超滤管浓缩病毒如何选用范围

① 如何获得浓缩的细菌病毒

细菌可以以无性或者遗传重组两种方式繁殖,最主要的方式是以二分裂法这种无性繁殖的方式：一个细菌细胞细胞壁横向分裂,形成两个子代细胞.并且单个细胞也会通过如下几种方式发生遗传变异：突变（细胞自身的遗传密码发生随机改变）,转化（无修饰的DNA从一个细菌转移到溶液中另一个细菌中）,转染（病毒的或细菌的DNA,或者两者的DNA,通过噬菌体转移到另一个细菌中）,细菌接合（一个细菌的DNA通过两细菌间形成的特殊的蛋白质结构,接合菌毛,转移到另一个细菌）.细菌可以通过这些方式获得DNA,然后进行分裂,将重组的基因组传给后代.许多细菌都含有包含染色体外DNA的质粒.
处于有利环境中时,细菌可以形成肉眼可见的集合体,例如菌簇.
细菌以二分裂的方式繁殖,某些细菌处于不利的环境,或耗尽营养时,形成内生孢子,又称芽孢,是对不良环境有强抵抗力的休眠体,由于芽胞在细菌细胞内形成,故常称为内生孢子.
芽孢的生命力非常顽强,有些湖底沉积土中的芽抱杆菌经500-1000年后仍有活力,肉毒梭菌的芽孢在pH 7.0时能耐受100℃煮沸5-9.5小时.芽孢由内及外有以下几部分组成：
1．芽孢原生质（spore protoplast,核心core）：含浓缩的原生质.
2．内膜（inner membrane）：由原来繁殖型细菌的细胞膜形成,包围芽孢原生质.
3．芽孢壁（spore wall）：由繁殖型细菌的肽聚糖组成,包围内膜.发芽后成为细菌的细胞壁.
4．皮质（cortex）：是芽孢包膜中最厚的一层,由肽聚糖组成,但结构不同于细胞壁的肽聚糖,交联少,多糖支架中为胞壁酐而不是胞壁酸,四肽侧链由L-Ala组成.
5．外膜（outer membrane）：也是由细菌细胞膜形成的.
6．外壳（coat）：芽孢壳,质地坚韧致密,由类角蛋白组成(keratinlike protein),含有大量二硫键,具疏水性特征.
7．外壁（exosporium）：芽孢外衣,是芽孢的最外层,由脂蛋白及碳水化合物(糖类)组成,结构疏松.

② 超滤离心管怎么使用

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml
离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。

③ 如何用蛋白浓缩管

选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。

通常应回截留分子量答不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

(3)超滤管浓缩病毒如何选用范围扩展阅读：

超滤浓缩离心管，最新推出专利产品Hydrosart膜2K型，具有极低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。

备有四种材质的超滤膜：聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart，可根据不同要求灵活选用；两种回收浓缩液的方法：既可用吸管直接吸取并回收，又可将离心管放入离心机反甩，将浓缩液甩入回收帽中，加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收；

④ 如何使用超速离心机浓缩慢病毒

你好，慢病毒转染细胞的操作步骤如下：
1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。
2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。
3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。
4、继续培养24小时，用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。
5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白，一般转染48小时后可见明显荧光表达，72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率，可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选，可以在转染3-4天后开始加药。
二、慢病毒转染悬浮细胞实验方法
1、在2×10^5/ml悬浮细胞中加入polybrene至6 μg/ml和适量病毒，充分混匀。37℃孵育。或者150g室温离心4小时(选作，部分难转染的细胞系采用此步骤可以提高转染效率)。
2、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后(或离心结束后)加入等体积新鲜培养基以稀释polybrene。
3、继续培养3-4天。中间视细胞生长情况可传代或换液。

⑤ 超滤浓缩如何操作

超滤可采用全量过滤，既没有浓缩过程
也可以错流过滤，产水浓水，即浓缩悬浮固体后排出

⑥ 超滤原理的应用范围

超滤技术广泛用于水处理设备工艺中：
<1>. 反渗透的预处理，原水包括海水、地表版水、井水等。
<2>. 城市、乡镇权、农村供水处理。
<3>. 冷凝水回用，食品、饮料加工用水。
<4>. 制药用水除热源。
<5>. 处理地表水和井水用于饮用。
<6>. 深度处理废水进行回收利用。
<7>. 白酒的除浊，果酒、葡萄酒、黄酒的除菌、除浊。
<8>. 应用于食品、发酵、乳业中的浓缩处理。

⑦ 超滤浓缩蛋白溶液时其浓度该从高到低还是有低到高对超滤膜好呢

从低到高,当然首先3瓶中蛋白分子量应该差不多,否则先超滤小分子的,主要是减少超滤膜的堵塞程度

⑧ 超滤膜可以阻挡病毒吗

超滤膜是一种抄孔径规格一致，额定孔径范围为0.001-0.02微米（即1——20纳米）的微孔过滤膜。在膜的一侧施以适当压力，就能筛出小于孔径的溶质分子，以分离分子量大于500道尔顿、粒径大于2～20纳米的颗粒。
细菌的大小因种类而差别很大，球菌大小以直径表示；杆菌、螺菌用长度和宽度表示。螺菌的长度一般以菌体两端的距离计算，但按螺旋的直径和圈数计算才是螺菌的真正长度。测量细菌大小一般用显微镜测微尺，常用的单位是微米（micrometer，μm，1μm＝10-3mm）。最小的细菌只有0.2微米，最大的可长达80微米，但最常见的多数细菌为：球菌0.5～1微米，杆菌0.2～1.0×0.7～3微米，螺菌0.3～10×1.0～50微米。
病毒比细菌小得多。直径在20～40纳米之间。大的如痘病毒，大小为200×250-350纳米，与小的细菌相近；小的如口啼疫病毒，直径只有22纳米，所以，超滤膜能过滤掉水中的细菌和病毒

⑨ 如何选择合适的浓缩离心管

如何选择浓缩离心管：

1. 按体积

Pall提供了4个系列的浓缩离心管，适合处理不同体积的样本。你可以根据你的样本量来选择。不过，如果样本浓度低体积大，可以选择较小容积的浓缩离心管多次重复加样离心。