❶ 混悬液的无菌如何采用薄膜过滤法
你参考一下这篇文献看看：《复方磺胺嘧啶银混悬液无菌检查方法的建立及验回证》丁答长玲田洪根成培光赵永德周肖龙薄明香来源：《中国药房》2010年第45期。 原文找不到，只有摘要。 摘要：目的：建立复方磺胺嘧啶银混悬液无菌检查法并进行验证。方法：将样品经无菌定性滤纸初过滤后，取滤液适量，采用pH7．0氯化钠一蛋白胨缓冲液作为冲洗剂，冲洗量分别为300、600、900mL，以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉作为试验菌种，按照薄膜过滤法进行无菌检查，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌进行验证试验。结果：最佳冲洗量为细菌检查600mL、真菌检查300mL；验证试验中阳性对照菌24h内生长正常，各供试品管均未见菌生长，检验结果符合规定。结论：复方磺胺嘧啶银混悬液无菌检查时可以通过定性滤纸过滤和薄膜过滤联用的方法消除其抑菌活性。 感觉有用的话，可以求助找一下这篇文献。
❷ 微生物膜过滤法做大肠菌群用什么培养基
大肠菌群使用正常的菌群培养基就可以了，微生物膜过滤法就是验证在过滤过程中能回否完全过滤掉答细菌，通常检测标准要求进行过滤测试时，只要细菌挑战悬浮液分散性达到80%以上就可以了。对于培养菌群培养基并无要求，因为作为挑战测试悬浮液并非是直接用培养基（液）！
❸ 细菌滤膜如何使用
买那种0.22um的一次性小滤器，把样品倒入一次性针管中，在超净工作台中过滤。容器也要注意灭菌。
❹ 用滤膜法测细菌总数,该如何处理
基于滤膜上细菌直接计数法的细菌总数快速检测
【摘要】 细菌总数快速检测在质量监测中具有重要的意义，目前除了经典的平板培养法以外，还有微菌落法、阻抗法等快速检测方法，这些方法或者需要较长的检测时间，或者需要较高的检测成本。本研究提出一种不需要培养而在滤膜上直接计数的细菌总数的快速检测方法，它主要分为过滤、染色、显微镜计数和计算四个步骤。计算细菌总数时，根据细菌在滤膜上的分布特点，对传统公式进行改进，提出按区域计算细菌总数的计算方法，提高了检测精度。研究结果表明，该方法与传统的平板培养法无显著性差异（t=0.847，P=0.436＞0.05），是一种低成本、快速的细菌总数检测方法。
1 引 言
细菌总数计数的研究已有很多，目前国标规定的方法为平板计数法，该方法是将样品加入琼脂营养基，在37 ℃下培养24～48 h后计数。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法〔1〕、Simplate TM全平器计数法〔2〕、微菌落技术〔3-5〕、纸片法〔6-7〕等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。
本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显著性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。
2 材料与方法
2.1 材料
本研究中用的试验材料有集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司），染色剂，生物显微镜（宁波永新光学股份有限公司），聚碳酸脂膜（直径47 mm）。
2.2 实验方法
2.2.1 准备工作 卸下集菌仪的滤网（见图1），统计滤网上小孔总数，为计算菌液浓度做准备。另外，还需对集菌仪中的集菌器进行高压灭菌，以防止过滤过程中引入外源细菌。
2.2.2 细菌收集 取一定浓度的霉菌菌液300～500 ml，装在集菌仪上，集菌仪采用蠕动加压方式对菌液施加一定的压力，使菌液流过孔径为0.45 um的聚碳酸脂膜。采用过滤方法是因为它可以使细菌相对均匀地分布在滤膜上，而选用聚碳酸脂膜是因为这种膜具有良好的透光性，便于用显微镜观察。
2.2.3 染色 集菌后取下滤膜，切下一部分放在载玻片上，进行染色、固定。染色的目的是增大细菌与背景的对比度，便于观察。
2.2.4 显微镜计数与计算 菌液经集菌仪过滤后，细菌在滤膜上的分布见图2、图3，由图可以看出细菌分布具有以下两个特点：一是细菌集中在一个个的圆形区域内，这些圆形区域和挡板的小孔相对应；二是各个圆形区域之间细菌很少。根据膜上细菌分布的这种特点，提出以圆形区域为单位进行计数，统计出圆形区域内细菌的平均个数，从而计算出菌液中细菌总数。具体步骤如下：随机选择10个圆形区域，在油镜下，调节焦距以获得较清晰的图像（见图4），统计每个圆形区域内的细菌个数，然后按公式(1)计算出菌液的浓度。
X=A10×N/V(1)图2 膜上细菌的区域分布
Fig 2 The distributing region of bacteria on the filter(100倍)
图3 膜上细菌的区域间隔
Fig 3 The space among the distributing regions(100倍)
图4 膜上细菌染色后图像
Fig 4 Figure of bacteria after coloration(1 000倍)
式中：X表示待检菌液浓度（CFU/ml）
A表示10个圆形区域内细菌总数
N表示滤网上小孔总数
V表示集菌时所用待检菌液体积（ml）
3 结果与讨论
3.1 实验结果
按上述方法计算得到的结果与平板培养法得到的结果见表1。表1 两种方法得到的细菌总数
Table 1 Total bacteria number by two different methods
样本1样本2样本3样本4样本5样本6染色镜检
(cfu/ml）185168157165171166平板培养
(cfu/ml)176155165158183152
对表1中两组数据进行配对t检验，在α=0.05时，双尾检验结果如下：t=0.847，P=0.436＞0.05，说明两种方法得到的结果无显著性差异。
3.2 讨论
3.2.1 计算公式的改进 用集菌仪对样本菌液进行过滤时，由于滤网挡板的作用，使得细菌不是均匀地分布在整个滤膜上，而是集中分布在滤网的小孔处，所以，计算细菌总数时，不能采用公式X=A40×Φ1Φ22/V（其中Φ1，Φ2分别为滤膜直径和视野直径），该公式是微菌落方法检测细菌总数中的常用计算公式。在本实验中，根据细菌分布的特点，提出以圆形区域为单位计算细菌总数的思路，使计算结果更接近真实值，从而提高了检测精度。
3.2.2 细菌大小的影响 细菌大小对本实验的影响主要体现在镜检时，如果细菌太小，显微镜计数时不能将细菌从背景中分辨出来，我们的实验结果显示，不能分辨大肠杆菌和葡萄球菌，而较大的霉菌可以清晰地分辨。
3.2.3 检测时间进一步缩短 细菌总数的经典检测方法是平板培养法，得到的结果精度高，但是它所用时间长，为了缩短检测时间，出现了微菌落法，将检测时间缩短为4 h左右〔3-5〕。本研究不对细菌进行培养，而是在膜上染色后直接用显微镜计数，最大限度地缩短了检测时间，使整个检测时间在1 h左右。
4 结论
本研究用集菌仪将菌液过滤后，取滤膜一部分进行染色、制片，然后在油镜下统计细菌个数。根据细菌在滤膜上的分布特点，提出将圆形区域作为统计单位，得到圆形区域内细菌的平均个数，从而计算出菌液浓度。实验结果表明，按照该方法得到的结果与平板培养法的结果无显著性差异。与平板培养法和微菌落法相比，该方法不需要细菌培养，检测时间只需要1 h左右，明显缩短了检测时间，是一种快速、有效的细菌总数检测方法。
❺ 微生物限度检查 阴性长菌（薄膜过滤法）
第一，1.4Pa是笔误么？
一般培养基用0.1MPa（相当于15Ib/in2或1.05Kg/cm2）,在121.5℃，15-30min可达到彻底灭菌的目的。
第二，灭菌锅使用的问题，锅内冷空气是否完全排干净，绝对影响灭菌效果的。
第三，只能是无菌操作的问题了。
❻ 微生物的膜过滤法是如何对菌数进行计数的
例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。
❼ 微生物限度检查中用膜过滤法时，是把滤膜上有菌液的那面贴到培养基上，还把反面贴到培养基
微生物限度的方法有多种。如果是用膜过滤法的话，就你提到的问题，可以查询2010版的《中国药典》附录，里面有提到。应该是把滤膜接触到供试液的那面贴于培养基上。
❽ 什么叫薄膜过滤法，具体怎么操作呀
5.7.7 薄膜过滤法：
5.7.7.1 本法适用于有抗菌作用或大容量的供试品。
5.7.7.2 按集菌使内用规程安装好集菌仪。
5.7.7.3 取供试品擦拭消容毒后，除去塑料盖，插好导管，进行抽滤，滤液从排液管排出。
5.7.7.4 同法操作将培养基抽到全封闭式集菌培养器中。
5.7.7.5 取需气菌、厌气菌培养基和真菌培养基各1管，同法操作加入相应的溶剂作阴性对照。
5.7.7.6 阳性对照管应根据供试品特性在接种橱内加入相应对照菌液1ml。（抗细菌药物以金黄色葡萄球菌为对照菌，抗厌氧菌药物以生孢梭菌为对照菌，抗真菌药物以白色念珠菌为对照菌）。
5.7.7.7 需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中，真菌培养基管置20-25℃培养箱中各培养7日；阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。
❾ 生物细菌同步培养中的膜过滤系脱法的基本过程
仅供参考：一般生物膜过滤有两种方式：第一是主动运输，第二是无载体运输。细菌同步培养中的膜可以通过吸附来过滤：其中就是膜通过同性相斥，异性相吸的原理来过滤。
❿ 平板计数法和膜过滤法检测细菌有什么区别呢 哪个精确一些
膜过滤法更为精确一些。
膜过滤技术是成熟的技术，ISO标准、AOAC、美国的EPA等等。所有这些标准，最起码ISO标准是可以拿过来用的。采用滤膜法进行微生物检测是一种国际公认的微生物标准检验方法，其得到AOAC、美国、欧洲和日本等国家的药典、FDA和EPA等组织的承认，广泛应用于环境监测、食品及饮料工业、化妆品、制药工业品质控制和电子工业等领域。赛多利斯公司的滤膜法微生物检测产品成功地应用于滤膜法已有20多年的历史，实用而且方便实用，它简化了微生物检测程序。 所以，1.有菌落总数检测膜过滤法的标准。2.有可行性。
标准和技术是两码事，标准的制定主要是为了评价水平和保护安全。
2.关于平皿计数法检不出，而滤膜法却能检测出，可想到以下两点：1）平皿计数法，倾倒的培养基也要50度左右，而50度左右足矣使部分环境微生物不能生长了；2）在培养基内部的微生物比在表面的获得更少的氧，应该也是会影响部分微生物的生长。膜过滤法是水质样品的国际上公认的方法，有依据可查。主要起到一个富集的作用 毕竟水中的菌比较分散。
滤膜法微生物检测： 将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
滤膜法的优点：
-与直接法比较，可以检测大量的样品
- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高
- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档
- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果