离子交换色谱分离蛋白质谁先

Ⅰ 关于液相色谱法纯化蛋白质

凝胶过滤色谱法：来 分辨率较高源，但是上样量仅为柱体积的1%，而且对流速也有严格的限制
离子交换色谱法：根据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质，但是分辨率没有凝胶过滤高
亲和层析法： 根据生物分子的特异性分离目的蛋白，特异性很高，但是配件容易丢失 适合含有特异性的标签的或者抗体
疏水色谱：根据疏水性来分离蛋白质，缺点是有的蛋白质在高盐中溶解度降低，所以应用范围受到限制，适合蛋白质表面含有较多疏水性氨基酸残基的疏水性蛋白质

Ⅱ 离子交换色谱法简介

离子交换色谱法（Ion Exchange Chromatography, IEC），一种起源于20世纪70年代并于80年代迅速发展的高效分析手段，特别适用于无机化合物，特别是无机阴离子的混合物分析。

该方法基于一个基本原理，即被分离的化合物与其固定相之间通过离子交换作用实现分离。固定相的核心是离子交换树脂，其分子结构中分布着许多可电离的活性位点。在分离过程中，待分析组分中的离子会与这些活性位点发生离子交换，形成一个动态的离子交换平衡。在这个平衡状态下，待分离离子与固定相中的固有离子竞争占据交换中心，随着流动相的移动，这种竞争导致它们在流动相和固定相之间发生相对移动，从而实现了有效的分离。

离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法进行分离。现在它不仅适用于无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范围较广。

Ⅲ 离子交换介质的结构

使用离子交换色谱进行细分级分离是较为常见的一种蛋白纯化方式。它是根据蛋白质的电荷不同来分离蛋白质混合物，被分离的目的蛋白所携带的电荷能与离子交换剂中所带的相反电荷相结合，而且这两者之间的结合作用是可逆的，通过逐渐增加离子强度或改变洗脱液PH值的方式处理色谱柱，离子交换剂上结念差合的目的蛋白便可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液当中。由于不同蛋白质的电荷不同，其与离仔则皮子交换剂的结合能力也不同，所以根据蛋白洗脱到溶液中的先后顺序来进行提取，就可以轻松分离出我们需要的目标蛋白。

离子交换剂的介质种类还可分为离子交换树脂、离子交换纤维素和离子交换凝胶等。强离子交换树脂保持离子化的PH值范围较宽，而弱离子交换树脂若想保持离子化，就只能在很窄的PH值范围内进行处理。离子交换色谱的优点是具有极高的分辨率，因此可以通过放大规模的方式直接应用于工业生产中。盯返根据数据统计结果可知，大多数蛋白质的静电荷是为负值，因此阴离子交换色谱的应用在纯化蛋白领域的最为广泛。选择离子交换介质时，首先要考虑的一点就是目的蛋白的分子大小，因为蛋白分子的大小不但会影响介质上的带电基团，还会影响介质对蛋白分子的动力载量，从而影响分离的效果和速度。

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Ⅳ 离子交换层析中流出物质顺序是什么

若用离子交换层析分离物质，以蛋白质为例，离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。

由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。

反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。

(5)离子交换色谱分离蛋白质谁先扩展阅读：

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。

溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理，使最终转为-OH-型或盐型交换剂；对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理，使最终转为-H-型交换剂。

梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。

Ⅵ 为什么说离子交换色谱法是分离蛋白质的最佳方法

它是根据蛋白质的组成物质氨基酸的物理性质（基于氨基酸电荷行为）为分离基础的方法。相对透析和超过滤及凝胶过滤来说，可以针对多种蛋白质中的某一种（前提是知道蛋白质的氨基酸组成及其离子交换树脂的亲和度及洗脱强度）进行分离。（而透析和超过滤还有凝胶过滤方法更大的取决于相对分子质量及其结构 分离出的单一蛋白质纯度相对要低 并且凝胶过滤要求凝胶对要求组分不能有吸附作用 适用性较低 ） 相对盐溶和盐析来说，分离单一蛋白质的纯度要高，且更好的保留其天然理化性（盐溶要求蛋白质分子吸附某一盐离子从而改变其溶解性 但有些蛋白质吸附某些盐离子后其蛋白质构象及理化性会发生改变）。 相对有机溶剂分级分离法，更好的保留其天然理化性（有机溶剂分类法易造成蛋白质不可逆变形 且适用范围窄） 相对凝胶电泳和等电聚焦来说 更易于实现大量制备分离 且不改变蛋白质结构和功能（电泳会影响蛋白质结构 且操作繁琐 成本高） 相对亲和层析来说 它更加易于实现且成本低廉效果也不错（亲和层析需要制备其配体并与载体交联 因而制备难且成本较高）
PS: 最好的分离方法不是例子交换色谱法 而是高效液相色谱法 相对离子交换色谱来说有着更高的效率、更高的分辨率和过柱速度