蛋白質測定中蒸餾後溶液變黑

A. 蛋白質測定時，樣品經消化蒸餾之前為什麼要加入氫氧化鈉加入量對測定結果有何影響

1加入氫氧化鈉是因為氫氧化鈉和硫酸銨在加熱條件下生成氨氣溢出。
2加入量需要過量回，估計樣品氮含量，計答算所需量，加入量最少超過所需量，還要中和消解過程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解時加入的硫酸量
3溶液顏色變化，如果本來是澄清溶液，此後會變黑、褐灰等顏色
4顏色變化是銅離子的存在的原因，變黑是銅離子和氫氧根離子變成氫氧化銅。不穩定生成氧化銅（黑色）所致
5如果沒有變化，是加人氫氧化鈉量不夠所致
以上內容又本人經驗所得，沒有參考任何文獻，希望對樓主有所幫助！

B. 試述蛋白質測定中，樣品消化過程中內容物顏色發生什麼變化為什麼

蛋白質測定是生物化學和分子生物學研究中最常用、最基本的分析方法之一。人體正常值一般是 60～80 g/L。消化前加硫酸是應將附著在瓶壁上的粉末仔細沖洗至瓶中，消化 過程中應注意轉動燒瓶，利用冷凝的酸液將附著在瓶壁上的炭粒沖下，以促迚消化；

消化必須在通風櫥中迚行，消化開始時文火加熱，以克液體竄出。消化時如果採用 直接火加熱，火焰丌能超過液面以上，否則可能引起燒瓶爆裂；

樣品消化液丌易 澄清透明時，可將燒瓶完全冷卻後加入30%過氧化氫2~3mol 後繼續消化，直至消化 液澄清透明呈藍綠色為止。

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准備4個50mL凱氏燒瓶並標號，想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品，另外兩個燒瓶作為對照，在每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物。

再加入濃硫酸，將4個燒瓶放到消化架上進行消化，之後進行蒸餾，全部蒸餾完畢後用標准鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量，直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色，即為滴定終點，結算出蛋白質含量。

雙縮脲法是第一個用比色法測定蛋白質濃度的方法，硫銨不幹擾顯色， Cu2+與蛋白質的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡合，形成紫藍色絡合物，此物在540nm波長處有最大吸收。首先利用標准蛋白溶液和雙縮脲試劑繪制標准曲線。

將待測血清與硫酸鈉在待測試管中混合，並用只加入硫酸鈉不含血清的試管作為對照，將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑。

充分混合後於37℃環境中放置10分鍾，在540nm波長進行比色，以對照管調零，讀取吸光度值，由標准曲線上直接查出蛋白質含量。雙縮脲法常用於0.5g/L～10g/L含量的蛋白質溶液測定。

C. 凱氏定氮法測定蛋白質，蒸餾液加入過量的氫氧化鈉後呈色

綠色
因為所用混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

D. 在初蛋白質的測定實驗中，為什麼溴甲酚綠甲基紅指示劑變綠時就意味著蒸餾室內的氨氣全部進入硼酸溶液中了

不是變綠就意味著氨氣完全進入硼酸

一般說來 變綠後 還要繼續蒸餾十分鍾左右 然後將導管提出液面 繼續蒸餾一分鍾

E. 急、有誰知道：在蛋白質測定中,樣品經消化蒸餾之前為什麼要加入氫氧化鈉

是測定蛋白質組分吧，加NaOH是破壞氫鍵使其分解為氨基酸。無顏色變化

F. 凱氏定氮法測定蛋白質含量中消化完了溶液呈什麼顏色

藍綠色，等從消化爐上取下後不一會就變成無色。

凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法，即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨；

隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收，再以標准鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量，由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

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注意

樣品應是均勻的，固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻，樣品放入定氮瓶內時，不要沾附頸上。萬一沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低。

在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

如硫酸缺少，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用，因此當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。