㈠ 制備細胞膜的方法
活動目標
1．體驗用哺乳動物紅細胞制備細胞膜的基本方法。
2．使用高倍顯微鏡觀察制備細胞膜過程中細胞的變化。
背景資料
生物膜的研究發展迅速。要研究生物膜的組成、結構及功能，首先必須分離出純凈的細胞膜。分離得到的哺乳動物的紅細胞膜，一般稱為「血影」。哺乳動物成熟的紅細胞中沒有一般真核細胞所具有的細胞核和細胞器，容易用它制備純凈的細胞膜。此外，哺乳動物的血液也比較容易獲得，因而是研究細胞膜的理想材料。
從哺乳動物的紅細胞中分離細胞膜，第一步是將血液收集在加有抗凝劑的容器內，用低速離心的方法從血液中分離出紅細胞，然後用等滲緩沖液反復洗滌，經多次離心，去除血漿。第二步是在紅細胞中加入低滲緩沖液，由於低滲溶液的作用，大量水分進入細胞，使紅細胞脹破而溶血。第三步是將溶血的紅細胞反復而充分地高速離心、洗滌，去除血紅蛋白和其他的細胞內含物，最終獲得比較純凈的紅細胞膜。
操作指南
1．材料 新鮮的哺乳動物血液
2．用具 離心機，離心管，滴管，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸水紙，小燒杯。
3．試劑 檸檬酸鈉或肝素（抗凝劑），生理鹽水（質量分數為0．9%的NaCl溶液），蒸餾水或清水。
4．操作要點
教師在實驗前做以下准備工作。
准備一定量的新鮮的哺乳動物血液，如羊血或豬血，在冰箱中靜置一晝夜。用滴管將上清液吸去。再吸取1 mL的沉澱物，放入離心管中，加入生理鹽水2 mL，在2 000 r/min條件下離心5 min。去除上清液，在沉澱中再加入生理鹽水2 mL，再離心一次，去除上清液，留沉澱備用。以上操作的目的是洗去血漿成分，避免血漿對血細胞的緩沖作用，從而使紅細胞的溶血現象更加明顯。
學生的實驗操作如下。
（1）取一個5 mL的小燒杯，加入生理鹽水2～3 mL。
（2）用滴管在沉澱的下層吸取一小滴血細胞，滴入小燒杯的生理鹽水中，以達到稀釋紅細胞的目的，以免觀察時，由於細胞密度太大，影響觀察效果。
（3）取另一個滴管，在小燒杯中輕輕攪拌，然後吸取少量的血細胞稀釋液，在載玻片的中央滴很小的一滴，加蓋玻片。
（4）先在低倍鏡下觀察紅細胞的正常形態，可見其邊緣完整發亮。
（5）在蓋玻片的一側加一滴蒸餾水或清水，在另一側非常小心地用吸水紙慢慢地吸引，防止把紅細胞全部吸入吸水紙中而影響觀察。邊加水邊觀察，注意紅細胞的形態變化。紅細胞會隨著水流向一側漂移，觀察時注意移動玻片。紅細胞體積逐漸變大，變得非常鼓脹，在視野中可以找到少數脹破的紅細胞，它們已失去完整發亮的邊緣，變成彌散狀。
5．需要注意的幾個問題
（1）製作臨時裝片時，紅細胞必須稀釋，而且取紅細胞的量要少。
（2）在高倍鏡下觀察，待觀察清晰時，在蓋玻片的一側滴加蒸餾水，同時在另一側用吸水紙吸引。上述操作均在載物台上進行，並隨時調整鏡筒高度，持續觀察細胞的變化。在蓋玻片一側滴加蒸餾水的量要少，不能讓蓋玻片處於漂浮狀態；同時在另一側用吸水紙吸引時要小心，不要將血細胞吸走。
（3）要想取得好的觀察效果，所用顯微鏡的放大倍數應在400倍以上。
（4）操作中要認真觀察才能看到連續的變化過程。
1．分析實驗原理