① 离子交换层析在蛋白质分离中的应用
离子交换层析在蛋白质分离纯化中有非常广泛的应用,在样品富集,回中度纯化和精制阶答段都可以采用。另外还可以利用离子交换层析去除DNA和内毒素。因此在生物制品工艺中应用非常广泛。关键是要选择合适的介质和分离条件。
你的问题范围太广,如果有具体的问题可以详细讨论。
② 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
1,离子交换树脂固定床的床层压力会随着分离过程的进程而不断加大,需要重回新填充答。同时,也造成固定床填充过程操作麻烦,而且密封性要求高。2,蛋白质分离纯度问题,如果在出峰之后再行切换接收馏分,而在峰行下降后提前切换,虽可以保证纯度,但蛋白分离收率则会下降。3,由于交换层析介质决定,不同蛋白质相互分离效果也不确定,这种分离,也易造成各蛋白峰重叠,造成分离纯度下降。4,自动化程度不高。主要也是受固定床以及树脂交换饱和当量无法保持长期稳定造成的。无法像液相色谱柱那样,可以在标样标定后,建立方法,自动分离目标蛋白。5,不过,规模化分离纯化蛋白质过程,使用这种层析法,还是具有一定优势的。
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详细资料请参考:
离子交换层析: http://proct.bio1000.com/100474/
③ 离子交换层析和亲和层析都可以用来分离所有的蛋白质吗
理论上来说离子交换层析可以用来分离所有的蛋白质,但亲和层析只能内分离能和其特异性结容合或者说带tag的蛋白质。
从实际应用来说,离子交换层析不可能能用来分离所有的蛋白质。这是因为其分辨率没有办法达到分离所有蛋白质。而且蛋白与蛋白之间可能存在其他的相互作用,造成某个盐浓度下被洗脱的蛋白可能会吸附其他蛋白一起被洗脱,达不到分离的效果
亲和层析就更不可能分离所有的蛋白质了,不管是哪种亲和层析都有对应可以特异性吸附的亲和标签蛋白。如果没有亲和标签,所有的蛋白都是不能吸附的
④ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
因为抄离子交换吸附蛋白质并不是特异性吸附,在某些情况下可能难以判断结合的蛋白质是否为当初设计的目的蛋白。
离子交换吸附依赖于蛋白质表面的静电荷,如果蛋白质结构比较特殊,可能会有在各种pH都难以结合上离子交换层析的情况。
离子交换层析对于等电点与目标蛋白接近的杂蛋白并没有很好的分离效果。
⑤ 怎么用离子交换层析分离等电点分别为4,6,7, 9 的蛋白质
6.洗脱:用含NaCL(0.2-0.6M)的0.02M
Tris-HCL
缓冲液
pH7.4(内含0.
等电聚焦电泳
(IEF)分离蛋白及测定
蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦
(IEF)
⑥ 求离子交换色谱法分离蛋白质试验步骤
离线pH梯度复-强阳离子交换色谱法制分离肽段混合物 这篇文献能否帮助您?
建议朋友有问题,可到分析测试网络网去提问,基本上问题都能得到解答,网络上搜下就有。
缓冲液和洗脱液最好一致。你自己查文献看看选吧。
⑦ 怎样利用离子交换柱层析法分离不同的蛋白质
离子交换柱层析法的核心在于不同的蛋白质的等电点不同
所以说,利用版离子交换柱层析法分离不同的权蛋白质其实就是利用不同蛋白质不同的等电点来分离。比如目的蛋白等电点是5,那么在环境pH为8.0的情况下,目的蛋白可以结合阴离子交换层析,而杂蛋白可能不能结合或者结合能力比目的蛋白弱。通过不同的盐浓度的洗脱让结合能力不同的蛋白在不同的组分被洗脱出来,最终完成对目的蛋白和杂蛋白的分离。
⑧ 为什么说离子交换色谱法是分离蛋白质的最佳方法
它是根据蛋白质的组成物质氨基酸的物理性质(基于氨基酸电荷行为)为分离基础的方法。相对透析和超过滤及凝胶过滤来说,可以针对多种蛋白质中的某一种(前提是知道蛋白质的氨基酸组成及其离子交换树脂的亲和度及洗脱强度)进行分离。(而透析和超过滤还有凝胶过滤方法更大的取决于相对分子质量及其结构 分离出的单一蛋白质纯度相对要低 并且凝胶过滤要求凝胶对要求组分不能有吸附作用 适用性较低 ) 相对盐溶和盐析来说,分离单一蛋白质的纯度要高,且更好的保留其天然理化性(盐溶要求蛋白质分子吸附某一盐离子从而改变其溶解性 但有些蛋白质吸附某些盐离子后其蛋白质构象及理化性会发生改变)。 相对有机溶剂分级分离法,更好的保留其天然理化性(有机溶剂分类法易造成蛋白质不可逆变形 且适用范围窄) 相对凝胶电泳和等电聚焦来说 更易于实现大量制备分离 且不改变蛋白质结构和功能(电泳会影响蛋白质结构 且操作繁琐 成本高) 相对亲和层析来说 它更加易于实现且成本低廉效果也不错(亲和层析需要制备其配体并与载体交联 因而制备难且成本较高)
PS: 最好的分离方法不是例子交换色谱法 而是高效液相色谱法 相对离子交换色谱来说有着更高的效率、更高的分辨率和过柱速度
⑨ 蛋白质、核酸等生物大分子为何能用离子交换色谱分离
因为他们来都带电荷啊,因为源你柱子上有相反的离子啊,他们可以通过离子键相互作用啊!
同时的柱子有孔径啊,可以将小的直接溜走,没有机会结合啊
可以让大的下来的更慢啊!
你满意不!