㈠ 哪些方法可以进行蛋白质脱盐处理
小分子蛋白的脱盐用什么方法比较好透析、超滤、分子筛层析、冷乙醇沉淀等分子筛层析是最彻底的,不过对上样量有要求. 做冷乙醇沉淀的时候得先做预实验,防止蛋白变性.
㈡ 丙酮沉淀得到的蛋白溶于8m尿素,可以用脱盐柱除盐吗
包涵体用8M尿素还不溶解该怎么办
①
包涵体就是蛋白的变性聚集后的产物,6M盐酸胍及8M尿素是作为溶解包涵体的溶剂。
②
复性的过程是逐步去除盐酸胍或者尿素,从而使得蛋白天然构象逐步形成。
所以一般如果起始使用的是6M盐酸胍进行包涵体溶解,这个过程中逐步降低的是盐酸胍的浓度。
㈢ 如何用蛋白浓缩管
选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应回截留分子量答不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。
新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
(3)蛋白可以用超滤管脱盐嘛扩展阅读:
超滤浓缩离心管,最新推出专利产品Hydrosart膜2K型,具有极低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。
备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收;
㈣ 工业生产蛋白,提取液脱盐用什么方法超滤还是离子交换树脂好些理由是什么比如成本和效率方面
超滤,用于截留水中胶体大小的颗粒,而水和低分子量溶质则允许透过膜。由膜表面机械筛分、膜孔阻滞和膜表面及膜孔吸附的综合效应,以筛滤为主。所以超滤不能做为脱盐设备,一般用在反渗透前做除盐水预处理设备。
如果在你的问题中选的话只能用离子交换树脂了。
离子交换法是以圆球形树脂(离子交换树脂)过滤原水,水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透(RO)处理之前,先将水质硬度降低的一种前处理程序。软化机里面的球状树脂,以两个钠离子交换一个钙离子或镁离子的方式来软化水质。 离子交换树脂利用氢离子交换阳离子,而以氢氧根离子交换阴离子;以包含磺酸根的苯乙烯和二乙烯苯制成的阳离子交换树脂会以氢离子交换碰到的各种阳离子(例如Na+、Ca2+、Al3+)。同样的,以包含季铵盐的苯乙烯制成的阴离子交换树脂会以氢氧根离子交换碰到的各种阴离子(如Cl-)。从阳离子交换树脂释出的氢离子与从阴离子交换树脂释出的氢氧根离子相结合后生成纯水。 阴阳离子交换树脂可被分别包装在不同的离子交换床中,分成所谓的阴离子交换床和阳离子交换床。也可以将阳离子交换树脂与阴离子交换树脂混在一起,置于同一个离子交换床中。不论是那一种形式,当树脂与水中带电荷的杂质交换完树脂上的氢离子及(或)氢氧根离子,就必须进行“再生”。再生的程序恰与纯化的程序相反,利用氢离子及氢氧根离子进行再生,交换附着在离子交换树脂上的杂质。
㈤ 同一个超滤浓缩管可以用来纯化不同的蛋白吗
不可以的
不管是哪个公司生产超滤浓缩管使用后都会有蛋白残留在滤膜上,而不管是使回用氯化钠或答者氢氧化钠清洗都不能确保可以完全清理掉残留在膜上的蛋白。
如果不同的蛋白间混合使用,可能前一个蛋白会污染到后一个蛋白,甚至有些某些高活性的酶残留在上面会造成后一个蛋白被酶切降解,造成不必要的损失。