㈠ 从分析原理简述hplc中,离子交换色谱,离子对色谱及离子色谱有何异同
离子色谱原理与离子交换色谱原理类似,离子色谱后一般使用电化学内检测器进行检测,适容用于分析无机与有机阴阳离子和氨基酸,以及糖类和DNA、RNA的水解产物等;离子对色谱主要是补充离子抑制色谱的不足,离子抑制色谱是指在流动相中加入弱酸或弱碱来抑制待测组分的离解,提高k值以利于组分的分离,一般针对酸性待测组分,可在流动相中加入弱酸,使待测组分减少在流动相中的离解,加强与固定相的分配,适用于有机弱酸碱或两性化合物的检测,但由于色谱柱一般是硅胶基质化学键合相色谱,其酸度耐受范围是2-8,因此在加入酸碱调节剂时还要兼顾流动相pH,导致无法通过此方法分析强酸强碱,因此引入离子对色谱,在流动相中加入可与强酸强碱抑制的离子对,通常分析碱加入烷基磺酸钠,分析酸加入季胺盐,适用于较强有机酸碱的分析。
㈡ 为什么说离子交换色谱法是分离蛋白质的最佳方法
它是根据蛋白质的组成物质氨基酸的物理性质(基于氨基酸电荷行为)为分离基础的方法。相对透析和超过滤及凝胶过滤来说,可以针对多种蛋白质中的某一种(前提是知道蛋白质的氨基酸组成及其离子交换树脂的亲和度及洗脱强度)进行分离。(而透析和超过滤还有凝胶过滤方法更大的取决于相对分子质量及其结构 分离出的单一蛋白质纯度相对要低 并且凝胶过滤要求凝胶对要求组分不能有吸附作用 适用性较低 ) 相对盐溶和盐析来说,分离单一蛋白质的纯度要高,且更好的保留其天然理化性(盐溶要求蛋白质分子吸附某一盐离子从而改变其溶解性 但有些蛋白质吸附某些盐离子后其蛋白质构象及理化性会发生改变)。 相对有机溶剂分级分离法,更好的保留其天然理化性(有机溶剂分类法易造成蛋白质不可逆变形 且适用范围窄) 相对凝胶电泳和等电聚焦来说 更易于实现大量制备分离 且不改变蛋白质结构和功能(电泳会影响蛋白质结构 且操作繁琐 成本高) 相对亲和层析来说 它更加易于实现且成本低廉效果也不错(亲和层析需要制备其配体并与载体交联 因而制备难且成本较高)
PS: 最好的分离方法不是例子交换色谱法 而是高效液相色谱法 相对离子交换色谱来说有着更高的效率、更高的分辨率和过柱速度
㈢ 离子交换色谱法的好处与坏处
离子交换色谱相对来说更广谱些,效率些,如同大网,原子的更细致些,如同小网
㈣ 离子交换色谱的低级问题
会交换一部分,但因为存在竞争的关系,而且也与浓度有关。所以色谱柱会有再生的过程。详细的建议你去“色谱世界”网站看看,这个网站在色谱方面非常专业,对你会有较大的帮助的。
㈤ 强阴离子交换色谱怎样改善分离度
原理抄: 离子交换色谱(ion exchange chromatography,IEC)以离子交换树脂作为固定相,树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时,组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。
㈥ 离子交换色谱的应用及特点
这两类树脂的吸附性能都很好,但有不同特点。丙烯酸系树脂能交换吸附大多数应用树脂要根据工艺要求和物料的性质选用适当的类型和品种。
㈦ 如何提高离子交换色谱法的选择性
液相色谱通常均采用填充柱。
色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相、U形管等形状。回
色谱柱可分为答填充柱和开管柱两大类,以及色谱柱的制备和操作条件装填有固定相用以分离混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形
㈧ 离子交换色谱中,为何能够利用pH梯度改善分离选择性
呵呵,刚才加了AKTA的培训,就献丑了。
离子交换色谱中,PH的影响极大。要知道为何能够内利用pH梯度改善容分离选择性?就得知道其原理:
离子色谱是利用相反电荷之间的相互作用来分离的,当检测物质带负电荷时,要选择阴离子色谱柱,阴离子色谱柱带正电荷的配基,进行阴离子-阳离子交换,结合带负电荷的分子,经过交换后检测物质的带负电荷的分子就会吸附色谱柱上,然后在用高盐洗脱,洗脱的组分先后进入检测器,就达到了检测的目的。
当检测物质带正电荷时,道理类似,自己想吧。
pH梯度可以改变检测物质电荷、偏离等电点的程度,从而影响带正/负电荷的分子(或离子)与色谱柱的结合能力(可以认为是牢固程度),洗脱时的难易程度就改变,从而改变了分离选择性。
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㈨ 离子交换色谱法的分离原理
离子交换色谱(ion exchange chromatography,IEC)以离子交换树脂作为固定相,树脂上具有固定离回子基团及可交换的答离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时,组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。
阳离子交换:
阴离子交换:
式中"--"表示在固定相上,Kxy和Kzm是交换反应的平衡常数,Z+和X-代表被分析的组分离子。M+和Y-表示树脂上可交换的离子团。
离子交换反应的平衡常数分别为:
阳离子交换:
阴离子交换:
平衡常数K值越大,表示组分的离子与离子交换树脂的相互作用越强。由于不同的物质在溶剂中离解后,对离子交换中心具有不同的亲合力,因此具有不同的平衡常数。亲合力大的,在柱中的停留时间长,具有高的保留值。