超滤js502a的作用

『壹』 one component system 单因子系统 是什么

单组成因素生产系统（one-component system）：
所有的组成成分都集中在生产细胞中。经典的反转录病毒生产系统就是由产病毒细胞（VPC）组成，重组反转录病毒由VPC细胞不断分泌至培养上清中。这种生产系统操作最为简单，但是往往产量不高或不稳定。采用这种策略，需要将重组病毒产生所需要的所有元件都稳定地置于生产细胞中。由于许多病毒基因产物本身对细胞有破坏作用或不能在细胞中稳定表达，因此这种策略在许多病毒载体的生产中难以实施。
第一节 病毒载体产生的原理

病毒载体的产生建立在对病毒的生活周期和分子生物学认识的基础之上。研究病毒载体首先要对病毒的基因组结构和功能有充分的了解，最好能获得病毒基因组全序列信息。病毒基因组可分为编码区和非编码区。编码区基因产生病毒的结构蛋白和非结构蛋白；根据其对病毒感染性复制的影响，又可分为必需基因和非必需基因。非编码区中含有病毒进行复制和包装等功能所必需的顺式作用元件。
各种野生型病毒颗粒都具有一定的包装容量，即对所包装的病毒基因组的长度有一定的限制。一般来说，病毒包装容量不超过自身基因组大小的105～110％。
基因重组技术的发展使病毒载体的产生成为可能。最简单的做法是，将适当长度的外源DNA插入病毒基因组的非必需区，包装成重组病毒颗粒。比如，本实验室曾将4.5kb的lacZ基因表达盒（CMV-lacZ-polyA）插入HSV1病毒的UL44（糖蛋白C）基因的XbaI位点中，病毒基因组的其余部分不改变，构建成重组病毒HSV1-lacZ100（吴小兵等，1998）。由于UL44基因产物对于HSV病毒在培养细胞中产毒性感染是非必需的，因此，该重组病毒可以在细胞中增殖传代。用这种重组病毒感染细胞，能将lacZ基因带入细胞并高效表达。用同样的方法，将AAV-2病毒的rep和cap基因片段（4.3kb）插入HSV1病毒的UL2（编码尿嘧啶DNA糖基化酶）或UL44（编码糖蛋白C）基因中，构建成具有提供重组AAV载体复制和包装所需的全部辅助功能的辅助病毒rHSV-rc（伍志坚等，1999）。
然而，这样的重组病毒作为基因转移载体有许多缺点。首先，许多野生型病毒通过在细胞中产毒性复制而导致细胞裂解死亡；或带有病毒癌基因而使细胞发生转化。因此必须经过改造使其成为复制缺陷性病毒并且删除致癌基因后才能用于基因治疗。其次，插入外源DNA的长度受到很大限制，尤其对于基因组本身较小的病毒如腺病毒伴随病毒（AAV，4.7kb）、反转录病毒（8～10kb）、腺病毒（36kb），如果不去除病毒基因，可供外源DNA插入的容量就十分小。因此，必须删除更多的病毒基因以腾出位置插入较大的外源DNA。 为了增加病毒载体插入外源DNA的容量，除了可以删除病毒的非必需基因外，还可以进一步删去部分或全部必需基因，这些必需基因的功能由辅助病毒或包装细胞系反式提供。
病毒载体大体上可分为两种类型：
重组型病毒载体：这类载体是以完整的病毒基因组为改造对象。一般的步骤是选择性地删除病毒的某些必需基因尤其是立早基因或早期基因，或控制其表达；缺失的必需基因的功能由互补细胞反式提供；用外源基因表达单位替代病毒非必需基因区；病毒复制和包装所需的顺式作用元件不变。这类载体一般通过同源重组方法将外源基因表达单位插入病毒基因组中。如在传统的重组腺病毒构建方法中，将外源基因表达盒（exogenous gene expression cassette）插入穿梭质粒（如pXCX2或pFGdX1）的腺病毒同源序列中，与辅助质粒（含有腺病毒基因组的质粒如JM17或pBHG）共转染293细胞，通过细胞内的同源重组获得含有外源基因的重组腺病毒（Graham FL and Prevec L 1995）。
无病毒基因的病毒载体（gutless vectors）：这类载体在不同的病毒载体系统中的称谓不同。对于腺病毒，一般称为mini-Ad；在HSV载体系统，一般称为扩增子（amplicon）载体或质粒型载体。重组AAV载体也属于无病毒基因的病毒载体。这类载体系统往往由载体质粒和辅助系统组成。重组载体质粒主要由外源基因表达盒、病毒复制和包装所必需的顺式作用元件及质粒骨架组成。辅助系统包括病毒复制和包装所必需的所有反式作用元件。在辅助系统的作用下，重组载体质粒（包含或不包含质粒骨架）以特定形式（单链或双链，DNA或RNA）被包装到病毒壳粒中，其中不含有任何病毒基因。这类病毒载体的优点在于载体病毒本身安全性好，容量大。缺点在于往往需要辅助病毒参与载体DNA的包装，而辅助病毒又难以同载体病毒分离开来，造成最终产品中辅助病毒污染，从而影响其应用。实际上，无病毒基因的病毒载体可以看作是重组病毒载体的一种极端减毒情况。
表1列举了几种常见的病毒载体的顺式作用元件和经典的包装方式。 载体 顺式作用元件 经典包装方式
反转录病毒载体
1） 两个长末端重复序列（LTR）：含有整合和调节转录的必需序列；含有转录增强子和启动子；
2） tRNA 引物结合位点p；
3）包装信号序列ψ。
载体质粒转染整合了所有必需基因（gag,pol,env）的包装细胞系如PA317，经选择培养获得产病毒细胞系（VPC）；细胞不裂解，病毒不断分泌至培养上清中。

腺病毒载体
两个末端倒转重复序列（ITR）；
包装信号序列。
载体质粒与辅助质粒共转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒感染293细胞而扩增；细胞每次被感染后发生裂解。

腺病毒伴随病毒载体
两个末端倒转重复序列（ITR）；其中包括了病毒复制起点、包装信号及整合和拯救所必需的顺式元件。
AAV载体质粒和辅助质粒共转染293细胞，并加辅助病毒（腺病毒或单纯疱疹病毒）感染。

单纯疱疹病毒载体
HSV 病毒复制起点ori； 病毒包装信号pac 。
PTCA重组病毒在互补细胞上传代；
扩增子病毒在辅助病毒存在下传代。

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第二节 病毒载体的包装系统

将外源基因包装到病毒壳粒中，是病毒载体生产的核心技术。一般地，病毒载体的制备包括以下要素：

宿主细胞
虽然现在已有可能对有些病毒载体（如AAV载体）进行体外（无细胞）包装（Zhou XH et al . 1998; Ding L et al. 1997），但是这种包装系统仍然需要细胞提取物，并且包装效率相当低，远远达不到可生产水平。至今为止，病毒载体的包装主要是在对该病毒敏感的宿主细胞中进行的。宿主细胞不但提供了病毒复制和包装的环境条件，许多细胞成分还直接参与了病毒复制和包装的过程。
病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因的表达盒
一般地，病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因的表达盒由细菌质粒携带，组成病毒载体质粒，是被包装的对象。由于病毒复制方式的不同，有些病毒载体如单纯疱疹病毒扩增子（HSV amplicon）载体在包装时，整个载体质粒都被包装进入病毒颗粒中；而有些病毒载体如反转录病毒、腺病毒伴随病毒载体的质粒骨架部分并不被包装到病毒颗粒中，只有病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因表达盒被包装到病毒颗粒中。
构建重组型病毒载体时，病毒复制和包装所需的顺式作用元件存在于病毒基因组中（病毒基因组可以由具有感染性的病毒颗粒提供，也可以质粒形式提供）。先将外源基因表达盒插入穿梭质粒携带的病毒同源序列中；将重组穿梭质粒转染至细胞中，再用辅助病毒超感染；或将重组穿梭质粒与病毒基因组质粒共转染细胞；重组质粒与病毒基因组在细胞中进行同源重组而产生表达外源基因的重组病毒。 重组腺病毒（Graham FL and Prevec L 1995）和重组单纯疱疹病毒（Pyles RB et al. 1997；Kramm CM et al. 1997）的传统制备方法都是采用这种方式。
为了使病毒载体的生产更为方便，病毒复制和包装所必需的顺式作用元件和外源基因的表达盒除了可以用质粒携带以外，也可以用另一种病毒（往往是辅助病毒）或生产细胞来携带。

辅助元件
包括病毒复制和包装所必需的所有反式作用元件。这些元件一般包括病毒基因转录调控基因、病毒DNA合成和包装所需的各种酶类的基因、病毒的外壳蛋白基因等。辅助元件的表现形式可以多种多样。常用的形式有：
① 辅助质粒（helper plasmid），如用于产生重组腺病毒的质粒JM17，用于重组AAV包装的辅助质粒pAAV/Ad（Rolling F and Samulski J 1995）等；
② 辅助病毒（helper virus），如用于HSV 扩增子载体包装的辅助病毒HSV1 tsK株；
③ 包装细胞系如用于反转录病毒载体包装的PA317细胞。
这些表现形式之间可以相互转化或合并。例如，辅助病毒可以转化为辅助质粒：传统的AAV载体生产系统常用腺病毒作为辅助病毒。研究发现，并非腺病毒的所有基因对AAV病毒的产生都是必需的，只需要腺病毒E1a, E1b, E2a, E4和VA RNA 5种基因就行了。因此，将这5种基因置于同一个质粒中，构建成的这种新的辅助质粒就完全可以替代原来的辅助病毒（Xiao X et al. 1998; Grimm D et al. 1998 ），不但提高了包装效率，而且避免了产品中腺病毒污染的问题。

上述几种要素的不同组合，便产生了各种各样的病毒载体包装策略。根据病毒载体生产系统的组成因素的多少，可将其分成以下几种：

单组成因素生产系统（one-component system）：
所有的组成成分都集中在生产细胞中。经典的反转录病毒生产系统就是由产病毒细胞（VPC）组成，重组反转录病毒由VPC细胞不断分泌至培养上清中。这种生产系统操作最为简单，但是往往产量不高或不稳定。采用这种策略，需要将重组病毒产生所需要的所有元件都稳定地置于生产细胞中。由于许多病毒基因产物本身对细胞有破坏作用或不能在细胞中稳定表达，因此这种策略在许多病毒载体的生产中难以实施。

双组成因素生产系统（two-component system）
这种生产系统一般由"一株病毒/一株细胞"组成。典型的例子是重组腺病毒生产系统。先用共转染的方法获得重组腺病毒毒种，再由该毒种和生产细胞（如293细胞）组成一个双组成因素的生产系统使病毒大量扩增。

多组成因素生产系统（multi-component system）
是由两种以上的组成因素组成的生产系统。传统的AAV载体生产系统就是由载体质粒，辅助质粒，辅助病毒和生产细胞4种因素组成。这种策略的缺点是影响因素多，操作复杂，产量不容易稳定，不利于大规模生产。 以上各种生产系统也可以相互转化。我们实验室通过将上述AAV载体生产系统的4种因素进行两两合并，即将辅助质粒和辅助病毒合并成一种重组的辅助病毒，将载体质粒和生产细胞合并成AAV前病毒细胞株，成功地将其转化成一种双组成因素的新型高效生产系统（伍志坚等，1999）。

一般来说，发展新的包装策略主要是为了以下几种目的：
（1） 减少生产系统中的组成因素，简化操作过程；
（2）提高生产效率，降低生产成本；
（3）避免或降低野生型病毒的产生；
（4）避免使用难以与产品病毒分离的辅助病毒。

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第三节 病毒载体的纯化方法

重组病毒的纯化与基因工程产品的纯化既有许多共性，又有显著的不同之处。病毒可以看作是一个具有特定结构的生物大分子，一般都由位于中心的核酸和包裹于其外的蛋白外壳组成。有些病毒还具有脂质膜和糖蛋白或糖脂。许多分离纯化蛋白质的方法如离心和梯度离心、盐析、柱层析、超滤、透析等方法都可用于病毒的纯化。然而，由于病毒结构的复杂性，纯化时不能采用蛋白质变性和复性的方法，因为一旦病毒蛋白发生变性，或病毒结构发生破坏，在体外就很难再重建成有感染性的病毒颗粒。因此，在病毒的纯化过程中必须保持病毒的结构不受破坏，并且监测其感染活性。
病毒的纯化一般分为以下几个步骤：

初始物（start material）的收集或制备
根据病毒产生方式的不同而采取不同的方式。对于不导致细胞病变和死亡的病毒如反转录病毒，可不断收集产毒细胞（VPC细胞）的培养上清作为初始物；对于在生产病毒过程中宿主细胞发生病变和死亡的病毒如腺病毒，在病毒产生达到高峰时，收集培养上清，并裂解细胞以释放细胞内的病毒。
培养上清和细胞裂解液都可作为纯化的初始物。在实验室的小规模制备中，往往采用将培养上清与细胞一起反复冻融3～4次的方法制备细胞裂解液作为初始物。对于初始物体积大于500ml的较大规模的制备，则需要考虑采用不同初始物的损益率。如果收集时大部分（90％以上）目标病毒仍存在于细胞中，为了减少操作大体积初始物带来的不便，可以考虑放弃上清中含有的目标病毒，而通过低速离心收集细胞，重悬于较小体积的缓冲液中进行细胞裂解制备细胞裂解液。对于腺病毒和AAV病毒的大规模制备都可以采用这种方式。如果通过延长培养时间可以使大部分的目标病毒释放到培养液中，也可以只收集培养上清而弃去细胞，从而省去反复冻融的步骤。
除了用反复冻融方法裂解细胞外，还可以根据目标病毒的生物学性质采用其它不影响其感染性的方法，如超声法、化学法（如在AAV病毒制备中用脱氧胆酸或氯仿）等。

初始物的浓缩
当初始物体积较大时，要考虑对其进行浓缩后再分离纯化。浓缩时最好同时能获得初步纯化对于效果。 在不影响目标病毒的感染性的前提下，可选用盐析、超滤、透析等方法进行浓缩。盐析法不仅可以用来浓缩初始物，同时也能达到一定的分离纯化效果。最常用的盐是硫酸铵；许多病毒如腺病毒、AAV病毒和单纯疱疹病毒用聚乙二醇/氯化钠系统沉淀可获得很好的效果并且不影响病毒的感染性。

目标病毒的分离纯化
氯化铯密度梯度离心法至今仍是分离纯化各种病毒的最常用方法。主要是依据不同病毒具有特征性的浮力密度，使其与细胞裂解液中的其它成分分离开来。收集到目标病毒特异的组分后，用透析法除去其中的氯化铯，获得纯化的病毒。用这种方法有时可获得极高纯度的病毒。目前在临床实验中应用的重组腺病毒大都是用这种方法进行纯化的。然而，这种方法也存在明显的弊病，主要是费时且操作难度较大，重复性较差；并且氯化铯对人体有毒性。因此随着基因治疗研究和应用的发展，用这种方法纯化的重组病毒可能不能适应人体内应用的要求。
用柱层析法尤其是亲和层析法分离纯化病毒可能成为用于临床的重组病毒载体大量纯化的主要方向。将病毒的特异性受体、抗体或化学合成的配体偶联在层析基质上并制备成亲和层析柱。将含有目标病毒的初始物经简单处理后直接上柱，最后洗脱和收集目标病毒。这类方法最近在AAV病毒载体的纯化中得到很高评价（Summerford C and Samulski J 1999）。

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第四节 病毒载体在基因治疗中的应用

自1989年开展第一例人体基因转移（标记基因）以来，据不完全统计，至今已开展了近400项基因治疗临床试验，涉及病人1000余人。2/3以上的临床方案中应用了病毒载体进行基因导入。
由于各种的病毒载体具有其特定的生物学特性，这些特性决定了其在基因治疗中的应用。
表2列举了常用的病毒载体的特性和适用范围 载体 顺式作用元件 经典包装方式
反转录病毒载体
1） 两个长末端重复序列（LTR）：含有整合和调节转录的必需序列；含有转录增强子和启动子；
2） tRNA 引物结合位点p；
3）包装信号序列ψ。
载体质粒转染整合了所有必需基因（gag,pol,env）的包装细胞系如PA317，经选择培养获得产病毒细胞系（VPC）；细胞不裂解，病毒不断分泌至培养上清中。

腺病毒载体
两个末端倒转重复序列（ITR）；
包装信号序列。
载体质粒与辅助质粒共转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒感染293细胞而扩增；细胞每次被感染后发生裂解。

腺病毒伴随病毒载体
两个末端倒转重复序列（ITR）；其中包括了病毒复制起点、包装信号及整合和拯救所必需的顺式元件。
AAV载体质粒和辅助质粒共转染293细胞，并加辅助病毒（腺病毒或单纯疱疹病毒）感染。

单纯疱疹病毒载体
HSV 病毒复制起点ori； 病毒包装信号pac 。
PTCA重组病毒在互补细胞上传代；
扩增子病毒在辅助病毒存在下传代。

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第五节 安全性检测

总的来说，病毒载体制剂的安全性检测主要涉及以下几个方面（Aderson RW 1996）：

有复制能力的病毒（replication competent virus, RCV）
RCV一般产生于重组病毒生产过程中基因重组事件。由于RCV具有复制能力，在生产过程中一旦出现，就可能呈现优势生长，从而影响载体病毒的产量；另外，含有RCV的制品用于人体内可能导致严重的病毒感染或急性/慢性病毒血症。
RCV是对用于基因治疗的病毒载体制剂安全性检测的特有项目。检测RCV的方法因不同的病毒载体而异。对于反转录病毒载体，检测有复制能力的反转录病毒（RCR）的方法主要是PG4 S+L- 分析法；也可采用其它的变通方法。对于腺病毒载体，检测有复制能力的腺病毒（RCA）主要采用空斑分析方法及PCR方法。

辅助病毒
对于生产过程需要辅助病毒参与的病毒载体如AAV病毒载体，由于这些辅助病毒本身具有复制能力并对机体细胞有破坏性，因此检测病毒制剂中的辅助病毒如腺病毒或单纯疱疹病毒的残存量十分重要。

其它成分的污染
检测指标包括细菌、霉菌、支原体、内毒素等及在纯化过程中所用试剂如氯化铯等的残余量。

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第六节 病毒载体的发展方向

基因治疗研究的快速发展对基因导入系统提出了越来越高的要求。病毒载体的发展也日新月异，包括对已有病毒载体的不断改进和完善，和越来越多的其它病毒被改造成为新的病毒载体。病毒载体的发展方向可归纳成以下几个方面：

简便、高效的病毒载体包装系统：考虑到包装的高效性和操作的简便性，越来越多的病毒载体生产系统将采用双组成因素系统。这种系统容易用于病毒载体的大规模生产（Liu XL et al.1999; Conway JE et al. 1999 ）。

无病毒基因的病毒载体（gutless viral vector）：去除病毒载体中所有的病毒基因，只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件，是病毒载体的重要发展方向。这种策略可最大限度地扩大载体的容量和减少病毒对细胞的直接毒性和病毒蛋白表达引起的免疫毒性。 腺病毒的微载体（mini-Ad）、AAV载体、HSV扩增子载体都是无病毒基因的病毒载体。这一发展方向需要解决的主要问题是建立高效、安全（无辅助病毒污染）的包装系统。

可调控表达外源基因的病毒载体：在许多疾病的基因治疗中，实现外源基因的可调控表达十分重要。如糖尿病的基因治疗，外源的胰岛素基因的表达最好能受血糖水平的调控；肾性贫血的基因治疗，EPO基因的表达最好能受血氧含量的调控等。目前所研究的表达调控系统主要包括各种药物诱导的表达"开关"。其中四环素控制系统（Tet-on和Tet-off）是人工设计的一种基因表达调控模式。这个系统在体外和动物体内实验中都表现出良好的表达调控作用（Fotaki ME et al.1997; Miller N and Whelan J 1997）。然而，由于其中的反式作用蛋白（tTA或rtTA）是异种蛋白，在机体内可能引起毒性作用和免疫反应，因此用于人体前还需考虑其安全性和长期有效性。
最近Binley K等（1999）报道了用缺氧反应元件（hypoxia response element ,HRE）腺病毒载体中外源基因的表达。缺氧可激活bHLH/PAS 家族转录因子的表达，它们可结合HRE核心序列上，诱发其下游基因的表达。

自我扩增型载体（self-amplifying vector）（Herweijer H and Wolff JA 1997）：目前的基因转移方法基因转移的效率仍相对较低，尤其是在体内。为了提高外源基因表达总水平，除了提高基因转移效率外，另一种方法是尽量提高外源DNA在细胞中的表达水平。用自我扩增型的表达载体是达到此目的的方法之一。这些载体是以正链RNA病毒Sindbis病毒和Semliki Forest 病毒为基础的。用目的基因代替病毒的外壳蛋白编码序列，导入靶细胞中，病毒的复制蛋白大量复制重组的基因组，mRNA水平的大量增加导致高水平的转导基因表达。自我扩增型载体的表现形式可以是RNA，DNA和重组病毒。

特异性复制型性病毒载体（specifically replicating vector）：指可在某种特性的组织中产毒性复制，而在其它组织中不增殖的病毒载体。这类病毒载体主要用于特异性裂解肿瘤细胞。如腺病毒突变株Onyx-015是55Kdal E1B基因功能缺失的腺病毒突变株，可以选择性地在p53基因突变的肿瘤细胞中增殖，而在正常组织细胞中不增殖。用这种突变株联合化疗治疗恶性肿瘤II期临床结果令人鼓舞（Kirn D et al. 1998），已进入III期临床试验，从此，许多人工改造的腺病毒突变体被用于肿瘤治疗研究中。如将腺病毒E1基因的表达用甲胎蛋白（AFP）启动子控制，使得该病毒只能在甲胎蛋白阳性的肝癌细胞中增殖导致细胞死亡。也可以将这种病毒的基因组分开装在两个互补的缺陷性腺病毒载体上（Alemany R et al. 1999），其中一个载体除了腺病毒复制和包装所必需的顺式作用元件外，只含有E1区基因，其中E1A基因的表达受AFP启动子的控制；另一个载体为E1区缺失的重组腺病毒。这两个载体同时感染AFP阳性的肝癌细胞时，病毒可不断增殖而引起细胞死亡；对于AFP阴性的细胞，E1A基因不表达，因而病毒不能增殖。类似的设计在HSV载体系统也有报道。除了用甲胎蛋白作为反式激活因子外，各种其它组织特异性表达的蛋白和调控序列都可被用来控制病毒的增殖。

嵌合型病毒载体（hybrid viral vector）：是指将不同病毒的基因元件进行组合，形成的重组杂合病毒。如腺病毒与AAV病毒的杂合体病毒，既具有腺病毒的感染性和基因组特性（双链线状DNA），又具有AAV病毒的染色体整合性（Lieber A et al. 1999）。各种病毒基因元件组合形成新的杂合载体的报道层出不穷，如单纯疱疹病毒扩增子与AAV病毒杂合载体（Johnston KM et al. 1997）、腺病毒与EB病毒复制子杂合载体（Tan BT et al. 1999）腺病毒与反转录病毒杂合载体（Caplen NJ et al. 1999）等，不一而足。这些杂合载体使重组病毒的特性多样化，以适应不同基因转移目的的需要。

靶向性病毒载体（targeted viral vector）：是指能特异性地结合并感染某种细胞的病毒载体。靶向性病毒载体的产生主要有两种方法。一种方法是将病毒颗粒与某一靶向分子（Harari OA et al.1999 ）或特异性抗体（Bartlett JS et al. 1999）偶联；另一种方法是通过改变病毒外壳蛋白的结构，使其对细胞的亲嗜性发生改变（Reynolds P et al. 1999；Krasnykh VN et al. 1996 ）。

参考文献

Aderson RW. 1996. Forum'96: Gene Therapy. P21-24
Alemany R, Lai S, Lou YC et al. 1999. Complementary adenoviral vectors for oncolysis. Krasnykh VN, Mikheeva GV. Douglas JT et al. 1996. Generation of recombinant adenovirus vectors with modified fibers for altering viral tropism. J Virol. 70:6839-6846.
Lieber A, Steinwaerder.DS, Carlson CA et al. 1999. Integrating adenovirus-adeno-associated virus hybrid vectors devoid of all viral genes J Virol. 73:9314-9324
Liu XL, Clark KR, Johnson PR. 1999. Proction of recombinant adeno-associated virus vectors using a packaging cell line and a hybrid recombinant adenovirus. Gene Ther. 6:293-299
Miller N and Whelan J. 1997. Progress in transcriptionally targeted and regulatable vectors for genetic therapy. Hum. Gene Ther. 8:803-815
Pyles RB, Warnick RE, Chalk CL et al.1997 A novel multiply-mutated HSV-1 strain for the treatment of human brain tumors. Hum. Gene Ther. 8:533-544
Reynolds P, Dmitriev I, Curiel D. 1999. Insertion of an RGD motif into the HI loop of adenovirus fiber protein alters the distribution of transgene expression of the systemically administered vector.
Rolling F and Samulski J. 1995 AAV as a viral vector for human gene therapy. Molecular Biotechnology. 3:9-15
Summerford C and Samulski J. 1999 Viral receptors and vector purification : new approaches for generating clinical-grade reagents. Nature Med. 5:587-588
伍志坚，吴小兵，侯云德. 1999. 具有AAV载体包装功能的重组HSV的产生. 科学通报. 44（5）：506-509
吴小兵，董小岩，伍志坚等. 1998. 以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究. 病毒学报. 14:359-364

『贰』 poolicos超滤和RO直饮机哪一种更适合家用

ro超滤设备,设备超滤机,如何做好水处理设备销售,只要做好这几点,做好这几点一定要学会,

『叁』 怎样养好小七彩

对于七彩神仙鱼的成长速度、鱼种、饵料及日常管理都有一定的要求标准；
如1.养水：饲养赏鱼有一句名言「养鱼先养水」，而何谓“养水”？这对一位欲成为七彩玩家或想升级的玩家都是最基础，也是最重要的基本要件，“养水”的主要意义是将自来水中的氯气及其它不必要杂质去除，储存以备换水之需。关于养水的量，建议是饲养七彩总水量的一倍，如果条件受限，至少也要有1/2的养水量，以备突发状况使用。
简易的养水法—在准备好的养水缸（槽），利用强力空气泵，经由汽泡石产生强力汽泡流，带动水体均匀滚动，达到气曝作用，将水中残留氯及氮、二氧化碳排出，气曝时间最少要16小时以上，才能有较好养水效果。如果在连续下了数天的雨后想换水，最好是换水时再加些水质稳定剂或再曝气多个6~12小时是比较能令人安心的。如果养很多缸而无法储存足够养水量，不妨在自来水与养水缸之间多加些配备来弥补养水不足的缺憾。
其方法如下：
（一） 加装前置过滤组：此种过滤组为一般家庭常使用的水质过滤器，不须加装动力马达靠水压即可，拆组串联都方便，使用时建议至少二支以上，第一支为10Micron滤棉蕊，可滤除水中悬浮杂质，第二支为活性碳蕊，可滤除水中氯气、重金属、残余农药。如果条件许可可串联4~6支为一组。效果自然更好。
（二） 活性碳塔：在市面上可在水质处理公司购得，购买时须先考量要处理的水量，再决定购买碳塔大小，另外得注意塔内填充为何种活性碳，因为质地好的活性碳，其处理的总水量与效果有相当大的差异性，好的活性碳能强力吸附氯、重金属、残余农药、对鱼有毒害的化学物质、脱色、除臭、处理水量大，反之则否。
（三） 阴阳离子交换树脂：其最主要功能是软化水质，一般使用离子交换树脂多为阳离树脂，因为其价格较低廉，功能为吸附钙与镁，而阴离树脂为吸附硫酸根、硝酸根、碳酸根及碳酸氢根，但价格较贵，二者同时使用可处理水质硬度、导电度均为0的纯软水。
（四） R. O.逆渗透：对七彩神仙而言，甚至对各种生物而言，用R.O.所产生的纯水来饲养，是弊大于利的。R. O.的基本原理是把一个水分子强迫挤过一个有更小孔隙的滤膜，使此水分子得以净化，杂质排除在外。因为从出水口出来的水是如此纯净，所以一些七彩所需的物质也都不存在于水中，如此，若要再添加微量元素，则似乎又不合经效益，所以并不建议使用。如果有其使用上的必要，建议以纯水混合养水达到我们所预定的电度来使用较妥当。例如繁殖缸则调到70μs较好，小鱼养成缸则调到200μs较好。以台湾水质条件而言，愈往南所用之设备可以逐项增加，但仍以使用到阴阳离子交换树脂就很够用了。有人说“不用养水就把七彩养得很好，为何要养水，增加麻烦”，如果是如此养七彩，建议您再进行养水的动作，相信更能突破瓶颈，而把七彩养的更好，而所做的动作和所得到的收获相信会使你更有成就感。
是否该采砂底饲养七彩神仙：
如果你属于观赏型玩家，建议是采用砂底，虽然是建议栽用砂底，但仍有些重点：
1.不可采用咸性珊瑚砂，而以水草砂或中性砂为最好。
2.颗粒太大或太小皆属不宜，太大容易使食物卡入缝隙中污染水质；太小则底部循环不良，底床活化效果差。
3.底砂的厚度最好不要低于5公分，这是最基础的硝化菌床厚度。
4.上部过滤器的吸水管必须接到过滤板，使缸中的水能循环流经底砂，达到物理及生化的双重过滤效果。5.利用换水时，用虹吸底砂清洁器清洁部份底床。铺设底砂，除了可以简化日常管理手续，水质也较稳定，若以纯欣赏鱼的角度是不错的方式，而除了欣赏鱼之外，如果能加上创意造景，如木化石山水景观，或以沉木加上硬质茎叶的水草，如榕类水草、铁皇冠、象耳及皇冠草等景观设计，更是会令人赏心悦目。 相关器具： 1. 鱼缸：这是绝不能省略的，但尺寸该多少呢？如果是种鱼缸，则建议以1.5尺×1.5尺×1.5尺（长×宽×高），水量约80公升。中鱼或成鱼则建议以3尺×1.5尺×1.5尺（长×宽×高）水量约160公升至4尺×1.5尺×1.8尺（长×宽 ×高）水量约240公升为宜，主要以方便管理为考量。 2. 空气帮浦：
如果你今天所饲养的缸数不多，（一~二缸）则使用单孔或双孔的帮浦即可，多缸数则可使用高功率气泵以中央系统供气，选择时以强、静、耐、省电为优先考量。
3. 滤器：内置、外挂、上部或滴流过滤，均有一定的功能，可依自已的需要及预算选择合的过滤器。
4. 照明：七彩对于灯光的要求并不高，可依自己的喜好选择适合的灯具与灯管，如为了视觉上享受，建议蓝系七彩使用太阳灯管，红系使用植物灯管（不要太红的灯管，如西瓜灯管），照度以一尺宽10W的照明即绰绰有余。

『肆』 超滤是什么

超滤技术

超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一。以大分子与小分子分离为目的，膜孔径在20－1000A°之间。中空纤维超滤器（膜）具有单位溶器内充填密度高，占地面积小等优点。

在超滤过程中，水深液在压力推动下，流经膜表面，小于膜孔的深剂（水）及小分子溶质透水膜，成为净化液（滤清液），比膜孔大的溶质及溶质集团被截留，随水流排出，成为深缩液。超滤过程为动态过滤，分离是在流动状态下完成的。溶质仅在膜表面有限沉积，超滤速率衰减到一定程度而趋于平衡，且通过清洗可以恢复。

笔者查找到资料表明超滤技术在制药工业、医疗、食品、生物工程、电子、化工、环保等行业中都有广泛的应用。

顺便推荐本书：
http://book.jqcq.com/proct/367673.html
《超滤技术与应用》
价格: ￥38.00元
出版/发行时间: 2004-03-01
出版社: 化学工业出版社
丛书名: 膜分离技术与应用丛书
作者: 华耀祖
ISBM: 7-5025-5107-7
版次: 1
开本: 1/16
页数: 357

本书介绍超滤技术的基本知识、基本原理和工业应用。
全书共9章。第1-3章介绍了超滤膜的基本概念、结构、性质、性能表征及制备方法。第4-8章介绍超滤膜的工业化应用及研究，包括操作控制、过程设计，操作条件的选择优化及提高超滤效率的途径等。第9章重点介绍了超滤技术在水处理、化工、轻工、食品、制药、环保及生物工程等领域的应用。 本书可供化工、石油化工、轻工、环保、医药等行业涉及超滤膜的研究开发、使用的研究人员、设计人员、操作人员、管理人员阅读，也可供大专院校师生参考。

目录: 第一章 导论
第二章 超滤膜
第三章 膜结构和膜性质的表征
第四章 超滤硬件
第五章 过程设计
第六章 浓差极化
第七章 污染和清洗
第八章 提高通量的途径
第九章 应用

出版社-化学工业出版社

『伍』 净水器真的有用吗

有用，净水器的功能就是过滤水中的漂浮物、重金属、细菌、病毒、余氯、泥沙、铁锈、微生物等都去除掉，它具备精度高的过滤技术。

(5)超滤js502a的作用扩展阅读

选购净水器的基本原则是要除掉水中的可见的污染物，例如铁锈、胶体物质、异味和异臭、余氯和一些消毒副产物、有机污染物，重金属等，并能保留水中的矿物质元素。根据不同地区的水质情况，选择合适的净水器。

1、不同地区的水质硬度不同，我国北方高硬度水质和南方石灰岩地区，水中钙、镁离子含量较高，容易结垢，应选购带离子交换树脂滤芯的高级过滤净水器。

2、水中含氯、异色异味较重，有机物含量较多的城市自来水，可选购活性炭载量较多的家用净水器。因为活性炭对水中余氯、异色异味有强力吸附作用，对有机物有明显的去除效果。

3、用于城乡水质较浑浊的自来水净化的，应选购有粗滤、精滤双重功能的家用净水器。 对于水中污染严重，要求彻底滤除水中任何杂质，不需加热直接饮用的，应选购反渗透纯水机。

『陆』 从来没用过净饮机，好处有多少呢

一般新的效果较好，使用一段时间后须换滤蕊，否则不但没净化作用反而水更脏，最大的好处就是你能吃上洁净的水，生产厂家一直有生意。

『柒』 沁园CJ-2 GJ新净水器怎么样

产品型号：CJ-2 规格：GJ
包装尺寸：330×125×450mm
毛重：6.8Kg 净重：5.8Kg
净水流量：2.5L/min
适用水源：版市政自来水 适用水压：0.1-0.5MPa

功能特点
1.时尚权、简约、黑白对比造型设计。
2.采用超大滤芯设计，净水流量是一般净水器的2-3倍。
3.可同时连接多达5台以上管线机，以满足您的多个房间或办公室的饮水需求。
4.后置滤芯能有效去除重金属，改善口感，出水为优质可生饮用水，保留人体所需的微量元素和矿物质。
5.配送精美鹅颈水龙头，方便直接饮水和厨房日常用水。

滤芯作用
第一级：聚丙烯熔喷滤芯（MG-PP-10）：
可有效去除水中铁锈、泥沙、胶体、悬浮物等，降低原水浊度；
第二级：颗粒活性炭滤芯（MG-GAC-10）：
具有极高的吸附能力，去除水中有机物、异色、异味、余氯、重金属等；
第三级：超滤膜滤芯（MG-UF-10）：
进一步截留水中极微小悬浮物、微粒、胶体、细菌、热源及水中大分子物质；
第四级：后置活性炭滤芯（MG-POC-10）：
更彻底地吸附过滤水中的异色、异味，调整水质口感，确保水质清醇可口。