1. GST标签蛋白的纯化，目的蛋白在GST标签切除后的浓缩、纯化（离子交换和分子筛）过程中出现了聚集和降解。
gst-tag切除后直接过一个gst柱，tag就挂柱上了，目标蛋白就在穿透里了。
如果带着标签纯化的话，过内离子柱不是还要容摸索条件吗，而且分子筛的纯化量很低。
建议先过gst柱，然后柱上酶切掉标签，这样穿透里就会是目标蛋白，也不容易发生聚集啥的
2. HIS蛋白纯化后，没有蛋白，是蛋白没有挂柱，还是蛋白挂在柱子上没有下来，有什么好的解决方法吗。。。
在亲来和纯化中，his标签常常源会遇到这种问题， 没有收集到蛋白可能是蛋白溜走了，没有收集到，可能使样品的缓冲液不正确，尤其针对pH值，或者是his标签没有暴露出来，因此没有挂住，或者可以用WB检测一下HIS是否还在，更多his亲和纯化的相关问题，可见文章，总结的比较实际有用，希望对你有所帮助，http://wenku..com/view/521ff9cec281e53a5902ff27
3. 蛋白质水解产物阳离子交换柱层析时的洗脱顺序
pI 10.76的那个应该带正电荷。阳离子交换柱本身带负电荷。
4. 在离子交换层析中刚开始盐梯度洗脱蛋白质就都被洗下来了，要怎么处理这个问题
可以调节流动相的ph值试试
5. 用阳离子交换柱子分离蛋白，怎么调缓冲液ph
不知你将什么"缓冲液"调节到一定PH浓度？把问题讲明了一点…
6. 蛋白挂在阳离子交换柱上洗脱不下来，怎么办
疏水层析目的蛋白结合太紧，一般需要降低疏水作用，可以考虑降低结合时中性盐的浓度。使用疏水力较弱的层析填料，比如丁基疏水、辛基疏水的填料。 洗脱时可以用蒸馏水直接洗脱，如果还是那以洗脱的话可以尝试添加低浓度乙醇
7. 纯化的蛋白迅速降解原因
有的蛋白质在常温常压下是不能成功纯化的，因此你首先应该了解你的目的蛋白。
我们比较幸运能在常温常压下纯化，就我们的经验来说：1.纯化所用的玻璃器皿一定要彻底清洗，蒸馏水冲洗后140度以上高温烘干（可以参见普通的实验室手册）， 其他可高压灭菌的高压灭菌，或用一次性的。这些是最基本的。2.缓冲液中可以加入b-ME或DTT，不过DTT比前者贵得多。3.EDTA常规都加。4.如果你的样本很少又珍贵并且不怕花钱的话，可以联合使用两种以上的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)(protease inhibitor)（类似cocktail 的方法）如pepstatin、PMSF、leupeptin等，根据情况吧。5.如楼上所说，没有层析柜，可以用一个透明门的冰箱代替；有的实验室有4度冷库，可以直接在里面操作，很不错。6.样品保存也很关键，上样前收集后都须低温保存，一旦鉴定完了就分装冻起来，或是制成干粉，避免反复冻融。
甘油没有用过，你还是在查查吧。
不过各种类型的介质都有流量流速限制，这就不用说了。离子交换柱好像对速度的要求更加严格吧？这一点还请楼上的指教。
除了本身纯化过程需要注意以外,也特别小心前面处理的过程,例如超声破碎时间及强度,如果过强和时间长也可能断裂,我觉得得从提取开始检测到底是什么原因,同时看一下蛋白的稳定性,如果是保存你的降解带没有明显变化,那就不一定是自己降解的,也许是处理或者纯化过程造成的,总之要全面监测,好知道到底是什么原因,才好找到相应的办法.
甘油是有一定的作用,但是如果是纯化加的话,那最好别超过10%,否则太粘根本流不动,而且也许蛋白会沉淀堵柱子,还需要考察不同的盐对降解的影响,我知道有的时候高盐也可以抑制降解,还有注意pH,而且可以加点EDTA看看.因为不少酶需要金属离子活性更高.
8. 蛋白纯化时样品过完层析柱后放于4度能放多久
看具体是什么蛋白了，有些蛋白结构稳定可以在4度存放超过一周，有些蛋白结构不稳定需要纯化完立刻-80度冻上。
同时还要取决于层析结束后的缓冲是否适合冻融，以及之后是否还有其他纯化步骤。不过不论哪种情况下最长也不要再4度存放超过一周，即使蛋白稳定但也是会有长菌的情况。
9. 过柱子纯化蛋白酶没有活性是怎么回事
这个很难说，因蛋白而异。另外，聚体是否一定没活性也不好说，很多蛋白dimer才有活性，要具体分析。
蛋白聚集有很多原因，盐，ph，温度，蛋白的疏水性，蛋白与蛋白之间的作用。一般分子筛柱不会影响蛋白聚集。可以试试上样的样品是否有聚集。如果没有，使用此缓冲液作为洗脱液。这样就排除缓冲液的问题了
10. 求助离子交换柱纯化蛋白的问题
离子交换树脂是一类具有离子交换功能的高分子材料。在溶液中它能将本身的离子与溶液中的同号离子进行交换。按交换基团性质的不同，离子交换树脂可分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类。
阳离子交换树脂大都含有磺酸基（—SO3H）、羧基（—COOH）或苯酚基（—C6H4OH）等酸性基团，其中的氢离子能与溶液中的金属离子或其他阳离子进行交换。例如苯乙烯和二乙烯苯的高聚物经磺化处理得到强酸性阳离子交换树脂，其结构式可简单表示为R—SO3H，式中R代表树脂母体，其交换原理为
2R—SO3H＋Ca2＋ （R—SO3）2Ca＋2H+
这也是硬水软化的原理。
阴离子交换树脂含有季胺基[-N（CH3）3OH]、胺基（—NH2）或亚胺基（—NH2）等碱性基团。它们在水中能生成OH-离子，可与各种阴离子起交换作用，其交换原理为
R—N（CH3）3OH＋Cl- R—N（CH3）3Cl＋OH-
由于离子交换作用是可逆的，因此用过的离子交换树脂一般用适当浓度的无机酸或碱进行洗涤，可恢复到原状态而重复使用，这一过程称为再生。阳离子交换树脂可用稀盐酸、稀硫酸等溶液淋洗；阴离子交换树脂可用氢氧化钠等溶液处理，进行再生。
离子交换树脂的用途很广，主要用于分离和提纯。例如用于硬水软化和制取去离子水、回收工业废水中的金属、分离稀有金属和贵金属、分离和提纯抗生素等。