① 稀釋50*TAE溶液到1*TAE是用蒸餾水還是一般的水
做膠的TAE當然用雙蒸水
如果是槽中使用的電泳緩沖液,單蒸水也可以
② 剃度稀釋都用蒸餾水還是用溶解溶劑
做膠的TAE當然用雙蒸水
如果是槽中使用的電泳緩沖液,單蒸水也可以
③ TAE緩沖液 配方
你好,我看了你的推斷過程,有一個地方有誤:Tris-乙酸不代表Tris與乙酸的比例是一專比一,實際上配TAE時,根據屬所需的pH值,Tris與乙酸比例是2:1的。所以1X :0.04mol/l Tris-乙酸=0.04mol/LTris鹼以及0.02mol/L乙酸,相應地你就能算出是57.1ml冰乙酸了。
另外,你發現沒有,按照你的1X的配方EDTA是0.001mol/L,那麼乘以50為0.05mol/L,而50×配方中是0.1mol/L。這兩種配方都是正確的:分子克隆附錄上面取的是0.05mol/L,takara的技術手冊上用的是0.1mol/L,這個影響不大,主要是鰲合Mg,抑制DNase活性。
希望能夠幫到你,有問題繼續交流!
④ 50×TAE緩沖液配方
你好,我看了你的推斷過程,有一個地方有誤:Tris-乙酸不代表Tris與乙酸的比例是一比一,回實際上配TAE時,根據所需的答pH值,Tris與乙酸比例是2:1的。所以1X :0.04mol/l Tris-乙酸=0.04mol/LTris鹼以及0.02mol/L乙酸,相應地你就能算出是57.1ml冰乙酸了。
另外,你發現沒有,按照你的1X的配方EDTA是0.001mol/L,那麼乘以50為0.05mol/L,而50×配方中是0.1mol/L。這兩種配方都是正確的:分子克隆附錄上面取的是0.05mol/L,takara的技術手冊上用的是0.1mol/L,這個影響不大,主要是鰲合Mg,抑制DNase活性。
希望能夠幫到你,有問題繼續交流!
⑤ TAE緩沖液
按照
242g Tris鹼
57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
是配置1L 50x的緩沖液
使用的時候取決於你的容回器有多大,一般用一個答2L的試劑瓶的話,就是40ml儲存液+水補滿到2L,然後拚命混勻就可以倒進電泳槽作電泳緩沖液或者配置agarose TAE膠了
⑥ 配置瓊脂糖膠時,可以用蒸餾水和高濃度的TAE液嗎
1.用蒸餾水將制膠工具洗干凈 准備好制膠平板 用瓊脂將模具邊緣封閉 架好梳回子
2.根據要分離的答樣品(DNA)大小配製合適濃度的瓊脂凝膠 准確的稱取一定量的瓊脂糖乾粉 加入到合適體積的錐形瓶中 加入一定量的電泳緩沖液(30ml左右TAE) 放入到微波爐內加熱融化 冷卻片刻(不燙手即可)
3.融化後的瓊脂溶液搖晃混勻 倒入電泳槽中 等其凝固
4.室溫下凝固30-40min左右 小心的拔出梳子 取出凝固好的凝膠放入電泳槽內 准備上樣
5.在電泳槽中倒入電泳緩沖液(TAE)沒過膠面1mm左右 去除膠孔內的氣泡
6.上樣 5ulDNA樣品加入1ul上樣緩沖液(loading buffer)和1ul的染料 用搶混勻後加入到凝膠孔內
.上樣結束 接通電源 紅色正極 黑色負極 DNA樣品有負極往正極運動 加樣孔側為負 40-50v電壓 電壓30敏左右即可(< 40min)
8.電壓結束 關閉電源 凝膠成像儀上觀察電壓位置並比對marker判斷大小
⑦ 關於電泳緩沖液TAE配製的幾個問題
按照說明上的量配的,一般問題不大,用精密pH試紙就可以。
完全可以的,只要使用前沒有沉澱就可以。
一般不需要滅菌,因為就是用於電泳嗎,甚至可以反復使用,隔一段時間換一次即可。
⑧ 10×Tris-乙酸(TAE)緩沖液配製方法
1.
稱量Tris
48.4g,Na2EDTA·2H2O
7.44g
於1L燒杯中;
2.向燒杯中加入約800ml去離子水,充分攪拌溶解;
3加入11.4ml的冰醋酸回,充分攪拌;
4.用去答離子水定容至1L後,室溫保存,待用。
⑨ 50倍的TAE緩沖液的配製
稱下列試劑,1L燒杯
tris 242g
Na2EDTA.2H2O 37.2g
然後加入800ml的去離子水,充回分攪拌溶解。答
加入57.1ml的醋酸,充分混勻。
加去離子水定容至1L,室溫保存。
需要使用的時候,稀釋為1*的,
例如:需要使用200ml的1*TAE,則量4ml的50*TAE,196ml的去離子水,混勻即可。
⑩ 如何配製2%瓊脂糖溶液
秤一克瓊脂糖,加100毫升蒸餾水。
但是,一般跑電泳的時候,需要加tae緩沖液,50×tae加2毫升,再加98毫升蒸餾水。
配瓊脂糖,差一兩毫升沒什麼影響的,我們實驗室用的是百分之二的。