离子交换柱纯化病毒

㈠ DEAE纤维素柱的原理

DEAE纤维素柱原理，基于离子交换层析：离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤回维素组成。

阴离子答交换基质结合，带有负电荷的蛋白质，然后这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质从而洗脱下来。

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基本信息：

性状：干燥纤维状。

用途：用于柱色谱分析，用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等，阴离子交换填料。

保存：常温干燥封袋保存。

DEAE—纤维素的使用方法：

称取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。

抽干，改用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用无离子水漂洗，使pH至8左右（用pH试纸检查）。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，浸泡平衡后使用。

㈡ 离子交换柱的工作原理是什么

离子复交换柱的原理制

采用离子交换方法，可以把水中呈离子态的阳、阴离子去除，以氯化钠（NaCl）代表水中无机盐类，水质除盐的基本反应可以用下列方程式表达：

1、阳离子交换树脂：R—H+Na+→R-Na+H+

2、阴离子交换树脂：R—OH+CL-→R-CL+OH+

阳、阴离子交换树脂总的反应式即可写成：

RH+ROH+NaCL—RNa+RCL+H2O

由此可看出，水中的Nacl已分别被树脂上的H+和OH-所取代，而反应生成物只有H2O，故达到了去除水中盐的作用。

3、混合离子交换柱（混床）：混床是装阳、阴树脂按一定比例（一般为1:2,以便阳、阴树脂同时达到交换终点而同时再生）装入混合柱而成，实际上它组合成了水中的H+和OH-立即生成电离度很小的水分子（H2O）,几乎不存在阳床或阴床交换时产生的逆交换现象，故可以使交换反应进行得十分彻底，因而混合床的出水水质优于阳、阴床串联组成的复床所能达到的水质，能制取纯度相当高的成品水。

㈢ 采用离子交换柱纯化蛋白时，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定

离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力内不一样人达容到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团 的不溶性物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成，根据引入解离基团的不同，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各 不相同，亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加，而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化，需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白 的最恰当的离子强度液不一定一样，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱，纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值……
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离子交换介质 http://proct.bio1000.com/100025/

㈣ 离子交换法制备纯水流过柱子的前30毫升水为何弃去

主要原因是前面的30毫升水中可能还有一些柱子中残留的前期的物质，这样的话可能会污染这些水哦。

㈤ 离子交换柱层析能分离纯化蔗糖酶的主要依据是什么

DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素，是阴离子交换剂。
其原理基于离子交换层析：离版子交换层析中，基质是由带权有电荷的树脂或纤维素组成。
由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。

㈥ 用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液

也可以用AEC，主要以流穿模式做。sspxiaoji(站内联系TA)用阳离子交换柱，可以考虑pH6.0-7.0的缓冲液，因内为容大部分蛋白质的等电点在这附近，带电荷少，这样容易穿透除去其他杂蛋白。而你的目的蛋白PI在11，挂柱应该比较牢固。但是有个问题需要注意，PH离你的目标蛋白PI太远，有可能导致挂柱后难以洗脱。

㈦ p柱层析 N柱层析

P-positive,N-negative

分别是阳离子和阴离子交换层析，两者原理类似，根据分离物质的带电属性进行分离，只不过一个是根据带正电的多少，一个是根据带负电的多少进行上柱和洗脱。

Sober 和 Peterson于1956年首次将离子交换基团结合到纤维素上，制成了离子交换纤维素，成功地应用于蛋白质的分离。从此使生物大分子的分级分离方法取得了迅速的发展。离子交换基团不但可结合到纤维上， 还可结合到交联葡聚糖（S-ephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）上。 近年来离子交换色谱技术已经广泛应用于蛋白质、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌体和多糖的分离和纯化。它的优点是:⑴具有开放性支持骨架，大分子可以自由进入和迅速扩散，故吸附容量大。⑵具有亲水性，对大分子的吸附不大牢固，用温和条件使可以洗脱，不致引起蛋白质变性或酶的失活。⑶多孔性，表面积大、交换容量大，回收率高，可用于分离和制备。
离子交换剂通常是一种不溶性高分子化合物，如树脂，纤维素，葡聚糖，醇脂糖等，它的分子中含有可解离的基团，这些基因在水溶液中能与溶液中的其它阳离子或阴离子起交换作用。虽然交换反应都是平衡反应，但在层析柱上进行时，由于连续添加新的交换溶液，平衡不断按正方向进行，直至完全。因此可以把离子交换剂上的原子离子全部洗脱下来，同理，当一定量的溶液通过交换柱时，由于溶液中的离子不断被交换而浓度逐减少，因此也可以全部被交换并吸附在树脂上。如果有两种以上的成分被交换吸着在离子交换剂上，用洗脱液洗脱时，在被洗脱的能力则决定于各自洗反应的平衡常数。蛋白质的离子交换过程有两个阶段——吸附和解吸附。吸附在离子交换剂上的蛋白质可以通过改变pH使吸附的蛋白质失去电荷而达到解离但更多的是通过增加离子强度，使加入的离子与蛋白质竞争离子交换剂上的电荷位置，使吸附的蛋白质与离子交换剂解开。不同蛋白质与离子交换剂之间形成电键数目不同，即亲和力大小有差异 ，因此只要选择适当的洗脱条件便可将混合物中的组分逐个洗脱下来，达到分离纯化的目的

㈧ 蛋白质分离纯化的四种方法

1、盐析法：

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法：

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂：

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

(8)离子交换柱纯化病毒扩展阅读：

蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。

机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20% ，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。

人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

㈨ 工业用纯水机的纯化柱单元

纯化柱内装填有美国罗门哈斯/陶氏公司所产UP核子级混床树脂，当原水通过纯化柱时，水中的阳离子与阳树脂中H+置换，水中阴离子与阴树脂中OH-离子置换，交换后进入水中的H+和OH-会立即结合生成H2O,从而使原水中的阴阳离子得以去除，其出水电阻率最高可达18.3 MΩ.cm。
一套完整的水处理系统由预处理系统、精处理系统、后处理系统三大部分组成。原水经PP滤芯（砂棒过滤器）、活性炭单元、软水器单元等预处理系统后，使水中的悬浮物（颗粒物质）、胶体、有机物、硬度、微生物等杂质含量大大降低，以减轻后续的反渗透、电除盐等精处理系统的处理负荷，延长其使用寿命。
PP滤芯
材质：聚丙烯热熔纤维滤芯。
特性：10μm滤孔能截留水中的颗粒物质（如自来水中常有的泥沙、铁锈），降低浊度，但不能滤除细菌和离子物质。
规格：10寸（250㎜）/20寸（500㎜）。
活性炭单元
活性炭的比表面积很大，且布满了孔径极小（10～30埃）的微孔，对有机物胶体、余氯、铁离子等有明显的吸附滤除作用。台式纯水机、净水器等常用10寸/20寸活性炭滤芯。大型纯水机组常用玻璃钢/不锈钢材质的活性炭滤罐。
软水器单元
大中型纯水系统常使用全自动软水器以除去原水中的钙镁离子。全自动软水器由钠离子树脂罐、再生盐箱及多路控制阀组成，能够设定程序控制运行，自动再生（时间型/流量型两种控制方式），再生时利用虹吸原理吸盐，再注水化盐，再生时间通常为2小时。
小型台式纯水机一般使用10寸/20寸软水树脂滤芯来降低原水硬度。
反渗透单元
RO（Reverse Osmosis）反渗透技术是利用压力表差为动力的膜分离过滤技术，源于美国二十世纪六十年代宇航科技的研究，后逐渐转化为民用，目前已广泛运用于科研、医药、食品、饮料、海水淡化等领域。
RO反渗透膜孔径小至纳米级（1纳米=10-9米），在一定的压力下，H2O分子可以通过RO膜，而源水中的无机盐、重金属离子、有机物、胶体、细菌、病毒等杂质无法通过RO膜，从而使可以透过的纯水和无法透过的浓缩水严格区分开来。
RO膜对高价离子、胶体、细菌及分子量大于300 dalton的有机物质（包括热源）去除率高达99%以上，对低价离子（NA+、K+）去除率达95%，当源水电导率<3505µs/cm，RO纯水电导率通常≤55µs/cm，符合国家三级用水标准。再经过原子级离子交换柱循环过滤，出水率可达18.2MΩ.cm。
反渗透法是可达到90%～99%杂质去除率最经济的方法，同时也是试剂级超纯水系统最好的前处理方法。
备注：RO膜的过滤能力受水温影响较大，最适合的水温为25℃～30℃，温度下降1℃，RO膜的产水量约下降3%，当水温接近0℃时，RO膜将停止产水。
超滤器单元
超滤膜又称为中空纤维超滤膜。孔径介于反渗透和微滤之间，约0.01～0.1μm，常用作纯水系统的后处理装置，可用于截留溶液中各种微粒、大分子溶质、细菌、病毒、热原等。超滤膜的孔径是由一定分子量的物质进行截留试验测定的，并以分子量的数值来表示，能够滤除热原的超滤膜的分子量通常为6000道尔顿（dalton）。
紫外仪单元
紫外线是一种肉眼看不见的光波，存在于光谱紫外线端的外侧，故称之为紫外线，依据不同的波长范围，被割分为 A 、 B 、 C 三种波段，其中的 C 波段紫外线波长在 240 － 260nm 之间，为最有效的杀菌波段，波段中之波长最强点是 253.7nm。
当紫外线设备产生的足够剂量的强紫外光照射到水、液体或空气时，其中的各种细菌、病毒、微生物、寄生虫或其它病原体在紫外光 UV-C 的辐射下，细胞组织中的 DNA 、 RNA 被破坏，从而阻止子细胞的再生 ，紫外线消毒设备在不使用任何化学药剂的情况下，较短时间内（通常为 0.2-5 秒）杀灭了水中、液体或空气中 99.9% 以上的细菌和病毒。科学试验证明，波长在 240-280nm 的紫外线具备有高效杀菌功能。
现代紫外线消毒技术是基于现代防疫学、光学、生物学和物理化学的基础上，利用特殊设计的高效率，高强度和长寿命的 C 波段紫外光发生装置，产生的强紫外 C 光照射流水（空气或固体表面），当水（空气或固体表面）中的各种细菌、病毒、寄生虫、水藻以及其它病原体受到一定剂量的紫外 C 光辐射后，其细胞中的 DNA 结构受到破坏，从而在不使用任何化学药物的情况下杀灭水中的细菌、病毒，以及其它致病体，达到消毒和净化的目的。
紫外线杀菌器以 304 或 316L 不锈钢作主体材料，以高纯石英管作套管，配合高性能的石英紫外线低压汞消毒灯管，具有杀菌力强，寿命长、支行稳定可靠等优点，其杀菌效率≥ 99% ，进口灯管使用寿命≥ 9000 小时。
紫外线杀菌
紫外线是一种肉眼看不见的光波，存在于光谱紫外线端的外侧，故称之为紫外线，依据不同的波长范围，被割分为 A 、 B 、 C 三种波段，其中的 C 波段紫外线波长在 240 － 260nm 之间，为最有效的杀菌波段，波段中之波长最强点是 253.7nm。
紫外线杀菌的原理一般认为是生物体内的核酸吸收了紫外光的能量而改变了自身的结构，进而破环了核酸的功能所致。当核酸吸收的能量达到致死量而紫外光的照射又能保持一定时间时，细菌便大量死亡。
紫外线杀菌的特点：
6. 紫外线杀菌速度快，效率高，效果好。
7. 紫外线照射不会改变水的物理和化学性质，对纯水不会带入附加物所引起的污染。
8. 适用于各种水的流量下，操作简单，适用方便，只需要定期清洗石英玻璃套管，更换灯管即可。
9. 体积小，轻便，耗电低。
10. 紫外线杀菌没有持续消毒作用，易受二次污染。
紫外光（UV）的氧化作用。
纯化柱单元
纯化柱内装填有美国罗门哈斯/陶氏公司所产UP核子级混床树脂，当原水通过纯化柱时，水中的阳离子与阳树脂中H+置换，水中阴离子与阴树脂中OH-离子置换，交换后进入水中的H+和OH-会立即结合生成H2O,从而使原水中的阴阳离子得以去除，其出水电阻率最高可达18.3 MΩ.cm。

㈩ 纯化水培养细胞、病毒有什么后果

蒸馏是一种很费能量的纯化水的方法，如果想达到18.2，要经过多次重蒸回馏。费能量不答说，还费很多水（水利用率很低，大部分水白白的浪费掉）。这种方法目前基本不用。
而电阻率18.2的水算是目前能达到的最高水质了。但也只是出水口而已。
用于细胞培养，动物注射是没有问题的。
一般细胞培养实验室都用这个。不过用自来水做为进口水源的很少（太费柱子）。一般是买那种桶装水。进一步纯发达到电阻率18.2的水，我们一般叫他超纯水。
而在医学上来讲，这种水不叫注射用水。国家对注射用水也不是这样规定的。一个是这样成本太高（实验室做做实验没问题）。另一个，只要水一接触空气，电阻就变了，没法监控，也没法检收。
一般国内的注射用是用纯化水蒸馏一回就算是合格了。当然，保存相对来说，比实验室要求严格。