① 這個鹼性磷酸酶底物顯色試劑盒(BCIP/NBT)哪個廠家的好
我看選擇博凌科為的鹼性磷酸酶底物顯色試劑盒(BCIP/NBT)的多啊
操作方法:
1、按常 規操作 ,將蛋 白樣品 進行 SDS-PAGE電泳, 轉膜(硝酸 纖維素膜 和 PVDF 膜 均
可使用)。封閉 30~120 min,一抗孵育 1 小時或過 夜;漂洗 3~5 次,鹼 性磷酸酶標 記二抗孵 育 30~120 min,漂洗 3~5 次。如 上述步驟 採用磷酸緩 沖液,需 換用 Tris 緩 沖液漂洗 3~5 次以完全去除磷酸成分對於 AP抑製作用。
2、取 1ml AP reaction Buffer 中 加 10μl NBT溶液和 10μl BCIP 溶液,混勻。注意:根據膜的大 小,AP Buffer、NBT、AP Buffer NBTBCIP 的量等比例擴大。
3、把經 洗滌的 PVDF/NC 膜浸入顯 色底物 混合物中,於室溫平緩搖動進行溫育。
⒋細心觀察反 應過程, 待蛋白膜上 條帶呈色明顯,而無明顯背景時(一般約 5-15 分鍾),把膜浸入水中漂洗停止反應。
注意:若信號太弱可增加反應時間。
5、拍攝膜照片 或直接保 存膜留作永 久試驗紀錄。
② 常用顯色劑有哪些
TLC
顯色試劑的選擇
顯色劑可以分成兩大類:
一類是檢查一般有機化合物的通用顯色
劑;另一類是根據化合物分類或特殊官能團設計的專屬性顯色劑。
通用顯色劑
硫酸
常用的有四種溶液:硫酸
-
水
(1:1)
溶液;硫酸
-
甲醇或乙醇
(1:1)
溶液;
1.5mol/L
硫酸溶液與
0.5-1.5mol/L
硫酸銨溶液,噴後
110
℃烤
15min
,不同有機
化合物顯不同顏色。
0.5
%碘的氯仿溶液
對很多化合物顯黃棕色。
中性
0.05
%高錳酸鉀溶液
易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。
鹼性高錳酸鉀試劑
還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。
溶液
I
:
1%
高錳酸鉀溶液;
溶液
II
:
5%
碳酸鈉溶液;
溶液
I
和溶液
II
等量混合應用。
酸性高錳酸鉀試劑
噴
1.6%
高錳酸鉀濃硫酸溶液
(
溶解時注意防止爆炸
)
,噴
後薄層於
180
o
C
加熱
15
~
20min
。
酸性重鉻酸鉀試劑
噴
5%
重鉻酸鉀濃硫酸溶液,必要時
150
o
C
烤薄層。
5%
磷鉬酸乙醇溶液噴後
120
o
C
烘烤,
還原性化合物顯藍色,
再用氨氣薰,
則背景變
為無色。
專屬性顯色劑
由於化合物種類繁多,
因此專屬性顯色劑也是很多的,
現將在各類化合物中
最常用的顯色劑列舉如下:
(1)
烴類
①硝酸銀
/
過氧化氫
檢出物:鹵代烴類
溶液:硝酸銀
0.1g
溶於水
1ml
,加
2-
苯氧基乙醇
l00ml
,用丙酮稀釋至
200ml
,
再加
30%
過氧化氫
1
滴。
方法:噴後置未過濾的紫外光下照射;
結果:斑點呈暗黑色。
②熒光素
/
溴
檢出物:不飽和烴
溶液:
I
.熒光素
0.1g
溶於乙醇
100ml
;
II
.
5%
溴的四氯化碳溶液。
方法:先噴
(I)
,然後置含溴蒸氣容器內,熒光素轉變為四溴熒光素
(
曙紅
)
,熒光
消失,
不飽和烴斑點由於溴的加成,
阻止生成曙紅而保留熒光,
多數不飽和烴在
粉紅色背景上呈黃色。
③四氯鄰苯二甲酸酐
檢出物:芳香烴
溶液:
2
%四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯
(10:1)
的溶液。
方法:噴後置紫外光下觀察。
④甲醛
/
硫酸
檢出物:多環芳烴
溶液:
37%
甲醛溶液
0.2ml
溶於濃硫酸
l0ml
。
(2)
醇類
3,5-
二硝基苯醯氯
檢出物:醇類
溶液:
I
.
2%
本品甲苯溶液;
II
.
0.5%
氫氧化鈉溶液;
III
.
0.002%
羅丹明溶液。
方
法:先噴
(I)
,在空氣中乾燥過夜,用蒸氣薰
2min
,將紙或薄層通過試液
(II)30s
,
噴水洗,趁濕通過
(III)15s
,空氣乾燥,紫外燈下觀察。
硝酸鈰銨
檢出物:醇類
溶液:
I
.
1%
硝酸鈰銨的
0.2mol/L
硝酸溶液;
II
.
N,N-
二甲基
-
對苯二胺鹽酸鹽
1.5g
溶於甲醇、
水與乙酸
(128ml+25ml+1.5ml)
混合液中,
用前將
(I)
與
(II)
等量混合。
噴板後於
105
o
C
加熱
5min
。
③ 酯類物質如何顯色,顯色劑用什麼
需要有顯色基團才行。。
④ 染發用的顯色劑每個牌子都是一樣的嗎
這種肯定是不一樣的呀,因為每個牌子裡面的一些成分是不一樣的,但是最後呈現出來的效果都是一樣的。
⑤ 如何解決使用水楊酸鋅樹脂顯色劑時噴墨墨水擴散
由於無碳復寫來紙塗料黏附自在原紙表面,原紙出現的局部單根纖維和顏料粒子脫落(原紙掉毛),就會導致塗料層出現局部脫落。 根據生產實踐,分析產生掉毛掉粉的原因只要有:原紙的質量、塗料層膠黏劑的用量不足、粉狀顯色劑用量多、顏料分散不均勻且塗料中含有雜質、塗布加工過程中的乾燥溫度曲線控制不當從而影響塗層強度、壓光壓力不足導致紙平滑度低、印刷速度的提高及使用黏度大的油墨也會加大紙張的掉毛掉粉。依據掉毛掉粉的原因不同,採用如下措施加以解決。
一、生產無碳復寫紙時,選擇表面強度高的原紙 實踐證明,進口或國內優質原紙的表面強度明顯優於國產低檔原紙,但由於進口或國內優質原紙價格較高,造成加工成本高。對表面強度相對較差的國產低檔原紙,可採取調節膠黏劑用量的方法來提高塗布紙的表面強度。
二、生產無碳復寫紙時適當調節途布中膠黏劑的用量 膠黏劑的用量和種類直接影響塗布紙的表面強度,如果掉粉只是塗料層從紙表面脫落,可以通過增加塗料中膠黏劑的用量來消除。