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蛋白超滤管堵了怎么办

发布时间:2021-03-31 18:55:50

① 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办

1、选择合抄适的超滤管,主要考虑袭MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。

2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。

注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

② picc管堵住了怎么办

如果是在外面,体外导管妥善固定,断的那头千万不要滑进去,注意不要让空气进到导管里,封闭好去医院。如果堵住的已经进入体内,千万不要剧烈运动,上臂处扎紧,避免导管越滑越深进入心脏,马上就医。

1、冲管时最后05毫升要变推边退针。

2、用脉冲式冲管法,0.9%氯化钠注射液至少10ml注射器10ml脉冲式冲管,力度适中。

先制作PICC导管封管液:1.6ml肝素钠加入100ml生理盐水中,配成每毫升含有100单位肝素封管液。然后使用2—3ml肝素盐水脉冲式封管就可以了。


(2)蛋白超滤管堵了怎么办扩展阅读:

封管液的量及封管时间

生理盐水5—10毫升停止输液后每隔6-8小时冲管一次;肝素钠溶液3-5毫升,输完液后冲管,抗凝作用可持续12小时以上。不宜使用肝素钠的某些患者,两次输液时间较近的患者可选用生理盐水作为封管液。

方法得当,可延长置管时间,防止并发症的发生。通常采用正压封管,将封管液3~5ml从肝素帽处的输液针头内先缓慢推注2~3 ml,再边推余液边拔出输液针头,使封管液充满整个官腔(以拔出针头是针尖有液体溢出为佳)。

抗凝作用可持续12小时以上;不宜使用肝素钠的某些患者,两次输液时间较近的患者可选用生理盐水作为封管液。

③ 我的超滤被尿素结晶堵住了怎么清洗啊

应该是尿结石,要到医院去做彩超,确定一下你要结石的大小,如果大的话要证实,如果小的话,通过吃中药或者是运动就可以掉了

④ 超滤离心管离心蛋白时离心干了怎么办

不建议用离心管离蛋白。最好还是膜处理比较好。
蛋白会粘附在渣里,只有用缓冲液再润洗咯。

⑤ 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办

可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。

⑥ 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。

⑦ 超滤机出现严重堵塞,拆开发现膜内有一种透明的\粘性很强的物质.

自来水厂一般都会投加助凝剂PAM,虽然少量,但是也会被截留在超滤膜表面回上了,你的PP棉是1~答5um的吧,也会截留一部分哦~~时间长了积累多了就堵塞超滤膜 ~~像鼻涕一样的白色透明胶体~~~超滤膜系统要加强反洗(药洗),自动冲洗的周期设置得短一些,例如原来30分钟的反冲,设置为20分钟一次·····如有可能,超滤膜的运行模式采用外压膜,反冲洗时采用气水同时反冲,膜会干净很多,,PP棉就没办法了,只能更换~~~

⑧ 为什么电泳超滤管这么容易堵塞

电泳超滤管易堵塞主要原因是浓差极化造成的,从长期说,超滤管堵塞是必然的,专使用属时间的长短在于使用时设备的的维护保养。
要尽可能消除浓差极化造成超滤管的堵塞,关键是保证超滤管的入口流量与滤液流量的比值控制在19:1左右,具体在生产实际中这个参数是以压力来控制的,一般来说,超滤管的入口压力为0.3~0.4Mpa,入口/出口压差<0.25Mpa为宜,压差越小,浓差极化的影响越小,但滤液量也随之变小。
通常在生产中由于浓差极化等原因超滤管会逐渐堵塞造成滤液量减少,操作人员为了增加滤液量,调节入口/出口压力差在一定范围内是可以的,但压差不宜超过设定值,超过了由于浓差极化会加速超滤管堵塞,在这种情况下应对超滤管进行反洗保养。
在电泳涂装中,要减低超滤管堵塞的办法,其一,保证电泳液的成分参数的稳定;其二,在滤液量满足要求的前提下,采取低压差来减低超滤管堵塞;其三,定期反洗超滤管,或滤液量下降到一定值时及时反洗保养。

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