负压除菌过滤系统

A. 请问制备培养基时如何过滤除菌

1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌

某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

B. 过滤除菌法的原理

过滤除菌的原理有惯性撞击截留作用、拦截截留作用、布朗扩散截留作用等。 当空气通过过滤层时，直径很小的微粒在缓慢流动的气流中，会有明显的布朗运动，促使微粒和纤维接触和被捕集。这种作用在较大的气速、较大的纤维间隙中不起作用，因为此时布朗运动不明显。

C. 除菌过滤器的除菌过滤器的特点

（1）除菌过滤器一般采用十字悬挂式，水平进出。多芯过滤器可设计成落地内式。
（2）有些使用容场合根据实际需要分成预过滤器、精过滤器两种。
（3）空气流向：从外向内穿过滤芯。
（4）进入除菌过滤器的压缩空气必须先经过至少三级的精密过滤器及干燥机。除油、除水、除尘，油雾浓度应≤0.01PPM，否则将影响除菌滤芯的寿命，达不到预期的除菌效果。
（5）定期杀菌，根据实际使用情况每周或每月1~2次，每次30分钟，采用经过1μ过滤精度的洁净饱和蒸汽杀菌。蒸汽温度<140℃，蒸汽压力<0.3MPa。阀门缓慢开关。
（6）作为罐体、设备的呼吸器使用时，其作用主要在于连通大气防止设备内部负压和隔离开空气中的污染源，过滤方面的功能不大，因此在过滤上基本无要求。

D. 负压救护车原理 负压救护车消毒流程

负压救护车原理：负压救护车是在监护型救护车基础上加装负压设备而成，其运作原理基于压强差。确保外界气压高于车厢内气压，使新鲜空气能够进入车厢，同时车厢内被患者或疑似患者污染的空气或气溶胶不会随意外泄。车内装有负压装置，能对污染空气进行消毒过滤后，定向排出车厢，从而减少外界空气污染的机会，避免救护车成为流动污染源。

负压救护车消毒流程：1. 表面消毒：消毒人员首先使用气溶胶喷雾对救护车表面进行消毒。出诊人员需打开用过的出诊箱，带离医疗垃圾，并开启紫外线灯后方可下车进入污染区。随后，消毒人员对出诊人员经过的区域进行喷雾消毒。2. 紫外线灯照射与通风：紫外线灯照射30分钟后，打开车门进行通风。3. 医疗舱消毒：对医疗舱空间、表面、地面进行消毒，采用2%过氧乙酸溶液、3%过氧化氢溶液或有效氯浓度2000mg/L含氯消毒剂溶液，通过气溶胶喷雾方式联合消毒。消毒顺序为先表面后空间，从外向里进行。4. 密闭与再次通风：喷雾完毕后，密闭5分钟再打开车窗、车门进行通风。5. 过滤除菌系统维护：负压救护车过滤除菌系统的滤器或滤材应定期由专业人员清洗消毒并检修更换。清洗消毒可用有效氯浓度5000mg/L的含氯消毒剂溶液浸泡或直接喷洒，作用60分钟后清洗。废弃的过滤器或滤材需密封后焚烧处理。6. 车内物品表面消毒：车内物品表面的消毒方法多样，包括使用2000mg/L～5000mg/L过氧乙酸溶液、有效氯浓度1000mg/L～2000mg/L的含氯消毒剂溶液或75%酒精擦拭或浸泡消毒。30分钟后，对易腐蚀物品进行清水清洗或擦拭。

E. 关于实验室抽虑除菌的操作

问：最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？
答：你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！
答：如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后，过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。
如果用小量的溶液过滤，无菌室内用一次性注射器和一次性0.22um滤膜（millipore或pall都有卖）就可以。
答：看过滤的量，如果量小，用注射器加滤器、0.22微米滤膜过滤，滤器加上滤膜后盖紧，稍旋松，饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌，用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作，并先旋紧滤器，注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌；过滤应该是费力的，如果感觉很轻松，则滤膜已破。0.45微米的滤膜一般用于两次过滤的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高压更好些。
如果量大，正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜，这些都是要高压的。负压可用抽滤。

F. 实验室常用的灭菌方法有哪些

高温灭菌，喷洒灭菌药物灭菌，紫外线灯灭菌。如有帮助请采纳，手机则点击右上角的满意，谢谢！！