二抗用蒸餾水配

Ⅰ 求封閉液中1%的BSA是怎麼配製

取1g BSA，加蒸餾水，定容到100ml就行了。

最常用的封閉劑是0.05%-0.5%的BSA，封閉是否必要，取決於ELISA的模式及具體的實驗條件。並非所有的ELISA 固相均需封閉，封閉不當反而會使陰性本底增高。

一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌徹底，不經封閉也可得到滿意的結果。

特別是用單抗腹水直接包被，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面，業已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中，封閉一般是不可少的。

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判斷封閉條件，要考慮在此條件下是否能達到試驗要求，即棋盤滴定要滿足：陽性樣品OD=0.8、陰性樣品OD<=0.1，而不是看你待測樣品OD變化趨勢;

過低封閉濃度勢必造成本底過高，但過高又會使靈敏度降低，因此只要選擇能夠滿足你試驗要求的最低BSA濃度就可以了。

另外提醒，洗滌一定要徹底，很重要的。

包被後封閉前一般要洗滌一遍，以便於洗掉結合不牢固的包被物，防止在實驗中影響實驗結果;封閉後一定不要洗滌，封閉的目的就是要靠蛋白填補未被包被物佔領的空間，另外封閉液一般也具有保護作用。

如果不是用biotin-avidin系統的話，用5%脫脂奶粉做封閉液就可以了，廉價，效果也很好。

封閉液一般是用5%的BSA或者是用5%的脫脂奶粉，溶劑一般使用TBST。做實驗的時候，我一直強調這樣的一個原理，那就是在了解原理的基礎之上，我們完全可以不拘泥於書本，進行創造。就拿這個封閉液來講，要是單純的一種封閉效果仍然不好的話，我們完全可以兩種合用，我就試過1%的BSA和5%的脫脂奶粉合用進行封閉的事例。所以，搞科學研究是需要我們進行再創造的。

D、BSA交聯抗原注射到兔子體內得到一抗，我們Elisa的二抗用的是羊抗兔HRP標記的二抗。請問，在封閉時，用什麼樣的封閉液比較好呢?是無蛋白封閉液，還是羊的免疫前血清?