尾靜脈回輸用什麼重懸細胞

1. rnai小鼠體內實驗時，尾靜脈注射siRNA後，怎樣觀察肝細胞和脾細胞攝取siRNA的比例

siRNA用熒游標記。注射後在規定時間去肝和脾，用流式細胞儀計數陽性細胞

2. DI-CIK細胞

目的 惡性腫瘤的發生率與致死率依然呈上升趨勢,作為一種有可能治癒腫瘤的新型方法,過繼免疫治療得到廣泛關注,其中細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-inced killer cells, CIK)免疫治療已被廣泛應用。目前,臨床上主要應用的是外周血來源的CIK細胞,但外周血CIK細胞免疫治療存在一定的缺陷性,如增殖速率低、體內存活時間短,抗凋亡能力差。本研究主要比較了臍血與腫瘤患者外周血來源CIK細胞的增殖、免疫表型、免疫原性、激活型和抑制型表面標志物、耐葯基因ABCG2的表達及化療葯物處理後的抗凋亡能力;並建立食管癌的移植瘤模型,比較兩種CIK細胞在體內殺傷腫瘤細胞的能力。 方法 使用Ficoll-Plaque淋巴分離液分離臍血單個核細胞(cord blood mononuclear cell, CBMC)及腫瘤患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),重懸於RPMI1640培養基(含10%胎牛血清),加入細胞因子IFN-γ (interferon-γ),抗CD3單抗和IL-2(interlukin-2)誘導培養CIK。使用流式細胞術檢測臍血與外周血CIK的增殖、免疫表型、免疫原性、激活型表面標志物(CD28、CD27)和抑制型表面標志物(PD-1)的表達;採用Annexin V/PI雙染法檢測順鉑處理後CIK細胞的凋亡情況;使用qRT-PCR檢測耐葯基因ABCG2的表達;使用酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測IFN-γ、IL-2、TNF-α (tumor necrosis factor-α)的分泌;使用流式細胞術檢測CIK細胞CD107a的表達;另外,購買5周齡的Balb/c裸鼠,隨機分為3組,每組5隻。裸鼠.皮下接種1×107個KYSE70細胞,成瘤後,通過尾靜脈分別輸注磷酸鹽緩沖液(Phosphatate buffered salin, PBS)、臍血CIK細胞、外周血CIK細胞一次,然後觀察皮下腫瘤體積變化。 結果 臍血CIK培養第10d時增殖指數(proliferation index, PI)顯著高於外周血CIK [(251.52±16.76) vs (158.00±43.19), P<0.05]。臍血CIK經誘導培養13d後HLAⅠ、HLAⅡ的表達顯著低於外周血CIK[(18.86±±9.76)%vs(65.63±10.02),(14.53±3.34)%vs(67.20±±4.50)%,P<0.01],其中CD8HLAⅡ、CD4HLAⅡ和CD8HLAⅠ的表達較外周血CIK低[(5.86±0.53)%vs(51.20±4.85)%,(2.32±±0.34)%vs(12.42±±3.65)%,(17.56±±1.85)%vs(52.10±±5.72)%,P<0.05], CD4HLAⅠ的表達無差異(P>0.05)。臍血CIK中CD3+CD56+細胞比例較外周血CIK高[(21.20±±4.82)%vs(10.06±±3.46)%,P<0.05];臍血CIK中激活型CD4+CD28+、CD4+CD27+和CD8+CD27+T細胞比例較外周血CIK中高[(32.40±±16.81)%vs(18.65±±9.23)%,(27.48±±13.53)%vs(0.98±±0.55)%,(41.76±13.98)%vs(2.58±±2.10)%,P<0.05或P<0.01];而抑制型CD8+PD-1+T細胞的含量明顯較低[(3.25±2.13)%vs(8.05±±9.23)%,P<0.01],兩者中CD8+CD28+、CD4+PD-1+T細胞的含量無顯著差異(P>0.05)。此外,臍血CIK高表達耐葯基因ABCG2。順鉑處理13d後的臍血CIK細胞凋亡率顯著低於外周血CIK細胞[(10.10±4.20)%vs (27.12±12.18)%, P<0.05]。 ELISA檢測顯示臍血CIK分泌的IFN-γ、IL-2較外周血CIK高(P<0.01),TNF-α的分泌無顯著差異[(4.70±0.44)pg/ml vs (4.82±0.51)pg/mL, P>0.05]。臍血CIK上CD107a的表達顯著高於外周血CIK細胞[(9.16±±1.58)%vs(2.36±±0.86)%,P<0.01]。裸鼠體內試驗表明,臍血CIK殺腫瘤的能力顯著高於外周血CIK。 結論 與外周血CIK相比,臍血CIK增殖能力強、活化水平高、抗凋亡能力強、細胞因子分泌水平高,並且對腫瘤的殺傷功能強、治療效果好,具有較佳的臨床應用潛能。

3. 【求助】全血里破脆紅細胞後白細胞的重懸能用PBS嗎急!

急! 我現在做全血里提取DNA用做基因CA的測序用,用的試劑盒是Promage的產品,我按照說明書操作,在用細胞裂解液破脆紅細胞後,說明書上寫離心後盡量吸掉上清,但又說殘留液體10-15微升,我想我把上清完全吸掉後,怎麼讓白細胞重懸呢?謝謝各位高手!!你可以直接用細胞裂解液來裂解白細胞的，上面裂解紅細胞的細胞裂解液應該稱為紅細胞裂解液吧（可以看一下分子克隆上關於全血dna的提取 page484），把上清都去掉好了，這對dna的提取沒有什麼影響，，沒有影響的，我都是先用紅細胞裂解液來裂解紅細胞，再用PBS（7.4）重懸。

4. 細胞傳代比例不太明白，例如1：3傳細胞，要加多少培養液重懸，然後分成幾瓶呢謝了，盡可能詳細易懂點！

比如你是1：3傳代，原先細胞瓶內的培養基時10ml，要加30ml新鮮培養基重懸，再把這30ml重懸液平均分到3個細胞培養瓶內培養。

5. 可以直接用0.1%bsa重懸細胞因子嗎

細胞因子購買到的產品形式一般為凍乾粉，請參考說明書了解其原來的制劑形式。並用廠家推薦的方式進行復溶，而後用廠家的制劑形式（例如PBS）進行0.2%（或者更高濃度）和0.1%的制備；最終保證分裝前細胞因子溶液中的BSA含量為0.1%。分裝操作請務

6. 除了改良苯酚品紅染色,還有哪些染色方法可以檢測植物細胞程序性死亡,其原理是

用台盼藍染色，死細胞會被染成藍色，而活細胞不著色，從而判斷細胞死活

死細胞的鑒別一般通過DNA結合染料排除，利用死細胞膜通透性增大、不破膜的情況下DNA染料即可進入的特點區分出死細胞，但所用染料濃度、時間遠遠低於細胞周期所用的濃度，並且不需要固定。

常用的核酸結合死活鑒別染料包括：

碘化丙啶（propidium iodide，PI）

4'，6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽（4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride，DAPI）

7-氨基 - 放線菌素D（7-amino-actinomycin D ，7-AAD）

DRAQ7

SYTOX

不過對於一些胞內抗原（細胞因子、轉錄因子），由於需要固定、破膜，所以上述染料中，除了一些胺類染料（如Live/Dead、Ghost等）和新型蒽醌類染料CyTRAK Orange外，其它染料不再適合此類標本的細胞死活鑒別。

這里，只向大家講解一下用PI、7-AAD、DAPI的染色方法，其它商品化死活染料請按照說明書操作：

1. 用0.5ml 1×PBS重懸細胞。

2. 加入PI或DAPI或7-AAD，終濃度分別為PI（5 µg/ml）、DAPI（500-1000 ng/ml）、7-AAD（2.5 µM）

3. 加入上述染料後，盡快上機，一般不要超過5分鍾（有些廠家說明書寫著10分鍾，可能與濃度有關，可按照說明書操作）。

PI檢測通道：使用488 nm激發，用610/20 BP收集

DAPI檢測通道：最好用355nm激發，用440/40BP收集；也可以用405nm激發，450/50BP收集

7-AAD檢測通道：用488nm激發，用670/14BP收集

下圖是用PI檢測細胞死活的結果圖：

1、細胞死亡：細胞死亡作為生物體的一種常見現象，在動物細胞中有三種方式：凋亡（apoptosis），自噬（autophagy）和壞死（necrosis）。前兩種類型屬於細胞程序性死亡（programmedcelldeath，PCD）。細胞壞死是細胞在遭受極度刺激時引起的細胞死亡，以細胞質膜的破裂為特徵，造成內含物的炎性泄露，是一種非正常死亡。細胞的PCD是細胞的一種「主動性」死亡行為，從形態上和功能上都與細胞壞死有很大的不同。

2、植物中細胞程序性死亡（PCD）：目前可依據液泡膜破裂後，是否在細胞質中發生快速降解將PCD分為兩個大類。第一類為自溶性（autolytic）PCD，與液泡中的水解酶的釋放有關，在液泡破裂後，導致細胞質的快速清除。第二種為非自溶PCD，（non-autolytic），即液泡膜破裂但是沒有出現快速的細胞質的清除。目前鑒定細胞的PCD類型，還是以細胞形態學為主。

3、動植物細胞凋亡標准：動物：凋亡：凋亡小體，或者在細胞表面的水泡，感染病原體後在其他細胞中的降解。自噬：自噬小體，自溶酶體，和小的促進細胞溶解的液泡數目的增加壞死：沒有上面的定義的標准。植物：自溶：植物膜破裂之後對細胞質的快速清理。非自溶：沒有對細胞質的快速清理。其他：染色質濃縮細胞核破裂自我標記信號自食信號細胞膨脹，細胞器膨脹，質膜破裂染色質濃縮。液泡體積增加（細胞質體積減小）需要Ca2+的內流，細胞質皺縮，細胞器膨脹，小泡增多但體積不增加。

7. 細胞超聲破碎前，需用PBS裂解液重懸，反復凍融，請問這里的PBS配方是什麼(pH=7.4應該)

PBS是磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline）一般作為溶劑，起溶解保護試劑的作用。它是生物化學研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由於Na2HPO4和KH2PO4它們有二級解離，緩沖的pH值范圍很廣；而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。

PBS1L配方pH7.4：
磷酸二氫鉀(KH2PO4)：0.27g，
磷酸氫二鈉(Na2HPO4)：1.42g，
氯化鈉(NaCl)：8g，
氯化鉀(KCl)0.2g，
加去離子水約800mL充分攪拌溶解，然後加入濃鹽酸調pH至7.4，最後定容到1L

8. 流式細胞儀 分選上樣時可否用培養基重懸細胞

問題不大，不過還要先用一小部分先測試一下。常規的培養基有時候以為蛋白質濃度過高，會影響到分選液滴的穩定性。如果影響很大，建議換到PBS

9. 肝細胞培養為什麼要用DMEM培養基重懸，量是多少啊一般用多少ml的培養瓶培養

我養的是HL7702細胞~用的是20*20ml。以細胞傳代為例（1:2傳代）：先去掉上清(除去死細胞)，pbs2ml洗一下~去除後加1ml胰酶消化細胞（1.5分鍾左右）~加1mlDMEM終止消化~離心去除上清~加2mlDMEM吹打重懸~每個培養皿中各加1ml重懸液~再各加入3mlDMEM培養細胞~細胞重懸一般是為了繼續試驗或傳代~查文獻的話可以知道什麼細胞該用哪種培養液~

10. 細胞培養離心收集細胞時為了讓細胞能完全重懸,應如何操作

加入差不多兩倍體積的培養液或鹽水輕輕吹打混勻即可！