半透膜逆向流水透析法

『壹』 透析的原理和目的是什麼

生物電透析（Bioelectricity Dialysis），通俗的說法也稱之為人體細胞電荷，是把人體細胞內電荷凈化技術。其利內用生物容電共振原理，通過輸出、對流體內各種有害以及多餘的代謝廢物和過多的電解質移出體外，達到矯正細胞電荷的目的。

『貳』 血液透析的治療原理和作用，都有哪些

血液透析是基於半透膜的原理。血液和患者透析液同時進入透析室，在透析室兩側反向流動。利用半透膜兩側的溶解度梯度、滲透梯度和水壓梯度，通過分散、對流和吸附去除毒素；

在血液透析之前，我們必須遵循醫學委員會的規定，為血液透析准備專門的血管通路。血液透析的血管通路有三種常見形式：自體動靜脈瘺，人工動靜脈瘺和深靜脈置管。前兩種方法每次手術都將動脈和靜脈本身結合形成血管通路。血液透析被稱為腎和人工腎灌洗。它利用半透膜原理，通過擴散和對流，將體內各種有害物質、過量代謝殘留物和過量電解質排出體外，達到凈化血液的目的，達到糾正電解質水和酸鹼平衡的目的。200萬ESDP患者。初步估計我國每年需要腎透析的患者約200萬，腎臟替代治療是急慢性腎功能不全血液透析患者最有效的治療方法之一，血液透析患者應每周治療2次，每次4-4.5小時。

『叄』 如何提取細胞膜（動物細胞）上的蛋白質

NRC Institute for Biological Sciences
Triton X-114 extraction protocol (Hydrophobic protein preparation)

Ressuspend cells in Solution A (dil 1/8) and add 15 μl of mammalian cocktail proteases inhibitor (Sigma).
Add 1 third of the volume of solution B
Incubate on ice for 1 hour with frequent vortexing.
Centrifuge at 10 000g for 10 minutes at 4°C to pellet unbroken cells and nuclei.
Transfer supernatant in clean eppendorfs then incubate at 30°C for 3 minutes (until sln is cloudy).
Centrifuge at 1 300g for 10 minutes at room temperature.
Transfer Aqueous phase in new eppendorf (but keep detergent phase at room temperature).
Add X volume of triton X-114 to Aqueous phase:

Vol of Aq phase = X vol of triton X-114
24.6
Shake well then incubate 3 minutes at 30°C (until cloudy) then transfer on top of detergent phase slowly.
Centrifuge at 1 300g for 10 minutes at room temperature.
Remove Aqueous phase with pipette down to detergent interphase.
Precipitate hydrophobic protein (detergent phase) with 10X volume of acetone. Place overnight at -20°C.
Pellet proteins by centrifugation at max speed for 10 minutes at 4°C. Ressuspend proteins in IEF sln (7M urea, 2M thiourea, 4% CHAPS, 1% DTT) then precipitate protein again with 10 volume of acetone. Place 5-10 min at -20°C.
Pellet proteins by centrifugation at max speed for 10 minutes at 4°C. Air dry pellet then dissolve protein in IEF solution
Solution:

Solution A: 80 mM Tris-HCl, pH 7.4 ; 1,2M NaCl

0,63 g Tris-HCl
3,51 g NaCl
Dissolve in 30 ml of water
Adjust pH to 7.4
Adjust volume to 50 ml with water
Solution B: 40 mM Tris-HCl, pH 7.4 ; 600 mM NaCl ; 4% triton X-114

5 ml of sln A
Add triton to have a final concentration off 4%

4% x 10 ml = ml
[triton X114]
Adjust volume to 10 ml with water

『肆』 請問使蛋白質沉澱的方法有幾種

蛋白質沉澱實質上是蛋白質的分離，提取蛋白質的方法。一般來說若蛋白質存在於各種生物流體如血漿、牛乳、雞蛋白及尿的溶液中時，不要經過提取。若在組織和細胞里的蛋白質必須經過提取成為蛋白質溶液，再用（1）透析法：有半透膜透析、電透析、超濾析三種。（你是問方法有幾種？所以不講詳細過程，下同）上面是蛋白質與非蛋白質的分離。（2）分離後要除去蛋白質水溶液中的溶劑，可用有機溶劑的親水作用，在低溫（負10度或接近溶劑凝固點的溫度）將蛋白質水溶液傾入大量酒精或丙酮中，蛋白質就沉澱下來。（3）也可以用凍干法除去蛋白質溶液中的溶劑（通常是水）即將蛋白質溶液迅速凍成薄層，在高度真空中用升華法將溶劑除去。（4）分段分離將乾燥後的多種蛋白質混合物採用分階段分離。用鹽析法進行也可用有機溶劑為沉澱劑分離（5）最後用標准試驗法：如超離心法、電泳法及相律法等檢驗蛋白質是否純凈。

『伍』 血液透析原理

透析（dialysis）是通過小分子經過半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離技術。 透析療法是使體液內的成分（溶質或水分）通過半透膜排出體外的治療方法。

『陸』 人工腎半透膜是什麼

問題一：人工腎的人工腎的工作原理 現在臨床上使用的人工腎是一種透析治療設備。透析療法包括血液透析、血液濾過、血液灌流和腹膜透析，是分別應用血液透析機、血濾機、血液灌流器和腹膜透析管對病人進行治療的技術。血液透析俗稱「人工腎」，即將血液與透析液分置於一人工合成的半透膜兩側，利用各自不同的濃度和滲透壓互相進行擴散和滲透的治療方法。血液透析可將患者體內多餘水及代謝廢物排出體外，並從透析液中吸收機體缺乏的電解質及鹼基，以達到糾正水電解質及酸鹼平衡的目的。

問題二：透析是什麼意思 是得了尿毒症患者就是腎不好了，除移植外，需要透析把身上毒素清理。

問題三：透析是什麼 有什麼作用 轉載自網路！
透析（dialysis）：通過小分子經過半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術。
透析 dialysis
使體液內的成分（溶質或水分）通過半透膜排出體外的治療方法。常用於急性或慢性腎功能衰竭、葯物或其他毒物在體內蓄積的情況。常用的透析法有血液透析及腹膜透析 。
血液透析療法 將患者的血液和透析液同時引進透析器（兩者的流動方向相反），利用透析器（人工腎）的半透膜，將血中蓄積的過多毒素和過多的水分清出體外，並補充鹼基以糾正酸中毒，調整電解質紊亂，替代腎臟的排泄功能。
血液透析器俗稱人工腎，有空心纖維型、盤管型及平板型3種 。最常用的是空心纖維型 ，由1～1.5萬根空心纖維組成，空心纖維的壁即透析膜，具半透膜性質。血液透析時血液流入每根空心纖維內，而透析液在每根空心纖維外流過 ，血液的流動方向與透析液流動方向相反，通過半透膜原理清除毒物，通過超濾及滲透清除水分。
血液透析的適應症包括：①急性腎功能衰竭。②急性葯物或毒物中毒。③慢性腎功能衰竭。④腎移植前的腎功能衰竭或移植後排異反應使移植腎無功能者。⑤其他疾病（肝功能衰竭、精神分裂症、牛皮癬等）。
血液透析的相對禁忌症包括：①病情極危重、低血壓 、休克者。②嚴重感染敗血症者。③嚴重心肌功能不全或冠心病者。④大手術後3日內者。⑤嚴重出血傾向 、腦出血及嚴重貧血者。⑥精神病不合作者。⑦惡性腫瘤患者。
一般患者需每周血液透析3次，每次4～5小時 。應盡早開始透析以利糾正由於毒素蓄積過多導致的不可逆性臟器損傷及機體的代謝紊亂，當肌酐清除率下降為10～12mL／min時即應開始透析。15～60歲患者透析效果好且安全，但由於透析技術的不斷改進和新透析設備的不斷出現，70歲以上的患者亦可獲得好療效。
為保證透析患者的生存質量 ，提高康復率 ，血透患者應保證每日攝入蛋白質 1.0～1.2克／千克及146.3千焦／千克，同時應攝入足夠的水溶性維生素及微量元素以補充透析丟失量。透析患者的5年存活率各國報道不一，約為50％～80％，10年存活率超過50％者亦有報道。
腹膜透析療法 腹膜透析是利用腹膜作半透膜 ，通過腹透管向腹腔注入腹透液，通過彌散原理清除毒素，糾正電解質及酸鹼平衡紊亂，通過滲透原理（向腹透液內加葡萄糖以提高腹透液的滲透壓）以達到超濾脫水，替代腎臟的排泄功能。
腹膜透析的設備較血液透析簡單，可在床邊操作，又可避免體液平衡的突然變化。
腹膜透析分為持續性非卧床式腹膜透析（CAPD，患者可隨身攜帶設備自由活動）、持續性循環式腹膜透析（CCPD ，優點同CAPD，夜間依靠腹壁透析機進行透析，白天仍可工作）及間歇性腹膜透析（用於急性患者）。一般每日應進行4～6次腹透，每次灌入2000mL腹透液。腹膜透析無需依賴機器 ，操作簡便，無需特殊培訓人員，故價格低廉，在基層醫療單位均可開展。雖然腹膜透析和血液透析的適應症相同，但各有利弊，不能互相取代，故應根據患者的原發病因、病情及醫療、經濟條件作適當選擇，使患者得到最大效益。下述情況應優先考慮腹膜透析：①高齡、心血管系統功能差者。②建立血液透析血管通路困難者。③出血傾向嚴重不能作血液透析全身肝素化者。④糖尿病腎病尿毒症者，將胰島素加入腹腔，可使血糖控制較好。下述情況為腹膜透析的禁忌症 ：①腹部大手術後3日內 。②腹膜有粘連或有腸梗阻者 。③腹壁有感染無法殖入腹透管者。④腹腔腫瘤、腸瘺、膈疝等 。
無菌操作不嚴格可引起腹膜炎，反復發作腹膜炎可使腹壁駭耿糞際荼宦......>>

問題四：腎功能衰竭會危及生命．人工腎是根據腎臟的工作原理製成的一種機器，可以代替患者已喪失功能的腎．圖甲為 （1）圖乙2人①是腎小球，②是腎小囊，③腎小管，④是腎靜脈．腎單位由腎小體和腎小管組成，腎小體由腎小球和腎小囊組成．（了）半透膜能夠將血液2人尿素尿酸等擴散到透析液2，其作用相當於腎小球和腎小囊內壁人濾過作用．尿人形成過程有腎小球人濾過和腎小管人重吸收作用，人工腎沒有重吸收過程；（3）肝細胞產生人尿素通過擴散作用擴散到肝周圍人毛細血管，從而進入血液，經肝靜脈、下腔靜脈到達右心房、右心室，再經肺動脈，肺部毛細血管，肺靜脈到達左心房、左心室，經主動脈、腎動脈、進球小動脈、腎小球、腎小管、腎盂、輸尿管、膀胱和尿道排出體外．故答案為：（1）腎小球；腎小囊；腎小管；（了）腎小球；重吸收（3）右心房；肺靜脈．

問題五：滲析和透析有什麼區別 滲析與滲透的區別滲析：分子、離子通過半透膜， 而膠體粒子不能通過半透膜的過程。 透析原理同膠體的滲析類似。透析時，病人的血液通過浸在透析液中的透析膜進行。

問題六：把人的血抽出來過濾後又抽還回去的儀器設備叫什麼 腎析儀，給腎衰竭患者進行血液透析的儀器，願樓主只是好奇而問，您與您的親友與之並沒有任何接觸。 滿意請採納，謝謝。

『柒』 透析的原理是什麼

通過小分來子經過半透自膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術。

分類：用於醫學上的透析大致分為三大類：血液透析、腹膜透析、結腸透析。

適用范圍：使體液內的成分（溶質或水分）通過半透膜排出體外的治療方法。常用於急性或慢性腎功能衰竭、葯物或其他毒物在體內蓄積的情況。常用的透析法有血液透析及腹膜透析。

(7)半透膜逆向流水透析法擴展閱讀

需要接受透析治療的情況：

透析療法是利用半滲透膜來去除血液中的代謝廢物和多餘水分並維持酸鹼平衡的一種治療方法。

一般來說，患者血肌酐濃度超過700，或者腎小球濾過率在15ml/min/1.73m2以下時，如果出現了水負荷過重（比如有水腫或腹脹的症狀）、嚴重的營養不良、葯物難以糾正的高鉀血症、高磷血症等，就需要做好隨時做透析的准備。

血透和腹透的區別：

血透更容易達到充分性，但對心血管要求條件高，透析時間相對固定，必須按時到醫院進行透析。

腹透禁忌證較少，不受時間限制，可以在家進行操作治療，但容易因衛生條件不佳或者操作不當誘發腹膜炎。

『捌』 求免疫組化冰凍切片熒光染色具體流程

wifgw
石蠟切片免疫組化染色步驟

石蠟切片免疫組化染色步驟
1、載玻片的處理： 抗原修復過程中，由於高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響，極易造成脫片。為保證試驗的正常進行，可選用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等幾種試劑，對已清洗的載玻片進行處理。具體方法如下：
1.1 APES：現用現配。將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的APES中，停留20~30秒鍾，取出稍停片刻，再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結合的APES，置通風櫥中晾乾即可。用此載玻片撈片時應注意組織要一步到位，並盡量減少氣泡的存在，以免影響染色結果。
1.2 HistogripTM：將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的Histogrip液中，停留1~2分鍾，然後用雙蒸水快速清洗三次，室溫乾燥或60oC烤箱烘烤一小時，裝盒備用。
1.3 Poly-L-Lysine：將洗凈、乾燥的載玻片放入以1:10比例去離子水稀釋的多聚賴氨酸溶液中，浸泡5分鍾，60oC烤箱烘烤一小時或室溫過夜乾燥。裝盒備用。試驗中使用的器具均為非玻璃製品。 2、常用酶消化： 2.1 胰蛋白酶：一般使用濃度為0.05%~0.1%，消化時間為37℃、10~40分鍾，主要用於細胞內抗原的顯示。
2.2 胃蛋白酶：一般使用濃度為0.4%，消化時間為37℃、30~180分鍾，主要用於細胞間質抗原的顯示，如：Laminin（層粘蛋白），Collagen IV（IV型膠原）等。
g/ml的saponin溶液，消化時間為室溫孵育30分鍾。 2.3 皂素（Saponin）：一般使用濃度為2~10 3、抗原熱修復： 可根據實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復。抗原熱修復可選用各種緩沖液，如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等，但實驗證明，以0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）效果最好。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液（粉劑）配製，取該粉劑一包溶於1000ml的蒸餾水中，混勻，其pH值在6.0 0.1，如因蒸餾水本身造成的pH值偏差，請自行調整。
3.1 石蠟切片微波爐抗原修復操作方法：切片脫蠟至水後，3％H2O2處理10分鍾，蒸餾水洗2分鍾×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中，置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃~98℃之間並持續10~15分鍾（注意：無論是使用醫用或家用微波爐，請根據具體機型酌情設置條件，務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求）。取出容器，室溫冷卻10~20分鍾（注意：不可將切片從緩沖液中取出冷卻，以便使蛋白能夠恢復原有的空間構型）。PBS洗，下接免疫組化染色步驟。
3.2 石蠟切片高壓抗原修復操作方法：切片脫蠟至水。將1500ml~3000ml的枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置於金屬架上，放入鍋內，使切片位於液面以下，蓋鍋壓閥。當壓力鍋開始慢慢噴氣時（約加熱5~6分鍾後），計時1~2分鍾，然後將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫後，取下氣閥，打開鍋蓋，取出切片，蒸餾水洗後，PBS洗2分鍾×3，下接免疫組化染色步驟。
3.3 石蠟切片電爐煮沸抗原修復操作方法：切片脫蠟至水後，放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中，並將此容器置於盛有一定數量自來水的大器皿中，電爐上加熱煮沸，從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鍾，然後端離電爐，室溫冷卻20~30分鍾，蒸餾水沖洗，PBS洗，下接免疫組化染色步驟。 4、免疫組化染色步驟： （以美國ZYMED公司SP試劑盒為例）
石蠟切片脫蠟至水。
3%H2O2室溫孵育5~10分鍾，以消除內源性過氧化物酶的活性。
蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鍾，(如需採用抗原修復，可在此步後進行)。
5~10％正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10分鍾。傾去血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小時或4℃過夜。
PBS沖洗，5分鍾×3次。
滴加適當比例稀釋的生物素標記二抗（1%BSA-PBS稀釋），37℃孵育10~30分鍾；或滴加第二代生物素標記二抗工作液，37℃或室溫孵育10~30分鍾。
PBS沖洗，5分鍾×3次。
滴加適當比例稀釋的辣根酶標記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育10~30分鍾；或第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10~30分鍾。
PBS沖洗，5分鍾×3次。
顯色劑顯色（DAB或AEC）。
自來水充分沖洗，復染，封片。
冰凍切片免疫組化染色步驟
m，室溫放置30分鍾後，入4℃丙酮固定10分鍾，PBS洗，5分鍾×3。用3％過氧化氫孵育5~10分鍾，消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗，5分鍾×2。冰凍切片4~8

免疫組化非特異性染色的消除方法
一、非特異性染色的主要因素
組織的非特異性染色的機理很復雜，其產生的原因主要可分為以下幾點：
（1）一部分熒光素未與蛋白質結合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去
。
（2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結合。
（3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應抗體結合。
（4）從組織中難於提純抗原性物質，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。
（5）抗體分子上標記的熒光素分子太多，這種過量標記的抗體分子帶過多的陰離子，可吸附於正常組織上而呈現非特異性染色。
（6）熒光素不純，標本固定不當等。 二、消除非特異性染色的方法
消除熒光抗體非特異性染色的方法應根據產生的原因採取適當的方法，常用的方法有以下幾種：
（一）動物臟器粉末吸收法
常用肝粉（豬、大白鼠或小白鼠），其次是骨髓粉、鼠腦粉和雞胚粉等。每毫升熒光抗體中加入肝粉50～100mg,在離心管中充分混勻，在室溫中振動2h，4℃中過夜，再攪拌10min，高速離心（3000～15000r/min）30min，1～2次後，即可使用其上清液。吸收一般應在臨用前進行，吸收後之熒光抗體保存冰箱中勿超過2周。染色應作吸收前後之比較，吸收時可先用緩沖鹽水將組織乾粉浸濕，離心（3000～15000r/min）30min，除去上清液，再加入熒光抗體進行吸收，以免消耗過多的抗體。
肝粉或新鮮細胞吸收是一種非特異性的消除方法，對熒光抗體的熒光色素和蛋白都有吸附作用。如檢查組織中的病毒抗原時，也可用相同的組織乾粉或勻漿沉澱物吸收之。
用臟器肝粉吸收對熒光抗體損失較多，如果根據Hiramotos氏等的方法將組織的20%生理鹽水勻漿液，用生理鹽水洗2～3次，12000r/min
10min離心沉澱，用其沉澱物吸收其熒光抗體即能完全達到目的，京極方久氏認為這樣吸收對熒光抗體幾乎沒有損失，他們常用此法，效果甚佳，吸收後放置一周左右，用時有必要再吸收一次。
【肝粉的製法】
（1）將若干只小白鼠或大白鼠放血殺死，取出肝臟，用生理鹽水洗2～3次，除去血液，剝掉表面的結締組織的脂肪。
（2）剪碎，用生理鹽水反復洗滌至無血色止，然後再加生理鹽水少許，用組織搗碎機或勻漿器作成勻漿。
（3）將肝勻漿裝入離心管內（1/3左右），交換地用2～3倍量生理鹽水和丙酮反復洗滌各三次，至上清無血色止，每次完畢先用2000r/min離心沉澱15 min後，再除去上清液。
（4）最後用丙酮洗滌肝漿，再用布氏漏斗過濾，或離心沉澱，將沉澱物平鋪在潔凈的玻璃板上，37℃烤乾（過夜）。
（5）在乳缽中充分研磨，用120目銅篩篩選過後，分裝，密封，低溫乾燥保存。
2006-12-22 13:24 wifgw
二）透析法
熒光素如FITC分子可以通過半透膜，而蛋白質大分子不能透過，可將未與蛋白結合的熒光素透析除去。
（1）將標記完畢的熒光蛋白液裝入一透析袋或玻璃紙袋內，液面稍留空隙，緊扎。
（2）浸入0.02mol/pH
7.1～7.4的PBS中（懸於大於標記物體積約50～100倍的PBS內），在4℃中透析，每日更換3～4次PBS，約5～7天，透析液中無熒即可（在熒光光源照射下）。
（三）葡聚糖凝膠G-50柱層析法
除游離熒光素可用2×46cm柱層析法，詳細方法參閱第二章。加入熒光抗體15～18ml（按床體積的5%～10%加樣），使其緩慢滲入柱內，待即將全部入柱時，加入PBS少許，關閉下口，停留30～40min ，使游離熒光充分進入細篩孔中，然後再接通洗脫瓶開始滴入洗脫液。加入洗脫液一定量後，熒光抗體即向下移行，逐漸與存留於上端的游離熒光素之間拉開明顯的界線，隨著大量洗脫液的不斷加入，二者分離距離越來越大，熒光抗體最先流出，分前、中、後三部分收集，測F/P比值，合格者合並，濃縮，分裝。洗脫液用20%磺基水楊酸測定蛋白（發生沉澱反應），繼續洗脫，游離熒光素則相繼被洗脫下來，至洗脫液中無蛋白和熒光素後，此層析柱即可再用。
若用以除去熒光抗體中的游離熒光素和硫酸銨等鹽類，可先在過柱前透析一夜，否則，NH4+太濃，在蛋白未完全洗脫時即出現NH4+，因而影響提純與回收蛋白，一般待洗脫液出現蛋白時，即進行收集，之後出現SO4++（用1%BaCl2檢查發生白色沉澱）。最後是NH4+，（用納氏試劑檢查呈黃棕色沉澱），待洗脫液無SO4++及NH4+後可再用。
如僅用小量熒光抗體，可用1×20cm的柱層析柱，取2g Sephadex G-50裝柱，即可過濾2～3.5ml熒光抗體。
（四）DEAE纖維素柱層析法
標記過多或過少熒光素的抗體分子可用DEAE-纖維素柱層析法除去。方法如下： DEAE-纖維素柱的裝柱，洗脫、再生方法等與提純IgG方法相同。裝柱所需DEAE-纖維素量以乾重每克交換20～50mg標記蛋白量為宜
。常用梯度洗脫法如下：
（1）層析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡，標記物上柱後，先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脫，洗出無色或淡綠色液體，洗脫液量（根據床體積大小每梯度乘3），然後依下列各種離子強度洗脫液，
分別洗脫和收集：
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.05mol/L NaCl）……洗脫部分1。
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.01mol/L NaCl）……洗脫部分2。
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.02mol/L NaCl）……洗脫部分3。
將此三部分收集液（每管5ml）分別測定其F/P比值，0.05mol/L NaCl pH7.2PB洗脫液280nm光密度高峰管合並，濃縮保存備用。因這部分非特異性染色熒光最少，是比較好的熒光抗體。其他兩部分可以廢棄。
（2）柱上吸附的過度標記蛋白可繼續增加NaCl的濃度至
2.0mol/L洗脫完。
經過DEAE-纖維素層析後的標記抗體，其抗體量一般約損失50%，因此有些要求不太高的抗體，如抗細菌熒光抗體，不一定要這樣處理，可用染色效價測定的稀釋法除去非特異性染色。
（五）熒光抗體稀釋法
先測定熒光抗體特異性染色與非特異性染色的效價，若二者效價相差較大，則可將熒光抗體稀釋至一臨界濃度，使特異性染色呈陽性，而使非特異性染色保持陰性，稀釋方法和染色效價測定方法相同。
（六）純化抗原法
用各種方法提純單一成分的抗原是產生單價特異性抗體的最主要條件。近代免疫化學技術（免疫吸收法）和柱層析法等提供了很大的可能性，可參考有關專著。
（七）純化抗體法---免疫吸收法
例如抗IgA血清的純化方法---免疫吸收法。如分泌型IgA（ SIgA）抗原純度不高，所制的抗血清常與IgG呈交叉反應，為此需要吸收，常採用純化的人IgG戊二醛聚合物加以吸收純化。方法如下：
1．人IgG聚合物的制備 在5ml含40mg/ml人IgG的0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖溶液中，加入2.5%戊二醛溶液1ml，邊加邊攪，5min即出現混濁，逐現大塊膠塊，放置30min後，用研缽將凝膠磨細，繼用1.0mol/L pH7.0磷酸緩沖溶液反復洗滌3次，末次加蒸餾水至20ml，即為人IgG聚合物懸液。
2．免疫吸收法 將待吸收的抗SIgG血清加入待量IgG聚合物懸液，置室溫攪拌60min,離心沉澱，上清液即稀釋1倍的純化抗SIgA血清。如用IgG聚合物作少量分次吸收，其效果更好。
（八）伊文氏藍（Evans blue）襯染法
用0.01%伊文氏藍的0.01mol/L pH7.2PBS稀釋熒光抗體，可將背景細胞和組織染色，呈紅色熒光，與特異性黃綠色熒光形成鮮明的對比，減少了非特異性熒光，宜作常規應用。伊文氏藍一般先配成1%溶液，保存於4℃，用前再稀釋至0.01%用以
和然釋熒光抗體。
此外，還可以用胰酶消化組織切片或用10%牛血清蛋白封閉法等消除非特異性染色，提高特異性染色。

『玖』 簡要說明蛋白質電泳法·透析法·超速離心法和鹽析法的基本原理

電泳法： 在外加電場的羨型告作用下，帶電顆粒將向著與其電性相反的 電極移動的現象，稱為電泳。
透析法： 通過小分子經半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術。
超速離心法：利用離心力使水和其他小分子通過半透膜租嘩，而蛋白質留在膜內。
鹽析法：低濃度的中性鹽可以增加蛋白質的溶解度而高濃度的中性鹽可以降低蛋白質的溶解度是的蛋白質發生沉澱，在兄明蛋白質溶液中逐漸增大鹽濃度，不同蛋白質就會先後析出。

『拾』 有誰知道關於透析的相關常識

定義：穿過膜的選擇性擴散過程。可用於分離分子量大小不同的溶質，低於膜所截留閾值分子量的物質可擴散穿過膜，高於膜截留閾值分子量的物質則被保留在半透膜的另一側。
透析分類
用於醫學上的透析大致分為兩類：血液透析、腹膜透析
血液透析
血液透析（Hemodialysis），簡稱血透，通俗的說法也稱之為人工腎、洗腎，是血液凈化技術的一種。其利用半透膜原理，通過擴散、對流體內各種有害以及多餘的代謝廢物和過多的電解質移出體外，達到凈化血液的目的，並吸達到糾正水電解質及酸鹼平衡的目的。
腹膜透析
腹膜透析是利用腹膜作為半滲透膜，利用重力作用將配製好的透析液經導管灌入患者的腹膜腔，這樣，在腹膜兩側存在溶質的濃度梯度差，高濃度一側的溶質向低濃度一側移動（彌散作用）；水分則從低滲一側向高滲一側移動（滲透作用）。通過腹腔透析液不斷地更換，以達到清除體內代謝產物、毒性物質及糾正水、電解質平衡紊亂的目的。
醫學術語
名詞解釋
通過小分子經過半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術。
適用范圍
使體液內的成分（溶質或水分）通過半透膜排出體外的治療方法。常用於急性或慢性腎功能衰竭、葯物或其他毒物在體內蓄積的情況。常用的透析法有血液透析及腹膜透析 。 血液透析療法 將患者的血液和透析液同時引進透析器（兩者的流動方向相反），利用透析器（人工腎）的半透膜，將血中蓄積的過多毒素和過多的水分清出體外，並補充鹼基以糾正酸中毒，調整電解質紊亂，替代腎臟的排泄功能。 血液透析器俗稱人工腎，有空心纖維型、盤管型及平板型3種 。最常用的是空心纖維型 ，由1～1.5萬根空心纖維組成，空心纖維的壁即透析膜，具半透膜性質。血液透析時血液流入每根空心纖維內，而透析液在每根空心纖維外流過 ，血液的流動方向與透析液流動方向相反，通過半透膜原理清除毒物，通過超濾及滲透清除水分。
適應症和禁忌症
血液透析的適應症包括：①急性腎功能衰竭。②急性葯物或毒物中毒。③慢性腎功能衰竭。④腎移植前的腎功能衰竭或移植後排異反應使移植腎無功能者。⑤其他疾病（肝功能衰竭、精神分裂症、牛皮癬等）。 血液透析的相對禁忌症包括：①病情極危重、低血壓 、休克者。②嚴重感染敗血症者。③嚴重心肌功能不全或冠心病者。④大手術後3日內者。⑤嚴重出血傾向 、腦出血及嚴重貧血者。⑥精神病不合作者。⑦惡性腫瘤患者。