Ⅰ 外泌体是个什么“鬼”
外泌体
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。
所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
当外泌体在1980年首次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。有研究表明肿瘤来源的外泌体参与到肿瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肿瘤的生长与侵袭。
Ⅱ 离心分离外泌体是差速离心与密度梯度离心一起用吗
标准方法：Ficoll-泛影钠（Ficoll-Hypaque）密度梯度及红细胞裂解法1）取一50ml聚乙烯管，无菌采集专人外周静脉血属，加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心，室温。2）吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poorPlasma,PPP）。3）余下的沉降全血加入5ml6%Dextran(分子量500,000，用无菌生理盐水配制)，并用生理盐水（0.9%）调节最终体积至50ml，轻轻、彻底混匀。室温沉降30min。4）吸出富含白细胞的上层液，275gX6min。5）沉淀的细胞用8mlPPP-生理盐水（1：4）重悬，并移到15ml离心管中。6）悬液细胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室温。7）吸取富含中性粒细胞和红细胞层，用0.155MNH4Cl重悬细胞，使红细胞裂解，然后中性粒细胞用含0.25%BSAHanks平衡液（HBSA，无钙）洗2次，最终用HBSA（含钙）重悬。8）用此法可得95%以上的中性粒细胞。
Ⅲ 如何对exosomes进行成分分析
外泌体（Exosomes）是一种直径在40～100 nm的圆形单层膜结构，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。外泌体可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。2007 年，Valadi等发现细胞分泌的外泌体中含有生物学活性的mRNA、microRNA，使得研究人员对外泌体的研究热情激增。
传统的外泌体分离要涉及超速离心，操作繁琐、过程冗长，所得到的外泌体纯度较低。美国101Bio提供的系列外泌体分离试剂盒，可从细胞培养基或血清中富集大量完整的外泌体，试剂盒具有
ü 方便——无需超速离心；
ü 快捷——不到2个小时即可完成外切体分离纯化；
ü 高回收率——是超速离心的5~10倍；
ü 高纯度——所得外切体纯度高达95% 以上；
ü 仅需2ml的细胞培养基或200ul血清，即可获得足够的外切体用于下游研究。
PureExo®Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media
试剂盒组分
Solution A、Solution B、Solution C和PureExo® Columns
操作步骤
1. 无血清培养或血清饥饿48小时的细胞培养液于4℃ 600 g 离心10mins取上清；
2. 在玻璃管中按照比例加入细胞上清液及ABC混合液摇匀；
3. 于4℃孵育1h后出现分层；
4. 弃上层培养基，并将其余液体转移至EP管；
5. 1000g离心3mins，出现分层，弃上层培养基及下层无色澄清液体；
6. 上述步骤重复操作一次；
7. 室温干燥5~10mins后用1X PBS重悬；
8. 重悬液转移至纯化柱中，2000g离心5mins；
9. 收集流出液即为外切体。
Ⅳ 为什么运动可以促进外泌体的释放有类似Ca+的这种机制详细解答的文献吗
长期运动后产生的外泌体，确实能够保护受损的心肌细胞。
那么到底是外泌体中的哪种成分在起作用呢？研究人员对外泌体进行了NGS测序，发现游泳训练组和不运动组的小鼠外泌体miRNA有很大差别，游泳训练显著上调了一簇多个miRNA。他们将其分别在心肌细胞缺氧复氧模型中进行功能测试和筛选。
发现多个miRNA，尤其是一种叫miR-342-5p的miRNA能够明显抑制细胞凋亡，降低乳酸脱氢酶的释放，并提高细胞的存活率。检测学员志愿者的外泌体后，也发现赛艇训练组外泌体的miR-342-5p含量较对照组也有明显升高。
那么，这个miR-342-5p到底是怎么产生的呢？研究人员检测了运动前后多种组织miR-342-5p的表达水平，发现运动后血管组织miR-342-5p增加最明显。之前有研究发现，运动会增强血管与血流之间的剪切力，诱导血管内皮细胞产生细胞因子，对人体有益[8]。他们在体外培养条件下对动脉血管内皮细胞通过改变血流剪切力，发现血流加速所致的剪切力增加就能促进这些细胞上调miR-342-5p。
血流变化可以改变剪切力
那么miR-342-5p是通过什么方式保护心脏的呢？研究人员对miR-342-5p起作用的机制进行了深入研究，证实了外泌体miR-342-5p可被心肌细胞摄取；发现其能抑制Caspase 9 和 Jnk2蛋白的水平，并维持Akt蛋白的磷酸化[9,10]。这些作用最终会抑制细胞凋亡，促进心肌细胞生存，从而发挥降低心肌梗死的作用。
运动保护心脏的作用机制
这项研究揭示了长期运动保护心脏的一个新机制，首次发现了运动通过血管内皮细胞释放的循环外泌体miRNA在其中的作用，对缺血性心脏病的预防和治疗具有潜在的临床应用价值。
而对于大多数现在心脏还健康的人，不用奇点糕多说了吧？既然心很容易受伤，那就多爱护它，多运动，让它更强大吧~
有氧运动的第一作用，就是增强心肺功能。