A. 培养基过滤
WC型微孔滤膜使用说明书
本厂用二醋酸——三醋酸纤维素为基材，以流涎法制成微孔滤膜（简称MC滤膜），是现在国内新型的一个品种，它克服了目前常用的硝酸—酸酸混合纤维素微孔滤膜（简称混合滤膜）的质脆、易断裂、有静电吸引、易燃，遇75%以上酒精易膨胀与溶解及在偏碱性溶液中易产生有毒的硝酸根和亚硝酸根等的不足之处。本厂MC滤膜在国内上百家药厂、医院、科研所等广泛用于大输液、针剂及各种溶液精滤，使用效果极佳，澄明度合格率普遍提高。目前该产品畅销全国，深受用户欢迎。同时微孔滤膜不但用于制药业，而且在生物制品、医学微生物学、化工、电子工业、冶金工业、临床化验、酿造、钟表、航空等工业方面超纯水的制备、空气净化、医药用油、润滑、燃料用油及科研实验化验室滤除细菌和微粒方面等将有越来越广泛的推广和应用。
一、 要用途
（1） 医药工业：用于水针剂，大输液及结晶前溶液的微粒和细菌过滤，抗菌素、球蛋白，疫苗血清及组织培养等过滤。
（2） 电子工业：用于半导体器件和集成电路车间的空气净化，制备洗涤用的高纯水质，对溶剂、显影剂、光刻胶等进行净化处理。
（3） 日化工业：用于日用化妆品中含乙醇和油脂类溶液的微粒过滤。
（4） 公共卫生：用于饮水过滤,河塘水质细菌过滤检查、工作地区粉尘微粒过滤检验。
（5） 食品工业：饮料果汁、酒类、油类等的灭菌和悬浮杂质的过滤。
（6） 亦可用于无菌检查——滤膜过滤法及其它科学研究中的分析测定等。
二、 MC型滤膜性能介绍
（1） 孔径均匀：用汞压法测定额定孔径分布均匀，并用放大电镜扫描图象分析，额定孔径基本一致。
（2） 孔隙率高：每平厘米滤膜中可包含一千万至一亿个额定微孔，以孔隙率测定法测得孔隙率在80%以上。
（3） 滤膜透水率高、滤速快：用透水率测定法测得0.8UM微孔滤膜透水率可达215亳升/平方厘米。分，1.2UM透水率可达311亳升/平方厘米。分。
（4） 强度高有韧性，因MC型滤膜生产过程中的三醋酸纤维素分子乙酰化完全、张力强度高，爆破强度法测定厚度0.10~0.15毫米膜，爆破强度≥3公斤/平方厘米，膜有韧性，即使对折数次也不易断裂，所以使用寿命长。
（5） 滤膜的各向同性：MC型滤膜为各向同性，不分正反面，对额定孔径以上的固体微粒能起到绝对截留作用。
（6） 热稳定性：在120度热压灭茵30分钟，热稳定性良好。
（7） 化学稳定性：可过滤PH2~11各种药液，还可过滤仪表油、5%醋酸、6N硫酸、6N氢氧化钾、无水乙醇、丙三醇、甲醇、正丙醇、导丙醇、偏笨三酸三辛酯、聚乙二醇、各种酒类、饮料、醋等。
（8） MC型滤膜还具有无毒、无媒质迁移等优点。
三、 可供规格
孔径（微米）：0.22 0.3 0.45 0.65 0.8 1.0 1.2 3~5
直径（毫米）：Ф25 Ф35 Ф50 Ф100 Ф150 Ф200 Ф300 Ф400 （如需特殊规格可定制）
各种孔径适用范围
（1）滤除微粒：应选用0.65um 0.8um 1.2um的滤膜.
（2）滤除细菌：应选用0.45um 0.3um 0.22um的滤膜.
四、 使用方法
（1） 将滤膜于70度左右的蒸馏水中浸泡4小时以上，使用前再用适量新鲜蒸馏水冲洗一二次，然后装入已洗过的滤器中备用。
（2） 过滤方法：可采用加压法、真空法或位差液压法、加压法的滤速随着压力提高而加快，一般不超过3~4公斤/平方厘米，采用抽气过滤时应防止外界空气的细菌、微粒污染。利用位差过滤，一般位差应考虑在3~5米以上（约相当于0.5个大气压），否则影响滤速。
五、 注意事项
（1） MC型滤膜适宜于PH2~11，对强酸强咸或某些有机溶剂不宜使用。
（2） 本品一般耐温120度，热压30分钟，耐2~4公斤/平方厘米。
（3） 微孔滤膜只能作为最后过滤阶段，滤液必须经过沙滤棒、滤纸、滤球等粗过滤材料，可避免滤膜堵塞。
（4） 操作MC型滤膜时不可触及尖硬物品，以免引起穿孔现象。在装滤膜前要严格检查微孔滤膜是否有漏孔，不合格不得使用。
混合纤维素酯微孔滤膜使用说明书
混合纤维素制成的薄膜滤材，经有关单位多次广泛使用，质量符合标准，其产品表面平滑、质地轻薄、孔隙率高、且微孔结构均匀，因此且有流速快，不易吸附的特点。
一． 用途
本品用于制药业、生物制品、矿泉饮料、酿造、电子等工业方面的水质、医药用油、润滑用油、燃料用油及科研实验化验室等滤除细菌和微粒，一般0。65微米以上可除微粒，0。45以下可滤除细菌。
二． 规格
混合纤维素酯微孔滤膜各种规格如下：
公称孔径（直径微米）0.2 0.3 0.45 0.65 0.8 1.0 1.2
膜片直径（毫米）25 35 50 60 100 150 200 300 400
（如需特殊规格另行定制）
三． 使用方法
1． 将滤膜平放于清洁盛器内，用70度左右的蒸馏水浸泡，使全部润湿，数小时后（约4小时以上）倾去水，再用上法浸泡过夜，使用前再用适量温蒸馏水清洗一次。
2． 将洗清的滤膜（湿）装入适宜的滤器中，防止周围漏液，自进液口放进滤液，并在:排气口排出空气，即可进行过滤。
四． 注意事项
1． 水膜片适宜于PH2-9的药液，对强酸碱或有机溶剂包括酒精等不宜使用。
2． 本品一般能耐温120度，耐压3~4公斤/平方厘米。
3． 微孔滤膜只能作为最后阶段过滤，滤液必须先经过沙棒或其它滤材预过滤，以免滤膜堵塞。
上述使用方法，仅适用于水剂药液或其它水溶剂的过滤。
B. 微孔滤膜用于注射剂滤过的滤膜孔径为0.45~0.8微米.这句话对吗
不对，微孔滤膜抄目前指袭0.2um-10um孔径的，但需要注意的是这里指的孔径不一定是绝对孔径，由于过滤器材材质本身结构不同，有些材质比如说聚醚砜就可以拥有绝对孔径，有些材质比如说聚丙烯就只能称作标称也径了。另外，同样一个过滤器，比方说聚四氟乙烯过滤器用于液体过滤时它的标称就是0.2，但用于气体过滤它的标称就是0.01um了，这主要是由于液体与气体在过滤介质内透过的方式不一样。
C. 针筒式滤膜过滤器中 注射器可以重复使用吗
针筒式滤膜过滤器主要用于色谱分析中流动相及样品的过滤，对保护色谱柱及输液泵管系统和进样阀等不被污染具有良好的作用。广泛应用于重量分析、微量分析、胶体分离及无菌试验中。适合水系及各种有机溶剂，耐所有溶剂，低溶解性。具有透气不透水、气通量 大、高微粒截留率、耐温性好，抗强酸、碱、有机溶剂和氧化剂，耐老化及不粘、不燃性和无毒、生物相容性等特点。
编辑摘要
针筒式滤膜过滤器
1. 用途
本产品主要用于色谱分析中流动相及样品的过滤，对保护色谱柱及输液泵管系统和进样阀等不被污染具有良好的作用。广泛应用于重量分析、微量分析、胶体分离及无菌试验中。
2. 类型：水系、有机容媒系。
3. 针器中滤膜材质性能特点
A. PTFE（聚四氟乙烯）
性能：适合水系及各种有机溶剂，耐所有溶剂，低溶解性。具有透气不透水、气通量大、高微粒截留率、耐温性好，抗强酸、碱、有机溶剂和氧化剂，耐老化及不粘、不燃性和无毒、生物相容性等特点。其相关产品广泛应用于化工、医药、环保、电子、食品、能源等领域。
B. 水系PES(聚醚砜)
性能：本品为德国MEMBRANA公司进口膜，具有较高的化学和热稳定性，流速快、耐酸碱能力强（pH范围1-14）; 具有高机械强度。
C. 有机系尼龙6（国产）
性能：具有良好的亲水性，耐酸耐碱，抗氧化剂。不仅适用于含有酸碱性的水溶液，更适用于含有有机溶剂，如醇类、烃类、脂类、酚类、酮类等有机溶剂。
D. 有机系尼龙66（英国进口）
性能：优于国产尼龙6性能，本产品适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%乙醇、二氯甲烷等有机溶剂。耐高温，强度好，化学性能稳定。
E. 聚偏氟乙烯 PVDF (美国进口)
性能：聚偏氟乙烯膜具有化学稳定性和惰性,适用于化学腐蚀性强的有机溶剂,强酸和强碱溶液,高效液相色谱分析中的样品制备.它具有疏水特性,可滤除空气和气体中的水份.聚偏氟乙烯膜被层压于支撑网上,有很强的强度和可操作性,可以耐130度高温.
规格
针筒式滤膜过滤器
Ф13 0.45μ
100个/包
★进口PTFE滤膜
针筒式滤膜过滤器
Ф13 0.2/0.45μ（水系）
100个/包
德国PES
针筒式滤膜过滤器
Ф13 0.2/0.45μ（有机系）
100个/包
英国尼龙66
针筒式滤膜过滤器
Ф13 0.2/0.45μ（PVDF）
100个/包
美国PVDF
针筒式滤膜过滤器
Ф25 0.2/0.45μ（水系）
100个/包
德国PES
针筒式滤膜过滤器
Ф25 0.2/0.45μ（有机系）
100个/包
英国尼龙6
针筒式滤膜过滤器
Ф25 0.2/0.45μ（PVDF）
100个/包
美国PVDF
针筒式滤膜过滤器
Ф25 0.8μ（水系）
100个/包
德国PES
D. 高效液相色谱仪器使用方法
一、脱气
流动相脱气对于避免HPLC系统出问题，顺利得到一个理想的数据是一个很有效的措施。HPLC系统内是不希望有气泡存在的。HPLC泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将观察到瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。
当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。为解决这个问题，有些仪器公司设计一个反压控制器，这样可以在检测器出口提供足够的压力保持气泡始终溶解在流动相中直到它们流出检测器。当然，这个压力不能超过流通池所能承受的压力极限，否则可能损坏检测器。
紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征兆。有些检测器对空气的存在也非常敏感，但表现出的征兆与UV/VIS不同，例如有报导说，当使用荧光（FL）检测器时，流动相中溶解氧的存在可能会使一些化合物失去荧光性。此外，对于利用待测物质在电极表面发生氧化还原反应引起电流变化而进行检测的电化学（EC）检测器，对流动相中的溶解氧的存在也非常灵敏。此外，气泡的存在有时还会导致保留时间不重现。
所以，必须注意消除流动相中的空气，并且还应避免空气由管路（如PTFE管）渗透进流动相中。
如果适当地关注在使用之前脱去流动相中溶解进的空气，上述这些问题均能避免，或把影响降至最低。常用的脱气方法有如下几种：
1、吹氦脱气法：利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但我们国内氦气价格较高，很少有实验室采用此方法。
2、 加热回流法：此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。
3、 抽真空脱气法：此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。
4、超声波脱气法：将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。此法的脱气效果zui差。
5、 在线脱气法：现在商品的HPLC仪器，均可配在线脱气机。在线脱气使用简单，低故障，有效。建议购买仪器时一定要购买，有的公司是作为选购件，所以与仪器公司谈配置时应与公司确认。
二、过滤
任何颗粒物进入HPLC系统后都会在柱子入口端被筛板挡住，zui后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形。因此，要采取各种预防措施，包括操作步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或减少颗粒物进入HPLC系统中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并提高数据的可靠性。在HPLC系统中，颗粒物的主要来源有三个途径：流动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。
1、流动相如果流动相均由高效液相色谱级溶剂组成，流动相没有必要过滤。这是因为高效液相色谱级的有机溶剂，例如乙腈、甲醇等，在制造的工艺过程中都已经过了0.2 µm微孔滤膜过滤。同样的，无论你是买的HPLC级的水还是在实验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2 µm微孔滤膜。
然而，如果有任何一种缓冲液中加入了固体物，例如磷酸盐，流动相过滤将是必要的一个步骤。虽然缓冲盐可能是可溶解的、高纯的，但它还是可能含有颗粒物质，例如在盖试剂瓶的塑料内盖时，塑料瓶盖子与瓶口边缘挤压就会产生塑料颗粒。在这种情况下，添加的一种固体物可能完全溶解了，但是少量杂质颗粒存在于流动相中成为残渣。
流动相通过0.45 µm微孔滤膜过滤对于从流动相中除去所有颗粒物是一个有效方法。0.2 µm微孔滤膜也可以用，但是它们就这个应用而言并不比0.45µm微孔滤膜更有效，而且它的过滤速度会更慢，特别是当实验室使用的试剂和水的质量不太好时。建议实验室在编写制定他们流动相制备标准操作程序（SOPs）时规定，可以借鉴国际上同类实验室的规定，即：
流动相制备仅采用HPLC级液体时不需要过滤，反之所有流动相组成在使用前必须过滤。
在连接储液瓶和泵的输液管的末端入口采用下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很重要的。这个过滤器的规格为≥10 µm的微孔物质，所以它不能取代流动相过滤步骤，但是它能除去系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的可靠性。
2、被测样品液相系统中的第二个颗粒物来源是被测样品。一些实验室在将他们的样品放置在自动进样器盘（或手动进样）以前，所有样品都先通过一个0.45 µm针筒式过滤器过滤。这是一个有效除去被测样品中颗粒物的方法。
但是这个过程也有一点需要关注：你使用了针筒式过滤器就不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会有或多或少的丢失。丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。如果有丢失，过滤后液体中被测物的含量或浓度与原基本样液的含量或浓度还相同吗？
这个问题一般需要通过实验确认。确认这步是要增加工作量和费用的。过滤器的使用是一种消耗，每个过滤器的价格从几元到十几元。但在做食品中残留物分析时，由于基质大多比较复杂，所以过滤这步已成为不可或缺的一步。在实际分析工作中，一般检测每一组样品会带一个外标、一个添加回收或是质控样品，所以，只要zui终检测时得到的信噪比能满足检出限要求，可将这步视为系统误差而忽略。
3、仪器系统部件的磨损物最后，在HPLC系统中颗粒物的另一个主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。关于输液泵密封垫的磨损更换有两种不同建议。
一种建议认为，在一般实验室中输液泵密封垫通常使用寿命为六个月到一年，因此建议半年或一年更换这些密封垫，实验室应基于上述观点制定定期预防性维护计划。该观点认为：与输液泵密封垫颗粒堵塞柱子而更换新柱子的费用相比，更换密封垫的费用低些。一些输液泵有玻璃砂芯或筛网，可在流路中滤掉从泵密封垫磨损下来的颗粒物，防止这些颗粒物随流动相流至柱头。若有这种装置应查阅输液泵操作手册，查看推荐的这种过滤器清洗或更换的间隔。
另一种建议则认为，原装密封垫的密封效果最好，更换以后容易引起流动相渗漏。所以，只要不漏液就不要轻易更换密封垫。
两种说法都有其道理，具体如何操作，建议与仪器公司工程师沟通，各公司的仪器还是有些不同的。
自动进样器旋转轴的密封随着使用时间也会磨损，但是在我的经验中，即便是高负荷的运转旋转轴密封垫也可以使用几年。如果你的自动进样器系统有计数进样阀转动次数的功能，你可以设定一个警铃当预设阀转动次数已达到时提醒你。
曾有一种说法，进样器最多转动20,000次，这仅仅是进样10000个；但这似乎不是实验室涉及的常规样品分析使用寿命，它们的实际使用寿命会更长。旋转轴密封磨损后会渗液，比较明显的特征是同一样品多次进样后，峰面积值差别比较大（RSD>5%）。当然，输液泵的密封垫和旋转轴的密封垫磨损将增加更多研磨物在流动相中，加速对这些部件的损伤。
此外，如果你日常运行的流动相有缓冲盐，如磷酸缓冲盐，密封垫的磨损会更快。无论颗粒物源于何物，实验时都要将其除去。推荐在HPLC系统中采用一个0.45或0.5 µm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如采用一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又方便（几分钟就可更换）。若采用在线过滤，HPLC系统检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升一定值，例如25%或增加500psi，应该更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。
三、冲洗
使HPLC系统良好运行的第三个要点是保持系统的清洁。你需要关注流动相流经该系统的所有地方，对于这些地方经常性的冲洗，将使你的系统保持在“Ready”状态。
1、流动相储液瓶首先要经常清洗流动相储液瓶，或者每做一批新样品更换一次流动相。一个脏的储液瓶将会污染注入的流动相。建议储液瓶中缓冲液使用时间不要超过一周，而有机溶剂使用时间不要超过一个月。
也有人建议储液瓶中保持用溶剂充满，直到更换分析方法储液瓶需更换新溶剂（流动相组成发生变化）时，将旧溶剂倒掉更换新溶剂，这样胜于将溶剂用完。但这对于分析样品量少的实验室而言似乎有些浪费。仪器公司的工程师建议储水瓶的水要天天换，每周瓶子还应该用异丙醇清洗一次。有的实验室则在水里加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生长。这些做法看起来有些繁琐，但却能起到“磨刀不误砍柴工”作用。
2、泵接下来要冲洗的是泵。千万不要一分析完冲几分钟后就停泵，特别是当流动相中含有难挥发的缓冲液（如磷酸盐）时。如果仪器不是连续使用，当流动相蒸发时，难挥发物就会粘在活塞密封垫的表面，难挥发物将形成固形物沉淀。这是泵密封垫磨损和单向阀渗漏的主要原因之一。所以，无论使用长短，在停泵以前一定要用非缓冲液流动相冲洗泵在半个小时以上，要是流动相中有难挥发缓冲盐则建议冲洗的时间应该更长些。
3、自动进样器自动进样器也要按规定清洗。现在的仪器多配有自动进样器的冲洗液瓶，通常只要注意及时更换、补充冲洗液即可。自动进样器用的洗涤液也要采用与流动相相同的方式处理，并根据溶剂的有效期和规定，清洗储液瓶或更换洗涤液。现在的自动进样器设置、操作都很简单，如果时间允许（特别是利用夜间运行），每次分析完后设置进1、2针纯溶剂（如甲醇、乙腈），也是一个好做法。
4、色谱柱对柱子的污染是随使用时间而增加。通常表现是：运行走基线时在记录的色谱图中基线噪音增加，泵压也增加。解决这个问题的zui有效方法就是在每一批样品分析结束后或准备卸下柱子时用大量的流动相冲洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度冲洗效果更好，具体的比例要根据柱子的说明书和性质而定。
5、检测器如果是正常使用，检测器将依据其性质并按照说明书规定进行洗。例如UV/VIS检测器或FL检测器，在对柱子和系统进行冲洗时也就一同对检测器流通池中污染物进行了清洗。但是蒸发光检测器或质谱仪则需要按照说明书进行定期清洗。这些检测器在使用时会有难挥发污染物沉积，如质谱仪离子源的喷针、毛细管、锥孔板、预四极等部件，因而需要定期清洗。而且对联有这些检测器的系统冲洗时，最好与这些检测器断开，以减少对检测器的污染。
总之，实验室日常使用的液相色谱仪要是能认真做好这三项工作——脱气、过滤和冲洗，你的仪器可以得到良好的预防性维护，使用时就会感到比较顺手。当然，在实际操作时遇到的问题并没有这么简单，但这三个良好习惯将是正确操作、使用HPLC系统的基础。答案来自
E. 如何延长色谱柱的使用寿命
色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最主要的是与日常的委会密切相关。为延长色谱柱的使用寿命，维护您的利益，请仔细阅读此部分。 色谱柱的使用寿命主要是分局柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的日常维护方法： 一、流动相的PH应在使用的范围内 Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10，由于填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的PH值。 二、去除样品和流动相中的固体颗粒 样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45μm滤膜。 三、使用保护柱或在线过滤器 样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大 比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。 如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，科选择一下方式进行补救： 1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min。 2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。 四、正确使用缓冲盐 缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。 正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。具体方法如下： 1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。 2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min，再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。 注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相不含缓冲盐。 3、缓冲盐析出的补救方法： 1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min 2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。 五、防止强保留物质在色谱柱上存留 强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰型变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多药品特别是复杂样品而言，很难判断其是否是含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱。清洗方法： 1、未使用缓冲盐：每天分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min。 2、使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min 3、补救方法： 水乙氰氯仿（或异丙醇）乙氰水
F. 工作场所空气中有毒化合物的测定钡及其化合物具体有哪些
第一法 等离子体发射光谱法
原理
空气中可溶性钡化合物用微孔滤膜采集，水洗脱后，用电感耦合等离子体发射光谱仪，在455.4nm 波长处测量发射强度，进行定量。
仪器
1 微孔滤膜，孔径0.8μm。
2 采样夹，滤料直径40mm。
3 小型塑料采样夹，滤料直径25mm。
4 空气采样器，流量0～3L/min 和0～10L/min。
5 具塞刻度试管，25ml。
6 超声波清洗器。
7 针筒式过滤器，孔径0.45μm 微孔滤膜，直径13mm。
8 容量瓶，10ml。
9 电感耦合等离子体发射光谱仪。
仪器操作条件：
发射波长：455.4nm；
入射功率：1150W；
载气（氩气）流量：0.49L/min；
等离子体气（氩气）流量：1L/min；
冷却气（氩气）流量：14L/min。
试剂
实验用水为去离子水。用酸为优级纯或高纯。
1.硝酸，ρ20＝1.42g/ml。
2.标准溶液：称取0.1437g 碳酸钡（含量99.99％）于100ml 烧杯中，加入10ml 硝酸，加热溶解后，煮沸除去CO2。冷却后，用水定量转移入100ml 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液为1.0mg/ml 标准贮备液。临用前，用水稀释成100μg/ml 钡标准溶液；或用国家认可的标准溶液配制。
样品的采集、运输和保存
现场采样按照GBZ159执行。
1 短时间采样：在采样点，将装好微孔滤膜的采样夹，以5L/min 流量采集15min 空气样品。
2 长时间采样：在采样点，将装好微孔滤膜的小型塑料采样夹，以1L/min 流量采集2～8h 空气样品。
3 个体采样：将装好微孔滤膜的小型塑料采样夹佩戴在监测对象的前胸上部，进气口尽量接近呼吸带，以1L/min 流量采集2～8h 空气样品。
采样后，将滤膜的接尘面朝里对折，放入具塞刻度试管中运输和保存。样品可长期保存。
分析步骤
1 对照试验：将装好微孔滤膜的采样夹带至采样点，除不连接空气采样器采集空气样品外，其余操作同样品，作为样品的空白对照。
2 样品处理：向装有滤膜的具塞刻度试管中加入10ml 水，于超声波清洗器上超声洗脱5min。加入1ml 硝酸，用水定容至25.0ml。混匀，供测定。洗脱液浑浊时，先用针筒式过滤器过滤，滤液转移入另一具塞刻度试管中，再加水定容。若样品液中钡浓度超过测定范围，可用水稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。
3 标准曲线的绘制：取5只容量瓶，分别加入0.0、0.010、0.10、1.0和10.0ml 钡标准溶液，各加入4ml 硝酸，用水定容至100ml。配成0.0、0.010、0.10、1.0、10.0μg /ml 钡标准系列。参照仪器操作条件，将电感耦合等离子体发射光谱仪调节至最佳测定状态，测定各标准系列；每个浓度重复测定 3 次，以光谱强度均值对钡浓度（μg/ml）绘制标准曲线。
4 样品测定：用测定标准系列的操作条件测定样品和空白对照洗脱液。测得的样品光谱强度减去空白对照的光谱强度后，由标准曲线得洗脱液中钡的浓度(μg/ml)。
第二法 二溴对甲基偶氮甲磺分光光度法
原理
空气中可溶性钡化合物用微孔滤膜采集，水洗脱后，在酸性条件下，钡与二溴对甲基偶氮甲磺反应生成蓝色络合物，在630nm 波长下测量吸光度，进行定量。
仪器
1 微孔滤膜，孔径0.8μm。
2 采样夹，滤料直径40mm。
3 小型塑料采样夹，滤料直径25mm。
4 空气采样器，流量0～3L/min和0～10L/min。
5 具塞刻度试管，10ml。
6 分光光度计。
试剂
实验用水为去离子水，用酸为优级纯和高纯。
1 盐酸，ρ20＝1.18g/ml。
2 磷酸，ρ20＝1.83g/ml
1 磷酸溶液，3mol/L：205ml磷酸缓缓加入1000ml水中。
2 二溴对甲基偶氮甲磺溶液，0.5g/L。
3 盐酸溶液，6mol/L：100ml盐酸加到100ml水中。
4 标准溶液：称取0.1437g 碳酸钡（含量99.99％）于100ml 烧杯中，加入10ml 盐酸溶液，加热溶解后，煮沸除去CO2，冷却后，用水定量转移入100ml 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液为1.0mg/ml 标准贮备溶液。临用前，用水稀释成10.0μg/ml 钡标准溶液；或用国家认可的标准溶液配制。
样品的采集、运输和保存
现场采样按照GBZ159执行。
1 短时间采样：在采样点，将装好微孔滤膜的采样夹，以5L/min 流量采集15min 空气样品。
2 长时间采样：在采样点，将装好微孔滤膜的小型塑料采样夹，以1L/min 流量采集2～8h空气样品。
3 个体采样：将装好微孔滤膜的小型塑料采样夹佩戴在监测对象的前胸上部，进气口尽量接近呼吸带，以1L/min 流量采集2～8h 空气样品。 采样后，将滤膜的接尘面朝里对折，放入具塞刻度试管中运输和保存。样品可长期保存。
分析步骤
1 对照试验：将装好微孔滤膜的采样夹带至采样点，除不采集空气样品外，其余操作同样 品，作为样品的空白对照。
2 样品处理：向装有滤膜的具塞刻度试管中，加入10.0ml 水，在旋涡混合器上洗脱2min。取5.0ml 洗脱液于另一具塞刻度试管中，供测定。若洗脱液中钡浓度超过测定范围，可用水稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。
3 标准曲线的绘制：在6 只具塞刻度试管中，分别加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml标准溶液，各加水至5.0ml，配成0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mg 钡标准系列。向各标准管中加入1ml 磷酸溶液，2.0ml 二溴对甲基偶氮甲磺溶液，加水至10.0ml，摇匀。在630nm 波长下测量吸光度，每个浓度重复测定 3 次，以吸光度均值对钡含量（μg）绘制标准曲线。
4 样品测定：用测定标准系列的操作条件测定样品和空白对照洗脱液。测得的样品吸光度减去空白对照吸光度，由标准曲线得钡的含量(μg)。
G. 植物体细胞培养基操作
楼主好！！ 实验八 培养基的制备与灭菌 一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2. 掌握培养基的配置方法。3. 掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。三、实验材料1. 药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2．灭菌前玻璃器皿的包装（1） 培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）
图8-1 移液管的包扎移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制1) 称量：一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品，先按培养基配方计算出各成分的用量．然后进行准确称量。2) 溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻璃棒搅动，加热溶解。3) 定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。4) 调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。5) 过滤：用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。2．固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。（三）培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。1．试管的分装取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1／4左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／5(约3—4mI)，半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。2．三角瓶的分装图8-2培养基的分装 用于振荡培养微生物时，可在250 m1三角瓶中加入50 m1的液体培养基；若用于制作平板培养基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎 为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。1．试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2／3在试管内，1／3在试管外。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。
图8-3 棉塞的制作
图8-4 正确与不正确的棉塞1.金属塞 2正确 3、4不正确 2．三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。（五）培养基的灭菌培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。（六）斜面和平板的制作1．斜面的制作将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l／2为宜。如制作半团体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。2．平板的制作将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。（七）培养基的灭菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃温箱中培养1~2天，确定无菌后方可使用。（八）无菌水的制备在每个250mL的三角瓶内装100mL的蒸馏水并塞上棉塞或硅胶塞。在每支试管内装4.5mL蒸馏水，塞上棉塞或硅胶塞。再在棉塞上包上一张牛皮纸，高压蒸汽灭菌。0.1MPa灭菌20~30min。五、实验内容1. 根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行包扎。2. 根据要求配制各种培养基。3. 用电热鼓风干燥箱对玻璃器皿进行干热灭菌。4. 用高压蒸汽灭菌锅对所配各培养基灭菌。六、实验报告1. 简述移液管和培养皿的包扎注意事项。2. 简述配制培养基的基本步骤及注意事项。3. 为什么微生物实验室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用报纸包起来，经高压蒸汽灭菌后才能使用?4. 为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞（硅胶塞）才能使用？5. 配制培养基时为什么要调节pH？6. 高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？ 附录 灭菌技术一、目的要求了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。二、实验材料1. 仪器或其他用具：上述包扎的培养皿、试管、移液管等，电热鼓风干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，微孔滤膜过滤器，0.22μm滤膜，注射器，镊子，玻璃涂棒。2. 培养基：上述配制的培养基及生理盐水三、基本原理在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养基和工作场所进行灭菌和消毒。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的营养体、芽孢和孢子。实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的。四、操作步骤（一）干热灭菌法干热灭菌是在电热干燥箱内利用高温干燥空气（160℃~170℃）进行灭菌，它是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。此法适用于玻璃器皿如移液管、试管和培养皿的灭菌。培养基、橡胶制品、塑料制品不能采用干热灭菌。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160℃~170℃），时间长（1~2h）。但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。干热灭菌使用的是电热干燥箱（干燥箱）。具体操作步骤如下：1. 装入待灭菌物品：将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好箱门。堆积时要留有空隙，物品不要摆放得太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板、温度探头，以防包装纸烤焦起火。2. 升温：接通电源，打开开关，适当打开电热干燥箱顶部的排气孔，旋动恒温调节器，使温度逐步上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示电热干燥箱内停止加温，此时如果还未达到所需的160℃~170℃，则需要转动温度调节器使红灯亮，如此反复调节，直至达到所需的温度。3. 恒温：当温度升到160℃~170℃时，借助恒温调节器的自动控制，保持此温度2h。干热灭菌过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。4. 降温：切断电源，自然降温。5. 开箱取物：待电热干燥箱内温度降到60℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。同时，应将温度调节旋钮调到零点，并打开排气孔。电热干燥箱内温度未降到60℃以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。（二）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定的压力下保持15~30分钟进行灭菌。此法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅夹套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中排尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，获得高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在相同的温度下，湿热灭菌的效果好于干热灭菌。有三点原因：在湿热灭菌中菌体吸收水分，蛋白质容易凝固变性，蛋白质随着含水量的增加，所需凝固温度降低；湿热灭菌中蒸汽的穿透力比干燥空气大；蒸汽在被灭菌物体表面凝结，释放出大量的汽化潜热，能迅速提高灭菌物体表面的温度，从而增加灭菌效力。实验室常用的灭菌锅有非自控手提式高压蒸汽灭菌锅和自控式灭菌锅，其结构和工作原理是相同的。本实验介绍的是非自控手提式高压蒸汽灭菌锅，自控式灭菌锅的使用可参考厂家说明书。具体操作步骤如下：1. 加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。2. 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。3. 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力至所需的时间。如本实验中采用0.1Mpa，121.5℃，20分钟灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。8. 无菌检查：将已灭菌的培养基放入37℃恒温培养箱培养24h，检查无杂菌生长后，即可使用。 （三）过滤除菌有些物质，如抗生素、血清、维生素、糖溶液等采用加热灭菌法时，容易受热分解而被破坏，因而要采用过滤除菌法。过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法，该方法最大的优点是不破坏溶液中各种物质的化学成分。过滤除菌法除实验室用于溶液、试剂的除菌外，在微生物工作中使用的净化工作台也是根据过滤除菌的原理设计的，可根据不同的需要来选用不同的滤器和滤板材料。应用最广泛的过滤器种类有：1. 微孔滤膜过滤器：是一种新型过滤器，它由上下二个分别具有出口和入口连接装置的塑料盒组成，出口处可连接针头，入口处可连接针筒，使用时将滤膜装入两塑料盒之间，旋紧盒盖，当溶液从针筒注入滤器时，各种微生物被阻留在微孔滤膜上面，而液体和小分子物质通过滤膜，从而达到除菌的目的。其滤膜是由硝酸纤维素、醋酸纤维素等制成的薄膜，有孔径大小不同的多种规格（如0.1μm、0.22μm、0.3μm、0.45μm等），实验室中用于除菌的微孔滤膜孔径一般为0.22μm。根据待除菌溶液量的多少，可选用不同大小的滤器。该滤器的优点是吸附性小，即溶液中的物质损耗少，过滤速度快，每张滤膜只使用1次，不用清洗。2. 蔡氏（Seitz）过滤器：是一种金属制成的过滤漏斗，其过滤部分是一种用石棉纤维和其他填充物压制成的片状结构。溶液中的细菌通过石棉纤维的吸附和过滤而被去除，但对溶液中其他物质的吸附性也大，每张纤维板只能使用1次。3. 玻璃过滤器：是一种玻璃制成的过滤漏斗，其过滤部分是由细玻璃粉烧结成的板状构造。玻璃滤器的规格很多，5号（孔径2~5μm）和6号（孔径<2μm）适用于过滤细菌，其优点是吸附量少，但每次使用后要洗净再用。本实验采用微孔滤膜过滤器进行过滤除菌，具体操作步骤如下：1. 组装、灭菌：将0.22�0�8m孔径的滤膜装入清洗干净的塑料滤器中，旋紧压平，包装灭菌后待用（0.1Mpa，121.5℃，灭菌20分钟）。2. 连接：将灭菌滤器的入口在无菌条件下，以无菌操作方式连接于装有待滤溶液的注射器上，将针头与出口处连接并插入带橡皮塞的无菌试管中。3. 压滤：将注射器中的待滤溶液加压缓缓挤入过滤到无菌试管中，滤毕，将针头拔出。压滤时用力要适当，不可太猛太快，以免细菌被挤压通过滤膜。4. 无菌检查：无菌操作吸取除菌滤液0.1mL于肉汤蛋白胨平板上，均匀涂布，置37℃恒温培养箱培养24小时，检查是否有杂菌生长。5. 清洗：弃去塑料滤器上的微孔滤膜，将塑料滤器清洗干净，并换上一张新的微孔滤膜，组装包扎，再经灭菌后使用。整个过程应严格按照无菌操作，以防污染，过滤时应避免各连接处出现渗透现象。 来自网络，本人整理，没法上图！
H. 高效液相色谱法，进对照品之前，需要用0.45 μm针筒式过滤器过滤吗
对照品溶液可不用经微孔滤膜过滤，因为对照品溶液都是用标准对照品经色谱纯溶剂或流动相稀释进行配制的。因此对照品溶液中没有不溶性的杂质，可省去过滤，直接进样。