⑴ 離子交換層析是DNA濃縮的方法嗎
離子交換層析常用來分離濃縮蛋白質。是利用離子交換劑作為基質,使蛋白質依據其所帶電荷不同被分離的一種柱層析技術
⑵ 陰離子交換樹脂吸附交換質粒DNA的原理是什麼
DNA在溶液狀態下會電離出H離子,本身帶負電荷~~
⑶ 生物學研究中常用的凝膠電泳有哪些
(1)瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠電泳
瓊脂糖是一種線性多糖聚合物,是從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的。當瓊脂糖溶液加熱到沸點後冷卻凝固便會形成良好的電泳介質,其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經過化學修飾的低熔點(LMP)的瓊脂糖,在結構上比較脆弱,因此在較低的溫度下便會熔化,可用於DNA片段的制備電泳。
聚丙烯醯胺凝膠主要有兩種方式:一是用於分離和純化雙鏈DNA片段的非變性聚丙烯醯胺凝膠。在未變凝膠中分離DNA的缺點是DNA的遷移率受鹼基組成和序列的影響。由於無法得知未知DNA的遷移是否反常,故不能用未變性的聚丙烯醯胺凝膠電泳確定雙鏈DNA的大小。二是用於分離及純化單鏈DNA片段的變性聚丙烯醯胺凝膠。這類聚丙烯醯胺凝膠是在核苷酸鹼基配對抑制劑(尿素或甲醯胺)的存在下聚合而成,變性DNA的移動速度同其鹼基組成及序列幾乎完全無關,故可用於分離及純化單鏈DNA片段和DNA測序等。
(2)脈沖電場凝膠電泳
普通的凝膠電泳技術顯然是無法分離如此超大分子量的DNA分子的。1984年,D.C.Schwartz和C.R.Cantor發明的脈沖電場凝膠電泳技術,可以成功地用來分離整條染色體這樣的超大分子量的DNA分子。在常規的瓊脂糖凝膠電泳中,超過一定大小范圍的所有的雙鏈DNA分子,都是按相同的速率遷移的。這是因為它們在單向恆定電場的作用下,僅以「一端向前」的方式游動穿過整個膠板。而在脈沖電場中,DNA分子的遷移方向是隨著所用的電場方向的周期性變化而不斷改變的。
在標準的PFGE中,頭一個脈沖的電場方向與核酸移動方向成45°夾角,而下一個脈沖的電場方向與核酸移動方向在另一側亦成45°夾角。由於加壓在瓊脂糖凝膠上的電場方向、電流大小及作用時間都在交替地變換著,這就使得DNA分子能夠隨時地調整其游動方向,以適應凝膠孔隙的無規則變化。與分子量較小的DNA分子相比,分子量較大的DNA分子需要更多的次數來更換其構型和方位,以使其可以按新的方向游動。因此,在瓊脂糖介質中的遷移速率也就顯得更慢一些,從而達到分離超大分子量DNA分子的目的。應用脈沖電場凝膠電泳技術,可成功地分離到分子量高達107bp的DNA大分子。