濃縮胞外蛋白可以用蒸餾法嗎

『壹』 濃縮DNA方法有哪些(至少三種)

提取DNA的具體步驟

1.破碎細胞，釋放DNA

雞血細胞中的DNA與核蛋白結合，位於雞血細胞的細胞核中，正常情況下是不會釋放出來的。為了使DNA從細胞核中釋放出來，需要向雞血細胞液中加入蒸餾水，並且攪拌，從而使血細胞膜和核膜脹破。用玻璃棒攪拌可以加速細胞的破裂。注意應沿一個方向快速攪拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA。一般5～10 mL的雞血細胞液加入20 mL蒸餾水攪拌5 min。釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質結合在一起，應用3～4層紗布進行過濾，除去一些顆粒較大的雜質。

2．溶解細胞核內的DNA

在濃度較高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚，游離出的DNA溶解在溶液中。在溶液中加入兩倍體積的濃度為2 mol/L的NaCl溶液，攪拌1 min。注意應沿一個方向攪拌，使DNA充分溶解。

3．DNA的析出

將溶液中的DNA與其他雜質分離，這一步驟是實驗成敗的關鍵。教材中列舉了提取DNA的三種方案，本案例選取方案一。加蒸餾水降低NaCl溶液濃度，使DNA析出。實驗中應該緩慢貼壁加入蒸餾水，並輕輕地沿一個方向不停地均勻攪拌，以利於DNA分子的附著和纏繞。同時應注意控制加水量，使NaCl溶液的終濃度為0.1～0.2 mol/L。加水過程一般分三次進行，當總加水量為300 mL左右時，DNA已基本析出。加水太多、溶液過稀，會使DNA分子又重新溶解。

用3～4層紗布對DNA稀釋液進行過濾，濾去蛋白質，收集DNA的黏稠物。如果採用離心法，效果更好。用4 000 r/min轉速的離心機，離心15 min，除去上清液(含有蛋白質)，留下的沉澱物中含有DNA。此時注意觀察DNA黏稠物的顏色。

4.DNA的初步純化

如果提取的DNA量不夠多且其中含有較多雜質，或者加入溶液和攪拌等操作過程不規范，都會導致實驗現象不明顯，常常使製取的DNA粗製品不能顯示出DNA的本色──白色。為了增進實驗效果，需要對DNA粗製品進行簡單的提純，下面的方案可供參考。

將DNA黏稠物再溶解，繼續用2 mol/L的NaCl溶液20 mL溶解DNA黏稠物，仍舊沿一個方向不停攪拌3 min，使DNA充分溶解，以免損失。用3～4層紗布進行過濾（或離心），濾去雜質，收集含有DNA的濾液。向濾液中貼壁緩慢加入50 mL預冷的體積分數為95％的乙醇，並用玻璃棒朝一個方向緩慢、均勻地攪拌，溶液中會出現DNA絲狀物。

實驗一般要求採用預冷的95％的乙醇，但對比結果顯示，常溫下的乙醇溶液也可產生明顯效果。從理論上分析，預冷的乙醇溶液具有以下優點。一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子運動，易於形成沉澱析出；三是低溫有利於增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。此時懸浮於溶液中的DNA絲狀物相對含雜質較少，如果出現的絲狀物較少，可以將此混合液再放入冰箱中冷卻幾分鍾。濃縮後的DNA絲狀物，可以用緩緩旋轉玻璃棒的方法捲起(因為玻璃棒有吸附DNA的作用)。如果DNA絲狀物較少，不易吸附在玻璃棒上，也可以用筷子等表面粗糙的用具來幫助DNA分子纏繞。

DNA的純化還有許多其他方法。例如，添加質量分數為25％的十二烷基磺酸鈉(SDS)溶液，使蛋白質變性後與DNA分開。隨後，加入氯仿—異丙醇混合液（體積比為24∶1），通過離心將蛋白質及其他雜質除去,取上清液。可重復上述操作幾次，直至上清液變成透明的黏稠液體。此外苯酚可以迅速使蛋白質變性，抑制核酸酶的活性。利用苯酚處理後，離心分層，DNA溶於上層水相，蛋白質變性存在於酚層中，這時可用分液漏斗或吸管等儀器將二者分開。教師可以根據學校的條件讓學生自己設計實驗方案，比較實驗結果。

5．DNA的鑒定

二苯胺法二苯胺試劑的配製及鑒定DNA的方法參見教科書。需要注意的是，二苯胺試劑在冰箱內可保存6個月，使用前需搖勻。

紫外燈照射法用蒸餾水配製質量分數為0.05%的溴化乙錠(EB)溶液，將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹到蠟紙上，再滴1滴EB溶液染色。將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中)，可呈現橙紅色的螢光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm處)。

電泳法此方法適合鑒定純度較高的DNA。有條件的學校可以參考本專題課題2的實驗案例和參考資料部分。

案例二 以菜花為實驗材料進行DNA的粗提取

課前准備 將新鮮菜花和體積分數為95％的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24 h。

提取DNA的具體步驟

1.取材 稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。

2.研磨 將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。

研磨液的配製方法如下。將10.1 g Tris加入到50 mL蒸餾水中，使其溶解，然後，用2 moL/L的HCl溶液調節pH至8.0，再加入8.76 g NaCl 、37.2 g EDTA 、20 g SDS。待上述葯品全部溶解後，再用蒸餾水定容至1 000 mL。

教材中建議採用洗發香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細胞膜破碎，釋放DNA。學生可以設置對照實驗，比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實驗室提取高純度的DNA都採用一種陽離子去污劑──十六烷三甲基溴化銨分離緩沖液，使細胞膜破碎，同時將DNA與植物中多糖等雜質分開，再用氯仿—異丙醇混合液（體積比為24∶1）抽提去除雜質蛋白，得到高純度的DNA。

3.過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心，用1000 r/min的轉速，離心2～5 min，取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分鍾後，再取上清液。

4.沉澱 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95％的預冷乙醇溶液中，並用玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液(玻璃棒不要直插到燒杯底部)。沉澱3～5 min後，可見白色的DNA絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉，將絮狀物纏繞在玻璃棒上。

我是學生物的，這是教材上的，至於3種方法我不知道啊。。。只是做一下任務，呵呵

『貳』 生物高手請進：請問「利用透析法純化蛋白酶時，應以蒸餾水作為透析液」這句話為什麼錯了難道蒸餾水會...

1，用緩沖液更能保證蛋白質的活性，用蒸餾水雖說沒有嚴重錯誤但對蛋白質活性的保持還版是有風險的，若實驗權中不小心濺進去酸或鹼，顯然緩沖液更保險。
2，合適的緩沖液可以抑制蛋白質水解，保持將ph控制在等電點附近，防止蛋白質聚沉。3，蛋白質多親水，緩沖液中離子可以防止過多水分子水合蛋白質。
至於別的緩沖液，最好還是用磷酸，原因：1，磷酸三元且弱酸，緩沖餘地更大，而且磷元素比較親生物。2，碳酸鈉，碳酸氫鈉易分解，亞硫酸根又時不時會產生有毒物質，硫代硫酸根又活潑，氫氟酸，次氯酸更不用說，常見的只有磷酸緩沖液最佳。

『叄』 提取細胞中DNA和蛋白質都需要用蒸餾水漲破細胞這句話為什麼錯

無論是提取細胞中的DNA，還是提取蛋白質，都有很多的方法，完全可以直接離心提取，所以「都需要」是錯誤的！

『肆』 提純蛋白的步驟

蛋白純化方法很多，也很復雜，一般程序如下：分離純化某一特定蛋白質的一般程序可以分為前處理、粗分級、細分級三步。前處理分離純化某種蛋白質，首先要把蛋白質從原來的組織或細胞中以溶解的狀態釋放出來並保持原來的天然狀態，不丟失生物活性。為此，動物材料應先剔除結締組織和脂肪組織，種子材料應先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質的污染，油料種子最好先用低沸點的有機溶劑如乙醚等脫脂。然後根據不同的情況，選擇適當的方法，將組織和細胞破碎。動物組織和細胞可用電動搗碎機或勻漿機破碎或用超聲波處理破碎。植物組織和細胞由於具有纖維素、半纖維素和果膠等物質組成的細胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當的提取液一起研磨的方法或用纖維素酶處理也能達到目的。細菌細胞的破碎比較麻煩，因為整個細菌細胞壁的骨架實際上是一個借共價鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅韌。破碎細菌細胞壁的常用方法有超聲波破碎，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細胞破碎後，選擇適當的緩沖液把所要的蛋白提取出來。細胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去。如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分，如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質等，則可利用差速離心的方法將它們分開，收集該細胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質細胞器結合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚，然後用適當介質提取。粗分級分離當蛋白質提取液（有時還雜有核酸、多糖之類）獲得後，選用一套適當的方法，將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來。一般這一步的分離用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大，既能除去大量雜質，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適於用沉澱或鹽析法濃縮，則可採用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空乾燥或其他方法進行濃縮。細分級分離樣品經粗分級分離以後，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳法，包括區帶電泳、等電點聚焦等作為最後的純化步驟。用於細分級分離的方法一般規模較小，但解析度很高。結晶是蛋白質分離純化的最後步驟。盡管結晶過程並不能保證蛋白一定是均一的，但是只有某種蛋白在溶液中數量上佔有優勢時才能形成結晶。結晶過程本身也伴隨著一定程度的純化，而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。由於結晶過程中從未發現過變性蛋白，因此蛋白的結晶不僅是純度的一個標志，也是斷定製品處於天然狀態的有力指標。

『伍』 常用的濃縮方法有哪些如何選擇合理的濃縮途徑

濃縮DNA方法有哪些
提取DNA的具體步驟
1.破碎細胞,釋放DNA
雞血細胞中的DNA與核蛋白結合,位於雞血細胞的細胞核中,正常情況下是不會釋放出來的.為了使DNA從細胞核中釋放出來,需要向雞血細胞液中加入蒸餾水,並且攪拌,從而使血細胞膜和核膜脹破.用玻璃棒攪拌可以加速細胞的破裂.注意應沿一個方向快速攪拌,但也不能太快太猛,防止打碎DNA.一般5～10 mL的雞血細胞液加入20 mL蒸餾水攪拌5 min.釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質結合在一起,應用3～4層紗布進行過濾,除去一些顆粒較大的雜質.
2．溶解細胞核內的DNA
在濃度較高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚,游離出的DNA溶解在溶液中.在溶液中加入兩倍體積的濃度為2 mol&腸暢斑堆職瞪辦缺暴畫#47;L的NaCl溶液,攪拌1 min.注意應沿一個方向攪拌,使DNA充分溶解.

『陸』 如何用蛋白濃縮管

選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。

通常應回截留分子量答不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。

新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

(6)濃縮胞外蛋白可以用蒸餾法嗎擴展閱讀：

超濾濃縮離心管，最新推出專利產品Hydrosart膜2K型，具有極低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。

備有四種材質的超濾膜：聚醚碸、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart，可根據不同要求靈活選用；兩種回收濃縮液的方法：既可用吸管直接吸取並回收，又可將離心管放入離心機反甩，將濃縮液甩入回收帽中，加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收；

『柒』 細胞培養液中蛋白的提取方法

蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段,現介紹幾種常用的濃縮技術.
1、透析袋濃縮法
利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種.將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替）,結扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可.吸水劑用過後,可放入溫箱中烘乾或自然乾燥後,仍可再用.
2、冷凍乾燥濃縮法
這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法,它既使蛋白質不易變性,又保持蛋白質中固有的成分.它是在冰凍狀態下直接升華去除水分.具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍,然後移置乾燥器內（乾燥器內裝有乾燥劑,如NaOH、CaCl2和硅膠等）.密閉,迅速抽空,並維持在抽空狀態.數小時後即可獲得含有蛋白的乾燥粉末.乾燥後的蛋白質保存方便,應用時可配成任意濃度使用.也可採用凍干機進行冷凍乾燥.
3、吹乾濃縮法
將蛋白溶液裝入透析袋內,放在電風扇下吹.此法簡單,但速度慢,且溫度不能過高,最好不要超過15 ℃.
4、超濾膜濃縮法
此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出,而蛋白質存留於膜上達到濃縮目的.有兩種方法進行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內,在不斷攪拌之下過濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內置於真空乾燥器的通風口上,負壓抽氣,而使袋內液體滲出.
5、凝膠濃縮法
選用孔徑較小的凝膠,如SephadexG25或G50,將凝膠直接加入蛋白溶液中.根據干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數而稱取所需的干膠量.放入冰箱內,凝膠粒子吸水後,通過離心除去.
6、濃縮膠濃縮法
濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物,具有很強的吸水性能.每克干膠可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物質,如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等,適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質.濃縮後,蛋白質的回收率可達80％～90％.比濃縮膠應用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可.必須注意,濃縮溶液的pH值應大於被濃縮物質的等電點,否則在濃縮膠表面產生陽離子交換,影響濃縮物質的回收率.
（轉的!不過也希望能幫到你）

『捌』 提取細胞中的DNA和蛋白質都需要用蒸餾水漲破細胞 這句話為什麼錯了 DNA不能用蒸餾水嗎

用蒸餾水漲破細胞多見於提取紅細胞中的血紅蛋白，在其他地方中的應用少見，提取DNA是不需要該操作的。而且無論是提取細胞中的DNA，還是提取蛋白質，都有很多的方法，所以「都需要」也是錯誤的。

『玖』 提純蛋白質可以用的方法是（） A．過濾 B．蒸餾 C．鹽析 D．萃取

A．過濾分離可溶物和不溶物，故A錯誤； B．蒸餾分離沸點不同的液體混合物，故B錯誤； C．鹽析可使蛋白質從溶液中因溶解度降低而析出，其性質不變，則可用來提純蛋白質，故C正確； D．萃取是利用化合物在兩種互不相溶（或微溶）的溶劑中溶解度或分配系數的不同，使化合物從一種溶劑內轉移到另外一種溶劑中的方法，故D錯誤． 故選C．

『拾』 為什麼利用透析法純化蛋白時，為什麼不能用蒸餾水做透

防止鹽離子濃度突變，蛋白變性。