血清过滤柱再生

A. 液相色谱柱的保养方法

此法适用于成都摩尔科学仪器有限公司GP-C18、HP-C18、BR-C18、Bio-C18和GP-C8或者其他公司品牌的类似色谱柱。

一、新柱活化

由于色谱柱由生产厂家实验室测试完毕密封好后到达您的手中可能经过了一段时间，因此必须对您刚拿到手的柱子进行活化处理：首先，配好65%乙腈/水或者纯甲醇溶剂备用，所有进入HPLC仪器的溶剂必须经过0.2um或者0.45um过滤膜过滤并脱气；再按柱子的正确方向连接柱子进口端(连接时注意一定要把管路的端口抵紧柱子的进口以免产生死空间发生漩涡效应降低柱效),出口端先不接检测器。先以0.1~-0.2ml/min的流速冲洗，等看到有液体从柱子中流出后，持续10mins之后再接上检测器，以循序渐进方式将流速调至1.0ml/min(LC/MS柱子应以0.2ml/min的流速进行),继续活化2小时。

二、柱子使用

1、 首先要确认您所要分析的样品流动相的pH范围是否在您的柱子的pH范围之内，以免损坏柱子硅胶！

2、 接下来就是用你做样品的流动相去平衡柱子，如果您的流动相中含有缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去过渡10倍柱体积(150x4.6mm柱子约为30ml，250x4.6mm柱子约为45ml；下同)以上，再用带盐的流动相去平衡柱子足够的时间(直到基线非常平稳为止)，之后方可进样分析。

3、 无论您分析何种样品，都会由于各种原因样品中总有部分杂质，因此建议您在进样前在柱子前端加接保护柱以保护您那昂贵的分析柱，或者用0.2um或 0.45um针头过滤器过滤样品后方进样分析！

三、柱子清洗

分两种情况进行：

1、如果您的样品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流动相(包括流动相里面加了点酸)，在做完样品后可直接用65％的乙腈/水或者纯甲醇进行清洗10倍柱体积即可保存(如果时间有限，可视情况在仪器能承受的范围内加快流速******为2ml/min)；

2、如果您的样品分析用到了含缓冲盐或者酸或者离子对试剂的流动相，在做完样品后的清洗必须按照下列2个步骤进行清洗柱子(不论您的柱子是否可以耐纯水的极性柱子还是一般的通用性柱子)：

a、***重要的步骤——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱体积溶剂以上，1~2ml/min(根据时间自由调节流速：如果因为时间来不及而清洗不了那么长时间，可以适当加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子应以0.2~0.5ml/min的流速进行)，

b、65~90%的乙腈（甲醇）/水或者纯甲醇/乙腈，清洗5~10倍柱体积，1~2ml/min。

四、柱子的再生

色谱柱属于色谱分析的常用消耗品，它是有寿命的；但它寿命的长短与我们的样品处理程度、有无加保护柱以及清洗是否恰当和彻底紧密相关！！！当柱子在使用一段时间以后，它的柱压可能升高，柱效可能降低，这时如果我们对柱子进行再生，它的寿命也许会得到一定的延长。首先把柱子的方向颠倒过来（只限于成都摩尔科学仪器有限公司的色谱柱，其他公司的柱子不保证），

一、然后具体按如下方法进行：

1、5％的乙腈/水清洗20倍柱体积，1ml/min(刚开始以0.1ml/min运行，慢慢上升；下同)；

2，四氢呋喃(THF，色谱级)过柱30mins，1ml/min；

3，65~90％的乙腈（甲醇）/水 或者纯甲醇(乙腈)，清洗10倍柱体积，1ml/min。

二、蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:异丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈： 异丙醇（1 : 2,v/v, 内含0. 1% 三氟乙酸）→水：异丙醇( 1 : 4, V/V) ，分别冲洗10～20倍柱体积。（注意每项过渡时，压力的控制，压力******控制在1500 psi以下，根据柱子的具体情况请自己优化流速）。

B. 免疫血清如何进行保存

免疫血清的鉴定、纯化和保存 凝胶过滤法（Gel filtration）：
利用具有分子筛效应的多孔网状凝胶做为介质，可分离提纯分子量不同的大分子物质。在凝胶过滤过程中，分子量大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙先流出凝胶柱外，分子量小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞，流速缓慢而最后流出柱外，这样就能将分子量不同的物质分离。 生物帮上面有这方面的介绍的。 http://proct.bio1000.com/100245/ 抗体产品

C. 提高液相色谱中柱效的有效途径有哪些

1、可以进行一下操作
（1）、将色谱柱头尾调换，反冲色谱柱。
（2）、将柱子清洗：甲醇--乙腈--异丙醇--氯仿--环己烷--氯仿--异丙醇--乙腈--甲醇，每种溶剂冲洗30min~40min。
（3）、酸碱冲洗柱子：（假设之前是中性流动相）含0.5%甲酸的甲醇水9010冲洗40min--甲醇水9010冲洗40min--含0.5%氨水的甲醇水9010冲洗40min，（或先碱后酸）。
2、平时使用过程中多注意其使用事项也是有助于仪器性能的使用的

色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养： 使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱： 如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
色谱柱的再生
因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现拖尾峰(tailing peak)。前者少见。>色谱峰高降低，基线的两个交点间的距离。W＝4σ>峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。
3、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法 色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），以下列举了部分常见原因及解决办法：
（1）色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染； 解决方法：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声。

D. 献血后,工作人员将血清过滤后，将血浆再重新注入体内,有危险吗

献血的时候那个血袋是一个四联袋，一次能制备三种血液制品。比如采集到400毫升全血，分离出一袋红细胞悬液，一袋病毒灭活冰冻血浆，一袋冷沉淀凝血因子。所需要的步骤很简单，不需要也不可能暴露于空气中。

E. 细胞培养基加了血清后还可以过滤么

1、血清要做灭活处理；
2、灭活后的血清要经过.45和.22虑膜过滤；
3、培养基是不可以紫回外照射的。
还要答注意一点的是血清一般不推荐直接过滤除菌的，如果怀疑血清染菌，过滤时要把血清按比例加入到培养液中，然后才可以过滤除菌！！

F. 过滤柱模拟了什么

模拟尿液形成过程中的肾小球过滤过程。没有模拟重吸收功能。为了不让有用物质过滤出去，透析液中的有利物质的浓度和血液要基因相同。

G. 细胞培养时，为什么勿直接过滤血清

买来的就已经过滤过除菌了，如果污染了直接扔掉吧，血清过滤起来很费劲的

H. 请问细胞培养中胎牛血清过滤的详细步骤,

胎牛血清买回来先化开，然后56度半小时灭活，在正常过滤就行。如果你用一次性滤器，内那就先准备容20或50ml的注射器，用注射器抽取，拔掉针头，再把一次性滤器插入注射器出口，把滤出的血清放灭过菌的容器就行，我一般放50ml离心管中，用时也方便，否则血清反复冻融不好，也容易染菌。

I. 液相色谱柱再生

色谱柱使用久了，会出现分离度降低，理论塔板数降低等柱效降低的现象，适当处理能使柱效恢复。但不是所有柱子 都能倒冲的，最好问问生产商。不了解的话，还是按下面的方法处理一下试试。
常规处理:硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱先用蒸馏水冲洗,再用甲醇冲洗,然后用甲醇与蒸馏水以一定比例混合的溶液冲洗后过夜。
对于已使用一段时间后柱效下降的色谱柱可按以下方法进行再生。再生处理包括活化(右→左)和净化(左→右)两种。硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按下列顺序冲洗:三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。键合相硅胶柱:蒸馏水←→甲醇(冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺)。离子交换树脂柱:高浓度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分树脂再生,油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗,酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗,碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。凝胶色谱柱:由于凝胶色谱柱是根据被分离物质的分子量大小而分离物质,通常用稀的氢氧化钠或非离子型去垢剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)冲洗可除去大部分的结合物质,如果一些污染物仍然不能清除时,用24%或30%乙腈冲洗过夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去亲水蛋白,用蛋白水解酶处理可分解凝胶中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。
已污染的色谱柱的处理:因保留强的物质污染,流动相或样品中不溶物沉积于柱头,可用下列方法洗涤:去除脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml的四氢呋喃。
柱头处理:对于柱头堵塞污染严重的情况而且用溶剂冲洗无效的色谱柱,只有打开柱子去除柱顶的填料重装:先拆下不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见凹陷或受污染的带色填料,剔去不规则床层和带色填料,使柱床显白色并完全水平,再用甲醇作糊状填料匀浆液,将糊状填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复直到填料水平。

柱子的贮存:首先柱子必须清洗干净后才能贮存,柱子不能贮存在水或水性溶剂中,否则会引起微生物的滋生。极性色谱柱可用适当溶剂如二氯甲烷冲洗;键合相色谱柱用甲醇冲洗;阴离子交换色谱柱用0.002%洗必泰(双氯苯双胍己烷)的缓冲液冲洗,阳离子交换色谱柱用0.005%硫柳汞缓冲液冲洗;凝胶色谱柱用缓冲液中加0.02%叠氮化钠或用20%乙醇冲洗。再将柱子两头密封,以防止溶剂蒸发使柱子干燥而引起柱子结构的几何学改变。