,稱為飽和蒸氣,它對液面所施的壓力稱為飽和蒸氣壓.實驗證明,液體的飽和蒸氣壓只與溫度有關,即液體在一定溫度下具有一定的蒸氣壓。這是指液體與它的蒸氣平衡時的壓力,與體系中液體和蒸氣的絕對量無關。

(1)1765半微量定氮蒸餾器擴展閱讀：

半微量蒸餾裝置主要是半微量凱氏蒸餾器。

半微量凱氏蒸餾器包括：磨口蒸餾瓶、磨口冷凝管、帶有氮氣球的彎支管，所述蒸餾瓶具有夾層套，蒸餾瓶底部為廢液出口，蒸餾瓶一端外壁設有瓶頸支管，蒸餾瓶的中部外壁設有帶塞的磨砂杯，所述帶有氮氣球的彎支管分別連接磨口蒸餾瓶和磨口冷凝管。

半微量凱氏蒸餾器，其加液處採用磨砂塞使用方便，適用於微量與常量之間的半微量，用水蒸氣蒸餾法，對有機物作氮的含量分析測定，蒸餾液純度高

半微量凱氏蒸餾器，其特徵在於，包括：磨口蒸餾瓶、磨口冷凝管、帶有氮氣球的彎支管，所述蒸餾瓶具有夾層套，蒸餾瓶底部為廢液出口，蒸餾瓶一端外壁設有瓶頸支管，蒸餾瓶的中部外壁設有帶塞的磨砂杯，所述帶有氮氣球的彎支管分別連接磨口蒸餾瓶和磨口冷凝管。

參考資料來源：網路-蒸餾

『貳』 亞甲基藍光度法

方法提要

沉積物試樣中的硫化物同鹽酸反應，生成的硫化氫隨水蒸氣進入乙酸鋅溶液中被吸收，生成硫化鋅。吸收液中的硫離子在酸性條件和三價鐵離子存在下，與對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽反應生成亞甲基藍，在波長650nm處測定其吸光度。

方法適用海洋、河流沉積物中硫化物的測定。檢出限w(S)為0.3×10^-6。

儀器

硫化氫發生-吸收裝置(圖76.1)。

半微量定氮蒸餾器(圖76.2)，冷凝器下端附有可以取下的連接管。

分光光度計。

圖76.1 硫化氫發生-吸收裝置

圖76.2 半微量定氮蒸餾器(凱氏)

試劑

乙酸鋅溶液(100g/L)稱取50g乙酸鋅［Zn(Ac)₂·2H₂O］加水溶解並稀釋至500mL，搖勻。

碘酸鉀標准溶液c(1/6KIO₃)=0.0100mol/L稱取0.3567g預先在120℃烘乾2h並在乾燥器中冷卻的碘酸鉀(KIO₃)，加水溶解後移入1000mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用前配製。

碘溶液c(1/2I₂)=0.0100mol/L稱取10g碘化鉀(KI)溶於50mL水中，加入1.27g碘片(I₂)，溶解後，移入1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

無水碳酸鈉。

乙酸。

澱粉溶液(5g/L)稱取1g可溶性澱粉(化學純)，用少量水調成糊狀，加入100mL沸水，攪勻。繼續煮至透明。冷卻後，加入1mL乙酸，稀釋至200mL，盛於試劑瓶中。

硫代硫酸鈉標准溶液c(Na₂S₂O₃)≈0.01mol/L稱取25g硫代硫酸鈉(Na₂S₂O₃·5H₂O)，用新煮沸並冷卻的水溶解，加入2gNa₂CO₃，溶解後轉入棕色試劑瓶中，加水至10L，混勻。置於陰涼處，8～10天後標定其濃度。

標定移取15.00mL碘酸鉀標准溶液［c(1/6KIO₃)=0.0100mol/L］，沿壁注入100mL碘量瓶中，用少許水淋洗瓶壁，加入0.5gKI，用刻度移准管沿瓶壁注放1mL(1+3)H₂SO₄，塞好瓶塞，輕搖混勻，用少許水封口，在暗處放置2min，半開瓶塞，沿瓶壁加50mL水，在不斷搖動下，用硫代硫酸鈉標准溶液滴定至溶液呈淺黃色，加入1mL澱粉溶液，繼續滴定至藍色剛剛消失為止。計算硫代酸鈉溶液的濃度(mol/L)。

硫化物標准儲備溶液的制備及標定使用硫化氫發生裝置(見圖76.1)，向200mL10g/LNa₂S溶液中緩緩地滴加5.0mL(1+2)HCl，產生的硫化氫氣體被氮氣帶出，用500mL乙酸鋅溶液［Zn(Ac)₂·2H₂O，1g/L］吸收生成的硫化鋅。將吸收液用中速定量濾紙過濾，混勻。此過程應在通風櫃中進行。

標定移取20.00mL硫標准儲備溶液於250mL碘量瓶中，依次加40mL水、20.00mL碘溶液、10mL(1+9)HCl，混勻。於暗處放置5min，用硫代硫酸鈉標准溶液滴定至溶液呈淺黃色。加入1mL澱粉溶液，繼續滴定至藍色剛剛消失。

同時移取20.0mL水，按上法進行空白滴定。

按下式計算硫化物標准儲備溶液的濃度:

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:ρ_(S2-)為硫的質量濃度，μg/mL;V₂為滴定空白溶液消耗的硫代硫酸鈉標准溶液的體積，mL;V₁為滴定硫化物標准溶液消耗的硫代硫酸鈉標准溶液的體積，mL;c為硫代硫酸鈉標准溶液的濃度，mol/L;V為硫化物標准儲備溶液的體積，mL。

硫化物標准溶液ρ(S^2-)=10.0μg/mL移取一定體積的硫化物標准儲備溶液，按下式計算，將其質量濃度調整為10.0μg/mL。

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:V₄為應量取的硫化物標准儲備溶液的體積，mL;V₃為欲配製的硫化物標准使用溶液的體積，mL;ρ₃為硫化物標准溶液的濃度，μg/mL;ρ₄為硫化物標准儲備溶液的濃度，μg/mL。

硫酸鐵銨溶液(125g/L)稱取25g硫酸鐵銨［Fe(NH₄)(SO₄)₂·12H₂O］於250mL燒杯中，加100mL水，5mLH₂SO₄，稍加熱使溶解，加水至200mL，混勻。如渾濁則應過濾。

對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽溶液(1g/L)稱取1g對氨基二甲基苯胺二鹽酸［NH₂C₆H₄N(CH₃)₂·2HCl，化學純］溶於700mL水中，在不斷攪拌下，緩緩地加入200mLH₂SO₄，冷卻後用水稀釋至1000mL，混勻，貯存於棕色試劑瓶中，置於冰箱中保存。

校準曲線

移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL硫化物標准溶液(10.0μg/mL)，置於50mL容量瓶中，加10mL乙酸鋅溶液，混勻。加入5mL對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽溶液、1mL硫酸鐵銨溶液，水稀釋至刻度，充分混勻。校準系列的濃度(以S^2-計)分別為0.00μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.15μg/mL、0.20μg/mL、0.25μg/mL、0.30μg/mL。靜置10min，將溶液移入1cm比色皿中，用水作參比，於波長650nm處測量吸光度。繪制校準曲線。

分析步驟

稱取3g(精確至0.01g)混勻的濕試樣，置於50mL燒杯中，加5mL水、2～3mL乙酸鋅溶液，用少許水全量轉入定氮裝置中。

移取10mL乙酸鋅溶液於100mL刻度試管中，將冷凝器下端的玻璃連接管插入刻度試管至接近其底部，通水蒸氣蒸餾(見圖76.2)。打開冷凝器的冷卻水，當定氮裝置中的試樣被蒸氣充分攪動並加熱近沸時，迅速加入15mL(1+2)HCl，並立即蓋緊蓋子，繼續通水蒸氣。當刻度試管中的吸收液達到50～60mL時，將連接管和刻度試管一並取下，停止通水蒸氣，用少量水沖洗連接管，沖洗液並入吸收管中。加入5mL對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽溶液、1mL硫酸鐵銨溶液，用水稀釋至刻度，混勻。靜置10min，以下測定步驟同校準曲線。

按下式計算硫的含量:

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:w(S^2-)為試樣中硫化物硫的質量分數，10^-6;ρ(S^2-)為從校準曲線上查得的硫的濃度，μg/mL;V為吸收液定容的體積，mL;m為稱取試樣的質量，g;w(H₂O^-)為濕水樣中吸附水的質量分數。

注意事項

硫化物標准溶液應在使用前臨時配製。

氮氣中如有微量氧，可安裝洗氣瓶(內裝亞硫酸鈉飽和溶液)予以除去。

『叄』 請問半微量凱式定氮法的詳細步驟，謝謝！！順便問下全量半微量和微量的區別是什麼呢

(一) 方法原理

樣品與硫酸一同加熱消化, 分解有機質, 釋放出的NH3 與硫酸結合成硫酸銨留在溶液中。在定氮消化瓶中,用氫氧化鈉中和硫酸銨生成氫氧化銨,加熱又分解NH3 ,用硼酸吸收, 用標定過的鹽酸或硫酸滴定, 從而計算出總氮量, 換算為蛋白質量。
(二) 儀器、設備

1. 儀器
分析天平: 感量0.0001克；實驗用粉碎機；半微量凱氏蒸餾裝置；半微量滴定管, 容積10毫升；硬質凱氏燒瓶: 容積25毫升, 50毫升；錐形瓶: 容積150毫升；電爐: 600瓦。

2. 試劑
(1) 鹽酸: 分析純, 0.02mol/L, 0.05mol/L標准溶液(鄰苯二甲酸氫鉀法標定)；
(2) 氫氧化鈉: 工業用或化學純, 40%溶液(W/V)；
(3) 硼酸: 分析純, 2%溶液(W/V)；
(4) 硼酸混合指示劑: 溴甲酚綠0.1克, 甲基紅0.1克分別溶於95%乙醇中,混合後稀至100毫升, 將混合指示劑與2%硼酸溶液按 1:100比例混合, 用稀酸或稀鹼調節PH值為4.5, 使呈灰紫色, 此溶液放置時間不宜過長, 需在1個月之內使用；
(5) 加速劑: 五水合硫酸銅(分析純)10克, 硫酸鉀(分析純)100克在研缽中研磨, 仔細混勻, 過40目篩；
(6) 濃硫酸: 比重1.84, 無氮；雙氧水: 分析純,30%；蔗糖: 分析純；
(7) 雙氧水硫酸混合液(簡稱混液): 雙氧水、硫酸、水的比例為3:2:1, 即在100毫升蒸餾水中,慢慢加入200毫升濃硫酸, 待冷卻後, 將其加入300毫升30%雙氧水, 混勻, 此混液可一次配製500～1000毫升貯藏於試劑瓶中備用, 夏天最好放入冰箱或陰涼處貯藏, 室溫(20℃)上下時不必冷藏, 貯藏進間不超過1個月 。

(三) 操作步驟

1. 樣品的選取和制備 選取有代表性的種子(帶殼種子需脫殼)挑揀干凈, 按四分法縮減取樣, 取樣量不得少於20克。將種子放於60～65℃烘箱中乾燥8小時以上, 用粉碎機磨碎, 95%通過40目篩, 裝入磨口瓶備用。
2. 稱樣 稱取0.1克試樣兩份(含氮1～7毫克), 精確至0.0001克, 同時測定試樣的水分含量。
3. 消煮1 將試樣置開25毫升凱氏瓶中, 加入加速劑粉末。除水稻為1克外, 其它均為2克。然後加3毫升硫酸, 輕輕搖動凱氏瓶, 使試樣被硫酸濕潤, 將凱氏瓶傾斜置於電爐上加熱, 開始小火, 待泡沫停止後加大火力, 保持凱氏瓶中的液體連續沸騰, 沸酸在瓶頸中部冷凝迴流。待溶液消煮到無微小的碳粒並呈透明的藍綠色時, 谷類繼續消煮30分鍾,豆類繼續消煮60分鍾。
4. 消煮2 將試樣置於50毫升凱氏瓶中, 加入0.5克加速劑和3毫升混液,在凱氏瓶上放一曲頸小漏斗, 傾斜在電爐上加熱, 開始小火(用調壓器將電壓控制在175伏左右), 保持凱氏瓶中液體呈微沸狀態。5分鍾後加大火力(將電壓控制在200伏左右)。保持凱氏瓶中液體連續沸騰, 消煮總時間, 水稻、高粱為30分鍾, 其它均為45分鍾。
注: 消煮中列入兩種消煮條件, 經與國際穀物化學協會標准法(ICC)比較, t值測驗均不顯著, 准確度與精密度也基本一致,在具體工作中可根據實際情況取其一種。
5. 蒸餾 消煮液稍冷卻後加少量蒸餾水, 輕輕搖勻。移入半微量蒸餾裝置的反應室中,用適量蒸餾水沖洗凱氏瓶4～5次。蒸餾時將冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸指示劑混合液的錐形瓶中, 向反應室中加入40%氫氧化鈉溶液15毫升(如採用消煮2的條件, 加10毫升即可)。然後通氣蒸餾, 當餾出液體積約達50毫升時,降下錐形瓶。使冷凝管末端離開液面, 繼續蒸餾1～2分鍾, 用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶中。
6. 滴定 谷類以0.02mol/L, 豆類以0.05mol/L標准鹽酸或硫酸滴定至錐形瓶中的溶液由藍綠色變成灰紫色為終點。空白用0.1克蔗糖代替樣品作空白測定。消耗標准酸溶液的體積不得超過0.3毫升。

(四) 結果計算

式中:
V2 滴定試樣時消耗標准酸的體積(毫升)
V1 滴定空白時消耗標准酸的體積(毫升)
N標准酸溶液的濃度(mol/L)
K 氮換算成粗蛋白質的系數
W 試樣重量(克)
X 試樣水分含量
0.0140每毫摩爾氮的克數
平行測定的結果用算術平均值表示,保留小數後二位。
兩份試樣粗蛋白質的平行測定結果為15%以下時, 其相對相差不得大於3%；15%～30%進為2%；30%以上為1%。

凱氏定氮法中的常量，微量，和半微量區別：
區別在於檢測用樣品量，你可以按標准進行操作，沒有必要拘泥於某一方法
主要看你樣品量是否足夠
1、常量由於可以把全部消化液一同蒸餾測定，故較適合蛋白質含量低的樣品。
2、微量、半微量差別在裝置上，二者皆屬於水蒸汽蒸餾操作，只是前者把蒸汽直接導入反應室內，後者把蒸汽導入反應室外加熱，由於二者皆取消化液的一部份操作，可平行蒸餾操作，但檢測限要較常量法高。
3、純粹從回收率的角度看，半微量要稍好。

『肆』 化驗飼料中真蛋白含量使用的氫氧化鈉溶液的配製與標定

一、原理 蛋白質在一定鹼性條件下能與重金屬鹽類發生鹽析作用而析出沉澱．此沉澱物不溶於熱水。而非蛋白氮類物質易溶於水。用熱水洗滌沉澱．將水溶性含氮物質洗去，剩下的沉澱物質再用凱氏定氮法測定即可得出飼料真蛋白質的含量。 二、測定所需的材料 1．儀器和設備 實驗室用台式粉碎機、分樣篩(20目)、分析天平(感量0．1mg)、燒杯(250m1)、玻璃棒、玻璃漏斗、中速定量濾紙(直徑15cm)、表面皿(直徑10cm)、乾燥箱(可控溫度65～70℃)、凱氏燒瓶(100m1)、燒煮爐或電爐、半微量定氮蒸餾器、容量瓶(100m1)、錐形瓶(250m1)、酸式滴定管(50m1)。 2．試劑與試液 硫酸AR、10％ 硫酸銅水溶液、硫酸鉀或無水硫酸鈉AR、氫氧化鈉AR、40％ 氫氧化鈉水溶液、2．5％氫氧化鈉水溶液、2％ 硼酸水溶液、0．05％mo]／]鹽酸標准溶液、氯化鋇試液、5％氯化鋇水溶液、0．1％ 甲基紅乙醇溶液、0．5％ 溴甲酚綠乙醇溶液。 三、樣品的選取與制備 取有代表性的樣品約lkg。用四分法分為兩份。一份裝瓶加封作為留用樣品。另一份粉碎過20目。裝於廣口瓶中貼標簽待測。 四、測定步驟 1．試樣的前處理 准確稱取試樣1～2g(精確到0．1mg)於250ml燒杯中，加蒸餾水50ml煮沸．依次加入10％硫酸銅水溶液20ml和25％氫氧化鈉溶液20rnl，邊加邊攪拌，加完後繼續攪拌幾分鍾。放置2小時或靜置過夜，沉澱物以中速定量濾紙過濾。用70℃以上熱水18ml反復洗滌沉澱．直至濾液無沉澱為止(取氯化鋇試液滴於表面皿中。加2mol／l鹽酸溶液1滴．滴人濾液．在黑色背景下觀察應無白色沉澱)。然後，將濾紙和沉澱物包好，放人烘箱中在65～70℃下乾燥2小時。 2．試樣的消化 將烘乾的試樣連同濾紙一起放人凱氏燒瓶中．依次加入硫酸鉀或無水硫酸鈉9 硫酸銅1 濃硫酸25ml，搖勻，爾後置於電爐上先低溫(100～200~C)加熱，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失後再提高加熱溫度(約410~C)至沸騰，消化至溶液澄清無黑點並呈藍綠色，再繼續加熱30分鍾，然後將凱氏燒瓶移出電爐放冷。 3．定容 將冷卻後的消化液加蒸餾水約10～20ml，』搖勻後轉入100ml容量瓶中，再加10～20ml蒸餾水洗滌凱氏燒瓶。溶液並入容量瓶中，如此反復洗滌，直至消化液全部轉入容量瓶中。待冷卻至室溫後，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。即為試樣分解液。 4．蒸餾 採用半微量凱氏定氮蒸餾法。先將水蒸汽發生器與半微量凱氏定氮蒸餾器連接好。在水蒸汽發生器的水中加入甲基紅指示劑3滴與硫酸數滴，使水溶液保持橙紅色，否則應補加少許硫酸。取20ml2％硼酸水溶液於250ml錐形瓶中，加0．1％甲基紅乙醇溶液5～6滴，0．5％溴甲酚綠乙醇溶液2～3滴，搖勻。然後將錐形瓶置於半微量凱氏定氮蒸餾器的末端．使冷凝管末端浸入此吸收液面下2／3處。准確移取試樣分解液10～15ml注入半微量定氮蒸餾器中，用少量蒸餾水沖洗進樣口，爾後緩慢加入40％氫氧化鈉水溶液20ml。用少量蒸餾水沖洗進樣口，用玻璃塞塞好進樣口。再加適量蒸餾水封住進樣口以防止漏氣。蒸餾3～5分鍾以後待冷凝管末端管口之餾出液呈中性(紅色石蕊試紙不變色)時將冷凝管末端離開吸收液面並沖洗冷凝管末端管口，洗液並入吸收液。再蒸餾1～2分鍾後用蒸餾水沖洗冷凝管末端管口，洗液並入吸收液。然後將錐形瓶移出，准備滴定。此時應夾斷氣源。排出廢液，准備下一個樣品的測定。 5．滴定 吸收氨後的吸收液立即用0．05tool／1的鹽酸標准溶液滴定使溶液顏色由藍綠色變為灰紅色即為滴定終點。同時記錄鹽酸標准溶液的耗用量。 6．空白 在進行樣品測定的同時進行空白測定。空白測定除不加試樣外其他操作步驟與試樣相同。空白試驗消耗的鹽酸標准溶液的體積不得超過0．5ml。 7．結果計算 五、注意事項 1．在試樣的前處理過程中，「煮沸」要求是加熱至沸並保持30分鍾，目的是使試樣中的非蛋白氮類物質充分溶解於水中。加10％硫酸銅溶液和25％氫氧化鈉溶液時最好採用移液管移取，然後沿著燒杯內壁緩慢滴加，一方面防止局部氫氧化鈉太濃將溶解部分蛋白質，這樣會導致最終結果偏低；另一方面是為了使試樣中的真蛋白質充分鹽析：放置2小時或靜置過夜也是這個道理。沉澱物宜以雙層中速定量濾紙過濾，雙層濾紙可以加快過濾速度，同時又不致於將沉澱物過濾掉。濾液無SO+2表明了已充分洗滌沉澱物，因為如果濾液中仍有SO+2 。則表明沉澱物中間仍可能夾雜有部分可溶性非蛋白氮類物質(如NH )，若不繼續洗滌則將導致最終結果偏高。將濾紙和殘渣(沉澱物)包好放入烘箱中於65～70cc下乾燥2小時是為了使沉澱物充分乾燥。一方面是為了避免沉澱物中仍夾雜有一些氨類物質(盡管這種情況一般不會發生。因為濾液已經過了氯化鋇試液的檢驗，但仍不能排除因人眼觀察的局限性使其中間仍夾雜有部分熱烘乾的過程中揮發掉)；另一方面也是為了下一步試樣消化的順利進行。因為如果試樣潮濕，炭化升溫過快，氣體驟然膨脹不易從凱氏燒瓶中散發出去，很容易使試樣與氣體一同沖出凱氏燒瓶從而導致消化失敗。 2．消化時應經常轉動凱氏燒瓶以便使消化進行得迅速而完全。在炭化時如有黑色碳粒濺在瓶壁上應將凱氏燒瓶移出。待冷卻後加少量蒸餾水沖洗之。爾後再繼續消化 3．對膠體物質或脂肪含量較高的樣品。消化時應防止泡沫溢出瓶口．如發現有泡沫溢至瓶頸時應立即移開火源，並加1～2滴蒸餾水再繼續消化。 4．蒸餾過程中要注意氣體通路。即管夾要有一個打開，以免燙傷。在加試樣分解液或鹼液於反應室時要快。應先檢查氣源是否夾斷。廢液流出口是否暢通。開始蒸餾時應先通蒸汽後夾斷廢液排出口。否則所加液迴流排出。 核心提示：飼料特別是植物性飼料中含量較多的非蛋白氮化合物如氨化物不能或不能完全被單胃動物(如豬、禽等)利用，只有真蛋白質才能被單胃動物消化、吸收與利用。因此飼料真蛋白質含量比飼料粗蛋白含量更能反映出飼料的營養價值。

『伍』 為什麼半微量定氮法進行肉質的揮發性鹽基氮實驗，沒有冷凝液體流出，裝置不漏氣啊，

揮發性鹽基氮是樣品水浸液在弱鹼下與水蒸汽一起蒸餾出來的總氮量， 是富含蛋白質類物質腐敗變質的產物， 它也是鑒定食物腐敗變質程度的一個指標。發性鹽基氮受發酵時間、溫度等因素影響，按照國家標准食品衛生理化檢驗GB ／ T 5009.44-2003，對發酵食品可採用半微量定量法， 完成揮發性鹽基氮指標的檢測。半微量法具有科學性、合理性的玻璃儀器操作, 減少污染, 准確度高, 適合於所有的樣品檢測, 因此一直沿用至今。但存在消化時間太長( 不同材料通常1 到幾小時) 及放出有毒有害氣體, 必須在通風櫥中進行的弊端。
而用全自動凱氏定氮法是測定食品中蛋白質含量，否能對樣品中揮發性鹽基氮等項目進行檢測,有待對其功能做進一步探討。

『陸』 用凱氏定氮法測定微生物的含氮量，微生物是否需要消煮

土壤中氮素的總貯量及其存在狀態，與作物的產量在某種條件下有一定的正相關。土壤中氮素來源於四方面：動、植物殘體的積累；有機、無機肥料的施用；土壤微生物及大氣降水帶入的氮。從形態上可以分成有機態和無機態兩類，其中能被植物吸收利用的無機態氮約佔全氮量的5%，絕大部分以有機態存在的氮素，需要在微生物的活動下逐漸分解礦化後，才能被植物利用。 我國植物大部分缺氮，因此施氮肥在大部分土壤上都有顯著肥效，分析全氮含量可以判斷土壤肥力，為推薦施肥量作參考。 土壤、植株和其它有機體中全氮的測定通常都採用開氏消煮法，用硫酸鉀-硫酸銅-硒粉作加速劑。此法雖然消煮時間長，但控制好加速劑的用量，不易導致氮素損失，消化程度容易掌握，測定結果穩定，准確度較高，適用於常規分析。(一)開氏定氮法原理 土壤中的含氮有機化合物在加速劑的參與下，經濃硫酸消煮分解，有機氮轉化為銨態氮，鹼化後把氨蒸餾出來，用硼酸吸收，標准酸滴定，求出全氮含量。硫酸鉀起提高硫酸溶液沸點的作用，硫酸銅起催化劑作用，加速有機氮的轉化，硒粉是一種高效催化劑，用量不宜過多，否則會引起氮素損失。（二）主要儀器和試劑1．開氏瓶(50毫升)；半微量滴定管(10毫升) 彎頸小漏斗；半微量定氮蒸餾器或普通定氮蒸餾儀；100毫升三角瓶。2．濃硫酸（相對密度1.84，三級）。3．40%NaOH 稱取工業用固體氫氧化鈉(NaOH)420克，放入1000毫升硬質燒杯中，加入約400毫升蒸餾水，不斷攪動(防止燒杯底部固結)，溶解後轉入塑料試劑瓶，加塞，防止吸收空氣中CO2。放置幾天，待Na2CO3沉降後，將清液虹吸入盛有約200毫升無C02的水的塑料試劑瓶中，加水至1000毫升。若用三級試制配置，則不用虹吸步驟，其它同上。4．2％硼酸溶液 稱取20克硼酸(H3BO3，三級)用熱蒸餾水(約60℃)溶解，冷卻後稀釋至1000毫升，每升硼酸溶液中加入甲基紅-澳甲酚綠混合指示劑20毫升，並用稀酸或稀鹼調節至紫紅色(pH4.5)。5．甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑 0.099克溴甲酚綠和0.666克甲基紅與瑪瑙研缽中少量95％乙醇，研磨至指示劑完全溶解為止，最後加95％乙醇至100毫升。6. 0.02或0.01NH2S04標准溶液 先配製0.1NH2SO4溶液，標定後稀釋5或10倍。7． 0.1NH2S04溶液的配製和標定 每升水中注入3毫升濃硫酸(三級)，冷卻，充分混勻。將碳酸鈉(Na2CO3，二級或一級)裝在扁形稱量瓶中，在160℃烘乾2小時以上，用稱量瓶稱取0.16一0.24克樣品(精礎到0.0001g) 3份，分別放入250毫升三角瓶，溶於30毫克水中，加1-2滴溴甲酚綠-甲基紅棍合指示劑，用配好的0.1N酸溶液滴定至溶液由綠色變為紫紅色，煮沸2-3分鍾逐盡C02，冷卻後繼續滴定至溶液突變為葡萄酒紅為終點。同時做空白試驗。控下式計算，取3次平均值。 NH=W*2000/Na2CO3*(v-v0)=w/0.05300*(v-v0) 式中 W--稱取Na2CO3重量，克； V--標定所用酸溶液體積，毫升； V0 --空白試驗所用酸溶液體積，毫升。8．混合催化劑 稱取硫酸鉀(K2SO4~三級)100克，硫酸銅(CuSO4.H2O，三級)10克和硒粉l克，均勻混合後研磨，使通過80目篩，貯於瓶中。(三)操作步驟1．土樣的消煮 稱取風干土樣(0.25毫米篩)約1克(精確到0.0001克)，放入乾燥的50毫升開氏瓶中，加混合催化劑約1．8克，加2毫升水；使其濕潤，再加濃硫酸5毫升。搖勻後，蓋上小漏斗，放在電爐上，開始用小火加熱，然後微消煮，當消煮液呈灰白色時，加高溫度，待完全變為灰白稍帶綠色後，再繼續消煮1小時，仔細觀察消煮液中及瓶壁是否有黑色炭粒，如有，應延長消煮時間至炭粒消失為止，取下開氏瓶，冷卻。 2．氮的測定 小心地將開氏瓶中全部消煮液轉入半微量定氮蒸餾器的蒸餾室中，並用少量水洗滌開氏瓶4～5次，每次3一5毫升，總用量不超過20毫升(如果樣品含氮量高可定容後吸取部分溶液蒸餾)。另備100毫升三角瓶，內加入2％硼酸-指示劑溶液6毫升，將三角瓶置於冷凝器的承接管下，管口插入硼酸溶液內。向蒸餾室內加2~40％NaOH20毫升，立即關閉蒸餾室，進行蒸氣蒸餾，待餾出液達30~40毫升時，停止蒸餾。用少量水沖洗冷凝管，取下三角瓶，用標准酸溶液滴定至紫紅色(葡萄酒紅色)，同時進行空白試驗，校正試劑和滴定誤差。或用普通定氮儀蒸餾。樣品稱於150毫升開氏瓶內，按同樣步驟消煮，冷卻後將開氏瓶上的小漏斗用少量蒸餾水沖洗後除去，開氏瓶內加蒸餾水70毫升，搖勻，冷卻後將開氏瓶傾斜，用量筒沿瓶壁緩緩加入40％氫氧化鈉25毫升，使溶液成兩層，並不使鹼液弄到瓶口上，立即接到蒸餾裝置上。將盛有8毫升2％硼酸-指示劑溶液的三角瓶置於冷凝管下端的緩沖管下，使緩沖管下端浸在三角瓶硼酸液中，以免吸收不完全。打開螺絲夾(蒸氣發生器內的水要預先加熱至沸)，通入蒸氣，搖動開氏瓶內溶液使其混合均勻，打開加熱電爐，通自來水冷凝，蒸餾15-20分鍾後，檢查蒸餾是否完全。檢查方法；在緩沖管下取1滴餾出液於pH 1-14廣泛試紙上，若有藍色，應繼續蒸餾，直至蒸餾完全為止。取下緩沖管和三角瓶，用少量蒸餾水沖洗緩沖管，用標准酸滴定至紫紅色，也需做空白試驗。全N%=(V-V0)N*0.014*100/W式中 N --標准酸當量濃度，V--土壤消耗的標准酸體積，毫升，V0--空白試驗消耗的標准酸體積，毫升0.014--N的毫當量，克；W--樣品重；克。兩次平行測定結果允許差為0.005％(五)注意事項 1. 全氮測定不宜用烘乾土樣，因為烘乾過程中可能使含氮量發生變化，但測定結果一般以烘乾土計算，故須另測土樣的含水量，測定方法同土壤硝態氮，但不是用新鮮土樣而是用風干土樣。 2. 土壤含氮量在0.1%以下，稱1.0克，0.1-0.2%稱0.5-1.0克，在0.2%以上稱0.5克以下。 3. 消煮過程中應該經常轉動開氏瓶，使噴濺在瓶壁上的土粒及早迴流到酸液中去。 4.本法測得的氮不包括NO3-N,因硝態氮在消煮過程中不完全還原為銨態氮，且易揮發損失，一般土壤中硝態氮含量小於全氮的1%，故忽略不計。

『柒』 植物全磷、全氮、全鉀的測定

一、植物全氮測定

（一）H2SO4-H2O2消煮法

1、適用范圍

本方法不包括硝態氮的植物全氮測定,適合於含硝態氮低的植物樣品的測定。

2、方法提要

植物中的氮、磷大多數以有機態存在,鉀以離子態存在。樣品經濃H2SO4和氧化劑H2O2消煮,有機物被氧化分解,有機氮和磷轉化成銨鹽和磷酸鹽,鉀也全部釋出。消煮液經定容後,可用於氮、磷、鉀的定量。採用H2O2為加速消煮的氧化劑,不僅操作手續簡單快速,對氮、磷、鉀的定量沒有干擾,而且具有能滿足一般生產和科研工作所要求的准確度。但要注意遵照操作規程的要求操作,防止有機氮被氧化成N2氣或氮的氧化物而損失。

3、試劑

（1）硫酸(化學純,比重1.84);

（2）30% H2O2(分析純)。

4、主要儀器設備。消煮爐，定氮蒸餾器。

5、操作步驟

稱取植物樣品(0.5mm)0.3～0.5g(稱准至0.0002g)裝入100ml開氏瓶或消煮管的底部,加濃H2SO45ml,搖勻(最好放置過夜),在電爐或消煮爐上先小火加熱,待H2SO4發白煙後再升高溫度,當溶液呈均勻的棕黑色時取下。稍冷後加班10滴H2O2(3),再加熱至微沸,消煮約7～10min,稍冷後重復加H2O2,,再消煮。如此重復數次,每次添加的H2O2應逐次減少, 消煮至溶液呈無色或清亮後,再加熱10min,除去剩餘的H2O2。取下冷卻後,用水將消煮液無損地轉移入100ml容量瓶中,冷卻至室溫後定容(V1)。用無磷鉀的干濾紙過濾,或放置澄清後吸取清液測定氮、磷、鉀。每批消煮的同時,進行空白試驗,以校正試劑和方法的誤差。

6、注釋

（1）所用的H2O2應不含氮和磷。H2O2在保存中可能自動分解,加熱和光照能促使其分解,故應保存於陰涼處。在H2O2中加入少量H2SO4酸化,可防止H2O2分解。

（2）稱樣量決定於NPK含量,健狀莖葉稱0.5g,種子0.3g,老熟莖葉可稱1g,若新鮮莖葉樣,可按干樣的5倍稱樣。稱樣量大時,可適當增加濃H2SO4用量。

（3）加H2O2時應直接滴入瓶底液中,如滴在瓶勁內壁上,將不起氧化作用,若遺留下來還會影響磷的顯色。

（二）水楊酸-鋅粉還原- H2SO4-加速劑消煮法

1、適用范圍

包括銷態氮的植物全氮測定,適合於硝態氮含量較高的植物樣品的測定。

2、方法原理

樣品中的硝態氮在室溫下與硫酸介質中的水楊酸作用,生成硝基水楊酸,再用硫代硫酸鈉及鋅粉使硝基水楊酸還原為氨基水楊酸.然後按H2SO4-加速劑消煮法進行消煮法進行消煮樣品,使樣品中全部氮轉化為銨鹽。

3、試劑

（1）固體Na2S2O3;

（2）還原鋅粉(AR);

（3）水楊酸-硫酸:30g水楊酸溶於1L濃硫酸中。也可以該用含苯酚的濃硫酸:40g苯酚溶於1L濃硫酸中。

4、儀器設備。同上。

5、操作步驟

稱取磨細烘乾樣品(過0.25mm篩)0.1000～0.2000g或新鮮莖葉樣品1.000～2.000g,置於100ml開氏瓶或消煮管中,先用水濕潤內樣品(烘乾樣),然後加水楊酸-硫酸10ml,搖勻後室溫放置30min,加入Na2S2O3約1.5g,鋅粉0.4g和水10ml,放置10 min,待還原反應完成後,加入混合加速劑2g,按土壤全氮測定方法進行消煮, 消煮完畢,取下冷卻後,用水將消煮液無損地轉移入100ml容量瓶中,冷卻至室溫後定容(V1)。用於濾紙過濾,或放置澄清後吸取清液測定氮。每批消煮的同時,進行空白試驗,以校正試劑和方法的誤差。

（三）消煮液中銨的定量(凱氏法)

1、適用范圍。適合於各種植物樣品消煮液中氮的定量。

2、方法原理

植物樣品經開氏消煮、定容後,吸取部分消煮液鹼化,使銨鹽轉變成氨,經蒸餾,用H3BO3吸收,硼酸中吸收的氨可直接用標准酸滴定,以甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑指標終點。

3、試劑

（1）400g/L NaOH溶液。

（2）20g/L H3BO3-指示劑溶液。

（3）酸標准溶液[c(HCL或1/2H2SO4)=0.01mol/L]。

4、儀器設備。蒸餾裝置或半自動蒸餾儀。

5、蒸餾

檢查蒸餾裝置是否漏氣和管道是否潔凈後,吸取定容後的消煮液5.00～10.00mL (V2,含NH4-N約1mg),注入半微量蒸餾器的內室。另取150ml三角瓶,內加5 ml 2% H3BO3指示劑溶液(若為包括硝態氮的待測液,應加約6 mL的400g/L NaOH溶液),通過蒸氣蒸餾(注意開放冷凝水,勿使餾出液溫度超過40℃)。待餾出液體積約達50～60ml時,停止蒸餾,用少量已調節至pH4.5的水沖洗冷凝管末端。用酸標准溶液滴定餾出液至由藍綠色突變為紫紅色(終點的顏色應和空白測定的滴定終點相同)。與此同時進行空白測定的蒸餾、滴定、以校正試劑和滴定誤差。

6、結果計算

ω(N), %=c(V-V0)×0.014×D×100/m;

式中: ω(N)——植物全氮的質量分數,%;

c——酸標准溶液的濃度,mol/L;

V——滴定試樣所用的酸標准液體積,ml;

V0——滴定空白所用的酸標准液, ml;

0.014——N的摩爾質量,kg/mol;

D——分取倍數(即消煮液定容體積V1/吸取測定的體積V2)。

二、植物全磷的測定

（一） 釩鉬黃吸光光度法

1、適用范圍。適合於含磷量較高的植物樣品的測定(如籽粒樣品)。

2、方法原理

植物樣品經濃H2SO4消煮使各種形態的磷轉變成磷酸鹽。待測液中的正磷酸與偏釩酸和鉬酸能生成黃色的三元雜多酸,其吸光度與磷濃度成正比,可在波長400～490nm處用吸光光度法測定。磷濃度較高時選用較長的波長,較低時選用較短波長。

此法的優點是操作簡便,可在室溫下顯色,黃色穩定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介質中都適用,對酸度和顯色劑濃度的要求也不十分嚴格,干擾物少,在可見光范圍內靈敏度較低,適測范圍廣(約為1～20mg/L P),故廣泛應用於含磷較高而且變幅較大的植物和肥料樣品中磷的測定。

3、試劑

（1）釩鉬酸銨溶液:25.0g鉬酸銨[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析純]溶於400mL水中,必要時可適當加熱,但溫度不得超過60℃。另將1.25g偏釩酸銨(NH4VO3,分析純)溶於300mL沸水中,冷卻後加入250mL濃HNO3(分析純)。將鉬酸銨溶液緩緩注入釩酸銨(溶液中,不斷攪勻,最後加水稀釋至1L,貯於棕色瓶中。

（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶於水, 稀釋至100ml。

（3）二硝基酚指示劑(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶於100ml水中。

（4）磷標准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(乾燥的KH2PO4(分析純)溶於水,加入5ml濃HNO3,於1L容器瓶中定容。

4、主要儀器設備。分光光度計。

5、分析步驟

准確吸取定容,過濾或澄清後的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示劑,滴加6mol/LNaOH中和至剛呈黃色,加入10.00ml釩鉬酸銨試劑,用水定容(V3)。15min後,用1cm光徑的比色槽在波長440nm處進行測定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步驟顯色),調節儀器零點。

校準曲線或直線回歸方程:准確吸取50mg/L P標准液0, 1, 2.5, 7.5, 10, 15ml分別放入50mL容量瓶中,按上述步驟顯色,即得0, 1.0, 2.5 , 5.0, 7.5, 10, 15 ml P的標准系列溶液,與待測液一起進行測定,讀取吸光度,然後繪制校準曲線或求直線回歸方程。

6、結果計算

ρ(P)×V3×(V1/V2)×10-4

ω(P)=

m

式中: ω(P) ——植物磷的質量分數,%;

ρ(P) ——從校準曲線或回歸方程求得的顯色液中磷的質量濃度, mg/L;

V1——消煮液定容體積, ml;

V2——吸取測定的消煮液體積, ml;

V3——顯色液體積, ml;

m——稱樣量,g;

10-4——將mg/L濃度單位換算為百分含量的換算因數。

7、注釋

（1）顯色液中ρ(P)=1~5 mg/L時,測定波長420nm;5～20mg/L用490nm。待測液中Fe3+濃度高應選用450nm,以清除Fe3+干擾。校準曲線也應用同樣波長測定繪制。

（2）一般室溫下,溫度對顯色影響不大,但室溫太低(如<15℃)時,需顯色30min。穩定時間可達24h。

（3）如試液為HCl,HClO4介質,顯色劑應用HCl配製;試液為H2SO4介質, 顯色劑也用H2SO4配製。顯色液酸的適宜濃度范圍為0.2～1.6 mol/L,最好是0.5～1.0 mol/L。酸度高顯色慢且不完全,甚至不顯色;低於0.2 mol/L易產生沉澱物, 干擾測定。鉬酸鹽在顯色液中的終濃度適宜范圍為1.6×10-3～10-2mol/L, 釩酸鹽為8×10-5～2.2×10-3 mol/L。

4、此法干擾離子少。主要干擾離子是鐵,當顯色液中Fe3+濃度超過0.1%時,它的黃色有干擾,可用扣除空白消除。

（二）鉬銻抗吸光光度法

1、適用范圍

適合於含磷量較低的植物樣品的測定(如莖稈樣品等)。

2、方法提要

植物樣品經濃H2SO4消煮使各種形態的磷轉變成磷酸鹽。在一定酸度下,待測液中的正磷酸與鉬酸銨和酒石酸銻鉀生成一種三元雜多酸,後者在室溫下能迅速被抗壞血酸還原為藍色絡合物,可用吸光光度法測定。

3、試劑

（1）6mol/L NaOH溶液

（2）0.2%二硝基酚指示劑

（3）2mol/L(1/2 H2SO4)硫酸溶液:5.6mL濃H2SO4加水至100mL。

（4）鉬銻貯存液: 濃H2SO4(分析純)126 ml緩慢地注入約400 ml水中,攪拌,冷卻。10.0g鉬酸銨(分析純)溶解於約60℃的300ml水中,冷卻。然後將H2SO4溶液緩緩倒入鉬酸銨溶液中,再加入100 ml0.5%酒石酸銻鉀(KSbOC4O6·1/2H2O, 分析純) 溶液,最後用水稀釋至1L,避光貯存。此貯存液含鉬酸銨為1%,酸濃度為c(1/2 H2SO4)=4.5 mol/L

（5）鉬銻抗顯色劑:1.50g抗壞血酸(C6H8O6,左旋,旋光度+21～+22, 分析純) 溶於100ml鉬銻貯存液中,此液須隨配隨用,有效期一天,冰箱中存放,可用3～5天。

（6）磷標准工作液[ρ(P)=5 mg/L]:吸取100mg/L P標准貯存液稀釋20倍,即為5 mg/L P標准工作溶液,此溶液不宜久存。

4、主要儀器設備。同上

5、分析步驟

吸取定容過濾或澄清後的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)於50ml容量瓶中, 用水稀釋至約30ml,加1～2滴二硝基酚指示劑,滴加6mol/L NaOH溶液中和至剛呈黃色,再加入1滴2mol/L(1/2 H2SO4)溶液,使溶液的黃色剛剛褪去,然後加入鉬銻抗顯色劑5.00ml,搖勻,用水定容(V3)。在室溫高於15℃的條件下放置30min後,用1cm光徑比色槽在波長700nm處測定吸光度,以空白溶液為參比調節儀器零點。

校準曲線或直線回歸方程: 准確吸取ρ(P)= 5mg/L標准工作溶液0, 1, 2, 4, 6, 8 ml,分別放入50mL容量瓶中,加水至30ml,同上步驟顯色並定容, 即得0,按0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mg/L P標准系列溶液, 與待測液同時測定,讀取吸光度,然後繪制校準曲線或直線回歸方程。

6、結果計算:同1。

7、注釋

根據分光光度計性能,可選用650～890nm波長處測定,880～890nm處靈敏度高

三、植物全鉀的測定—火焰光度法

（一）適用范圍。適合於植物樣品消煮液中鉀含量的測定。

（二）方法提要

植物樣品經消煮或浸提,並經稀釋後,待測液中的K可用火焰光度法測定。

（三）試劑

K標准溶液[ρ(K)= 100mg/L] :0.1907gKCl(分析純),在105～110℃乾燥2h)溶於水,於1L容量瓶中定容,存於塑料瓶中。

（四）主要儀器設備。火焰光度計。

（五）分析步驟

吸取定容後的消煮液5.00～10.00ml(V2)放入50mL容量瓶中,用水定容(V1),直接在火焰光度計上測定,讀取檢流計讀數。

校準曲線或直線回歸方程 准確吸取100mg/L K標准溶液0, 1, 2.5, 10, 20 ml, 分別放入50mL容量瓶中,加水定容的空白消煮液5或10ml(使標准溶液中的離子成分和待測液相近),加水定容。即得0, 2, 5, 10, 20, 40 mg/L K標准系列溶液。以濃度最高的標准溶液定火焰光度計檢流計的滿度(一般只定到90),然後從稀到濃依次進行測定,記錄檢流計讀數,以檢流計讀數為縱坐標,鉀濃度為橫坐標繪制校準曲線或求直線回歸方程。

（六）結果計算

ρ(K)×V3×(V1/V2)×10-4

ω(K)=

m

式中: ω(K) ——植物鉀的質量分數,%;

ρ(K) ——從校準曲線或回歸方程求得的測讀液中K的濃度, mg/L;

V1——消煮液定容體積, ml;

V2——吸取體積, ml;

V3——測讀液定容體積, ml;

m——干樣質量,g;

10-4——將mg/L濃度單位換算為百分含量的換算因數。

『捌』 土壤全氮的測量方法

答：樣品在加速劑的參與下，用濃硫酸消煮時，各種含氮有機化合物經過復雜的高溫分專解反應，轉化為銨屬態氮。鹼化後蒸餾出來的氨用硼酸吸收，以酸標准溶液滴定，求出土壤全氮含量（不包括全部硝態氮）。
包括硝態和亞硝態氮的全氮測定，在樣品消煮前，需先用高錳酸鉀將樣品中的亞硝態氮氧化為硝態氮後，再用還原鐵粉使全部硝態氮還原，轉化成銨態氮。

『玖』 測土壤全氮需要什麼儀器

儀器、設備
1 土壤樣品粉碎機。
2 瑪瑙研缽。
3 土壤篩：孔徑1.0mm（18目）；0.25mm（60目）。
4 分析天平：感量為0.0001g。
5 硬質開氏燒瓶：容積 50ml，100ml。
6 半微量定氮蒸餾裝置。
7 半微量滴定管：容積 10ml，25ml。
8 錐形瓶：容積 150ml。
9 電爐：300W變溫電爐。

『拾』 如何測定蔬菜樣品中的全氮含量

答：待測液的制備：
第一類包括硝態氮的消煮方法。
（1）硫酸—鉻粒—重鉻酸鉀消煮法
① 適用范圍：本法適合於含硝態氮的植物樣品全氮的測定，硝態氮的回收率可達99%。鉻粒是在稀鹽酸中，先將樣品中的硝態氮（NO-3-N）還原為銨態氮（NH+4-N），然後按硫酸—重鉻酸鉀消煮法將有機態氮轉變為銨，而可用蒸餾法測定，是一個比較簡便而快捷的方法。
② 試劑配製：
鉻粒：含鉻量為99.9%的金屬鉻。
飽和重鉻酸鉀：稱取重鉻酸鉀（K2Cr2O7，化學純）200克，溶於1升熱蒸餾水中。
2摩爾/升鹽酸：20毫升濃鹽酸（比重1.19）加入100毫升水中。
③ 測定步驟：稱取通過0.42毫米孔徑的風干蔬菜樣品0.2000～0.5000克，於50毫升開氏瓶或100毫升三角瓶中，加混合催化劑1.85克，濃硫酸5毫升混合後瓶口蓋以小漏斗，置於電爐或電熱板上文火加熱，以防反應過於強烈，待樣品成液狀時再逐漸加大火力。火力以控制瓶內硫酸迴流大約在瓶頸的1/3處為宜。待消煮液清亮後，繼續消煮半小時，稍待冷卻後，將消煮液全部移入50毫升容量瓶中，定容待測。
④ 注釋：
［1］與樣品消煮的同時應做不帶樣品的空白消煮。
［2］樣品稱量應控制硝態氮含量在10～20毫克范圍內，如樣品中硝態氮含量太高，會引起硝態氮還原不足而影響測定結果。
［3］在鉻粒全部溶解後必須冷卻至室溫，才可加入濃硫酸，是為防止加濃硫酸時反應過於劇烈。
［4］硫酸消煮液必須經充分冷卻後才能加飽和重鉻酸鉀溶液，否則作用激烈，易引起樣品濺失。重鉻酸鉀溶液加入後，如果溶液立即出現綠色或消煮1～2分鍾後即變綠色，說明重鉻酸鉀量不足，此時可補加固體重鉻酸鉀1克，繼續消煮。
［5］消煮液經稀釋後，蒸餾時體積應占開氏瓶容量的1/3左右為宜。大於1/3時，體積太大，蒸餾不便。小於1/3時酸鹼作用劇烈。也給蒸餾帶來困難。
（2）鋅鐵粉還原法
① 適用范圍：本方法是利用鋅鐵粉在酸性溶液中所放出的氫將樣品中的硝態氮還原為銨態氮。進而在硫酸條件下利用重鉻酸鉀將有機態氮分解為銨態氮，再用蒸餾法測定之。
② 試劑配製：
10%硫酸：將比重為1.84的濃硫酸56.9毫升緩緩加入盛有943.1毫升蒸餾水的1升燒杯中。
鋅鐵粉混合還原劑：化學純鋅粉9份與化學純鐵粉1份混合。
20%重鉻酸鉀：化學純重鉻酸鉀（K2Cr2O7）20克溶於100毫升水中。
③ 測定步驟：稱取0.5000～1.000克樣品置於250毫升開氏瓶中，加0.1～0.2克鋅鐵粉，8～10毫升10%硫酸，輕輕轉動，加熱，使溶液微沸10分鍾。冷卻，再加8毫升濃硫酸。瓶口蓋以小漏斗，消煮10～15分鍾，直至呈醬油狀。冷卻後加20%重鉻酸鉀5毫升，再微沸5分鍾，取下，將全部溶液直接加水稀釋後安裝於普通定氮蒸餾裝置上蒸餾測定氮含量。如樣品含氮量高時，可先將溶液移至100毫升容量瓶中稀釋定容，然後吸取部分溶液進行蒸餾或吸取更少的溶液用半微量定氮器蒸餾定氮。
④ 注釋：鐵鋅粉混合還原劑中的還原鐵含有相當的氮，必須藉助空白分析加以校正，以免試劑帶來的誤差。
以將消煮液定容一定體積，再分取部分蒸餾定氮為好。這樣既可減少蒸餾過程中發生跳動和冒泡的危險，又能做氮的重復測定。
（3）水楊酸還原法
① 適用范圍：本法是用硫酸和水楊酸一同消煮樣品，先將樣品中的硝態氮轉化為硝基酚，再用硫代硫酸鈉把硝基酚還原為氨基酚，再經硫酸消煮成為銨鹽，而可用蒸餾法測定之。
② 試劑配製：
含水楊酸的硫酸：30克水楊酸（不含氮）溶於1升不含氮的濃硫酸（比重1.84）中。
10∶1硫酸鈉和硫酸銅混合鹽。
硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O）固體或鋅粉。
③ 測定步驟：稱取0.500～1.000克樣品或新鮮莖葉樣品2.50～5.0克，置於100毫升開氏瓶中，加約3.5克硫酸鈉和硫酸銅混合鹽和8毫升含水楊酸（或苯酚）的濃硫酸，輕輕轉動，使酸與樣品混勻，放置約30分鍾，加1.5克硫代硫酸鈉（或0.4克鋅粉）和10毫升蒸餾水，放置約10分鍾，待還原反應完全後，緩緩加熱，慎防泡沫上升溢出瓶頸。待泡沫停止發生後即可加強火力，使溶液保持沸騰，直至溶液轉變為黃綠色後，再煮約20分鍾。消煮完畢稍放冷卻，小心加水約25毫升，將溶液轉入100毫升容量瓶中。待溶液完全冷卻後，用水定容，此溶液可除供測定氮外，還可供磷鉀的測定。
④ 注釋：
［1］在用含水楊酸的硫酸處理樣品前，不應將水加入樣品中，因水會影響水楊酸對硝態氮的回收。可用0.4克鋅粉代替1.5克硫代硫酸鈉，但不能用鋅粒。
［2］消煮完畢應在硫酸溶液中的大量鹽類尚未析出凝固前，小心加入約25毫升水。如充分冷卻有大量鹽類析出，經充分搖勻而又不溶解時，則應稍加熱助溶。
第二類不包括硝態氮的消煮方法。
（1）硫酸—高氯酸消煮法
① 適用范圍：本消煮液可適用於氮磷鉀連續測定。氮的測定用蒸餾法、比色法皆可，磷鉀可用比色法及火焰光度計法。
② 試劑配製：
濃硫酸：分析純。
60%高氯酸：若市售為70%濃度時，應稀釋至60%。
③ 測定步驟：稱取0.5000～1.000克（通過0.42毫米孔徑）蔬菜樣品置於50毫升或100毫升開氏瓶中，用少量水濕潤樣品後，加入濃硫酸5毫升搖勻，放置約30分鍾（放置過夜，可縮短消煮時間），然後加入60%高氯酸5～10滴，瓶口置小漏斗，在電爐上低溫加熱消煮（硫酸不能冒白煙，以防失氮）5～8分鍾。如消煮液轉為無色，表示消化完全。如仍為黑色或棕色，則可將開氏瓶取下冷卻，補加60%高氯酸1～2滴（切忌多加，應視硝化液顏色而定，以免引起氮的損失），置電爐上消煮至溶液完全清澈無色時為止。消煮完畢冷卻，將消煮液無損移入100毫升容量瓶中，搖勻備用。
（2）硫酸—過氧化氫消煮法
① 適用范圍：同硫酸—高氯酸消煮法。
② 試劑配製：濃硫酸：分析純。30%過氧化氫。
③ 測定步驟：稱取0.5000～1.000克（通過0.42毫米孔徑）蔬菜樣品置於50毫升開氏瓶中，用少量水濕潤樣品後，加入濃硫酸5毫升搖勻，放置半小時或過夜，瓶口置小漏斗，在電爐上低溫加熱消煮至瓶內硫酸開始迴流（消化液呈醬紅色，冒大量白煙），微沸5分鍾，取下冷卻，逐滴加入30%過氧化氫約0.5毫升，再加熱微沸5分鍾，取下冷卻，添加30%過氧化氫，反復操作，直至消化液完全清亮為止。添加30%H2O2量應每次逐量減少。最後一次應微沸5分鍾，以除盡剩餘的H2O2。冷卻後先加入10毫升蒸餾水，再無損地移入100毫升容量瓶中定容，搖勻備用。
樣品中全氮的測定：
（1）蒸餾法
①試劑配製：
40%氫氧化鈉：稱取各液用固體氫氧化鈉（NaOH）400克與硬質玻璃燒杯中，加400毫升蒸餾水溶解，並不斷攪拌，以防燒杯底部固結，冷卻後倒入塗石蠟的細頸玻璃瓶或塑料瓶中，加塞放置幾天，虹吸出清液，以去CO2的蒸餾水稀釋至1升，加蓋橡皮塞。
硼酸—指示劑液：稱取硼酸（H3BO3）20克加水900毫升稍稍加熱溶解之，冷卻後，加入混合指示劑（0.099克溴甲酚綠和0.066克甲基紅溶於100毫升乙醇中）20毫升，然後以0.1摩爾/升NaOH調節溶液至紅紫色（pH4.5），最後加水至1000毫升，搖勻，貯於塑料瓶中備用。
0.02摩爾/升硫酸標准溶液：量取濃硫酸2.8毫升，加蒸餾水稀釋至5000毫升，然後用標准鹼或硼砂標定之。
0.01摩爾/升硫酸標准溶液：將0.02摩爾/升硫酸標准溶液用蒸餾水準確地稀釋一倍。
②測定步驟：
蒸餾：吸取上述消煮液（任何一種均可）10～20毫升（使含N1毫克左右），置於半微量蒸餾器如圖5-1中1，另備150毫升三角瓶，內加2%的含混合指示劑的硼酸溶液5毫升，然後將三角瓶置於冷凝管下端3，使冷凝管口下端插入硼酸液面約 3～4厘米。此後從小漏斗6加入40%NaOH溶液10毫升，立即關緊7、9和10，同時打開8，使燒瓶的蒸氣通入蒸餾瓶中，蒸餾約需12～15分鍾，蒸餾液體積達50毫升，即可停止蒸餾。取下三角瓶，用氣壓差原理，立即打開9關緊8，使蒸餾瓶中液體倒流入分水筒4中，再打開8，關緊9同時打開10，排出液體後立即關緊，通蒸氣1～2分鍾後，另用一三角瓶盛蒸餾水接於冷凝管下，打開9，關緊8通過倒吸用蒸餾水洗凈蒸餾瓶，如此操作重復二次，即可洗凈蒸餾瓶，供下次使用。

圖5-1 半微量蒸餾器
滴定：另將0.01摩爾/升硫酸標准溶液裝入滴定管中，滴定硼酸溶液中吸收的氨。滴定過程中顏色由藍綠經藍紫突變為紫紅色即為滴定終點。滴定的同時，從消煮直至滴定必須做2～3個空白試驗，空白除不加樣品外，其他操作均與樣品操作相同，以校正滴定和試劑引起的誤差。
結果計算：
樣品全氮量（%）＝N（V－V0）×0.014×取用量倍數×100%/W
式中：N——為標准酸的摩爾濃度；
V——為樣品分析所用去的標准酸毫升數（毫升）；
V0——為空白試驗所用去的標准酸毫升數（毫升）；
0.014——為每毫克摩氮的重量（克）；
W——烘乾樣品重（克）；
取用量倍數＝消煮液總量/蒸餾所用消煮液量。
注釋：
在蒸餾樣品前，必須將蒸餾裝置空蒸5分鍾左右，以使蒸氣發生器及蒸餾系統中可能存在的含氮雜質去除干凈，可用鈉氏試劑檢查或者在蒸氣發生器內加入少許硫酸進行酸化，以固定自來水中可能存在的銨離子，但是必須使用玻璃燒瓶代替鐵質蒸氣發生器。若蒸餾時發生倒吸現象，可立即補加硼酸吸收液，仍可繼續蒸餾。在蒸餾時必須充分冷凝，否則會使吸收液發熱，使氨因受熱而揮發（用硼酸吸收時）。
（2）靛酚藍比色法
① 試劑配製：
鹼性酚：取50毫升重蒸餾的苯酚於100毫升蒸餾水中，溶120克氫氧化鈉（NaOH）於200毫升水中，待冷卻混合後加入無水乙醇250毫升，然後再加酒石酸15克，稀釋至1000毫升。
鹼性次氯酸鈉：稱取20克氫氧化鈉（NaOH）和20克四硼酸鈉溶於200毫升水中，加入次氯酸鈉（含活性氯不少於5.2%）600毫升，用水稀釋至1升。
銨態氮（NH+4-N）標准溶液：准確稱取在90℃乾燥過的氯化銨（NH4Cl）0.3821克，熱解於水，並定容至1升。此為100毫克/千克N標准液。
② 測定步驟：從已定容的待測液中吸取5.00毫升於50毫升或100毫升容量瓶中定容（視樣品含氮量高低而選擇稀釋10倍或20倍）。搖勻後吸取1.00～5.00毫升（使含氮15～25微克間）於另一容量瓶中加蒸餾水至約25毫升，加入1毫升EDTA—甲基紅溶液，用0.3摩爾/升氫氧化鈉調至黃色（pH＝6），依次加入5毫升酚溶液，5毫升次氯酸鈉溶液，搖勻定容，放置1小時以上。用625納米波長（紅色）1厘米光徑比色杯進行比色。同時吸取5毫克/千克銨態氮（NH+4-N）標准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0毫升於7個50毫升容量瓶中，加水約至30毫升，加1毫升EDTA—甲基紅溶液即上述測定步驟進行，此系列標准溶液濃度為0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5毫克/千克（NH+4-N）。
③ 結果計算：

如果第一次從定容的100毫升消煮液中吸取5毫升定容50毫升，繼後又從中吸取5毫升於50毫升容量瓶中顯色，則取用量倍數為：（100/5）×（50/5）＝200。