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台湾超滤离心管真空純化过滤装置

发布时间:2021-11-24 11:45:03

超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

⑵ 离心管和离心超滤管

离心管就来是一个简单的可自以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。
离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。。。。常用于浓缩样品。

⑶ 真空泵过滤装置在什么地方

真空泵过滤装置分为真空泵进气过滤器,真空泵排气过滤器和油过滤器,不同的过滤器安装在不同的位置,进气过滤器安装在进气口,作用是过滤抽气杂质;排气过滤器安装在排气口,作用是过滤油烟,油雾分离,让排气清洁,另外收集油滴再利用,油过滤器则是过滤油。滤哥三种滤芯有效配合,达到延长真空泵寿命,提高真空泵性能,节约成本的目的。

⑷ 超滤离心管价格

超滤离心管作为一种更为高效的超滤管装置可以有效的加快离心过滤速度,目前超滤离心管技术成熟,国内超滤离心管价格稳定,跟国外对比有很大优势

⑸ 纸带过滤机、转台式真空过滤机的工作原理

纸带过滤机、转鼓真空过滤机的工作原理:
真空转鼓过滤机由于其结构特专点,确定了它在如下属工况要求下使用,能达到满意的使用效果。
1、料浆中固体颗粒沉降速度不能太快,使用一般的搅拌器能保证形成均匀的悬浮液。
2、滤饼不需要过长的抽干时间即能达到所要求的滤饼含湿率。
3、滤饼能采用单级洗涤方法达到工艺所要求的纯度或者能有效回收滤饼中的残留物。
4、滤液和洗涤之间没有严格分割的要求。
滤饼形成速度快,鞥在400~500mmHfg(1mmHg=133.32pa)真空条件下,在数秒钟内形成滤饼,通常料浆的浓度(固含率)应在1%~20%(质量分数)范围内,滤液的固含量允许达到0.1%~0.5%(质量分数)。它被广泛地用于食品(如淀粉脱水和过滤)、医药、化学和废水处理、冶金、采矿、石油、钢厂和发电厂的粉煤灰脱水等场合。

⑹ 真空过滤装置哪里使用到吗

生物制药、实验室,都可以用到,比如赛多利斯Sartolab®真空过滤装置适合组织培养基、生物流体以及其它水性溶液的过滤

⑺ 超滤离心管 50kd能过滤抗体吗

3KD指的是截留分子量
截留分子量(MWCO:molecular weight cutoff)是使用分子量大小表示的超滤膜的截留性能,又内称作容切割分子量。
由于直接测定超滤膜的孔径相当困难,所以使用已知分子量的球状物质进行测定。如膜对被截留物质的截留率大于90%时,就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能,称为膜的截留分子量。实际上,所使用的物质并非绝对的球形,由于试验条件的限制,所测定的截留率也有一定的误差,所以截留分子量不能绝对表示膜的分离性能。也就是说3KD分子量的产品有可能透过膜也有可能被膜拦截,一般来说希望3KD的产品全部透过,需要选择截留分子量更大的膜,比如5KD

⑻ 超滤离心管是什么

离心超滤管是一种采用优化过滤结构的设计方式,减少浓差极化,降低了膜易污染堵塞机率,加快了离心速度,缩短了离心所需的时间;超滤离心管还可用的膜表面面积提供快速样品处理。

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