通過除垢劑才能分離的膜蛋白

❶ 凝膠過濾法分離蛋白質時,從層析柱上先被洗脫下來的是

答案A
用凝膠過濾柱層析分離蛋白質是根據蛋白質分子大小不同進行分離的方法,與蛋白質分子的帶電狀況無關.在進行凝膠過濾柱層析過程中,比凝膠網眼大的分子不能進入網眼內,被排阻在凝膠顆粒之外.比凝膠網眼小的顆粒可以進入網眼內,分子越小進入網眼的機會越多,因此不同大小的分子通過凝膠層析柱時所經的路程距離不同,大分子物質經過的距離短而先被洗出,小分子物質經過的距離長,後被洗脫,從而使蛋白質得到分離.

❷ 凝膠過濾法分離蛋白質時,從層析柱上先被洗脫下來的是什麼

選 A
凝膠過濾，與帶點多少沒關系！因為凝膠過濾是根絕分子大小來工作的！
分子量小的，會經過凝膠珠上的孔隙，路程較長，後洗脫下來；
分子量大的，會直接經過凝膠顆粒之間的縫隙，路程較短，會先先脫下來！

❸ 凝膠色譜法是分離蛋白質的一種常用方法。但並非所有蛋白質都可用此方法進行分離.能分離的蛋白質分子間必須

首先：蛋白質本身是大分子物質，但是不同的蛋白質分子量又不同，差異還是比較大的。
其次回：凝膠顆答粒內部的孔道並是都一樣大，路徑並不都相同。
所以如果分子量較大的分子，其分子量都超過凝膠顆粒內部的孔徑，那麼它們都只能從外面過，路徑差不多，分不開；而分子量較小的蛋白質則可進入不同大小的孔道，通過不同路徑將其分開；其他比蛋白質小的分子，由於都能進入凝膠的全部空隙，也不會有好地分離效果。
所以答案為C是說的過去的。

❹ 膜蛋白核蛋白,糖蛋白,脂蛋白異同點,及這些蛋白的分離方法和分離原理 需要詳細的答案，謝謝各位大神

膜蛋白：http://ke..com/view/145802.htm

核蛋白：http://ke..com/view/264309.htm

糖蛋白：http://ke..com/view/184084.htm

脂蛋白：http://ke..com/view/133314.htm

異同點：化學本質都是蛋白質，只不過糖蛋白有糖側鏈而已，所在位置不同，發揮的作用也不相同。

蛋白質的分離方法及原理：

1. 根據分子大小不同進行分離純化
   蛋白質是一種大分子物質,並且不同蛋白質的分子大小不同,因此可以利用一些較簡單的方法使蛋白
   質和小分子物質分開,並使蛋白質混合物也得到分離。根據蛋白質分子大小不同進行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過濾等。
   2.根據溶解度不同進行分離純化
   
   影響蛋白質溶解度的外部條件有很多,比如溶液的pH值、離子強度、介電常數和溫度等。但在同一條件下,不同的蛋白質因其分子結構的不同而有不同的溶解度,根據蛋白質分子結構的特點,適當地改變外部條件,就可以選擇性地控制蛋白質混合物中某一成分的溶解度,達到分離純化蛋白質的目的。常用的方法有等電點沉澱和pH值調節、蛋白質的鹽溶和鹽析、有機溶劑法、雙水相萃取法、反膠團萃取法等。
   
   等電點沉澱和pH值調節是最常用的方法。每種蛋白質都有自己的等電點,而且在等電點時溶解度最
   低;相反,有些蛋白質在一定pH值時很容易溶解。因而可以通過調節溶液的pH值來分離純化蛋白質。王洪新等[8]研究茶葉蛋白質提取過程發現,pH值為時茶葉蛋白提取效果最好,提取率達到36·8%,初步純化得率為91·0%。李殿寶[9]在從葵花脫脂粕中提取蛋白質時將蛋白溶液的pH值調到3~4,使目標蛋白於等電點沉澱出來。等電點沉澱法還應用於葡萄籽中蛋白質的提取。李鳳英等[10]測得葡萄籽蛋白質的等電點為3·8。他們利用鹼溶法提取葡萄籽蛋白質,得到了最佳的提取工藝為:以1×10-5mol·L-1的NaOH溶液,按1∶5的料液比,在40℃攪拌40 min,葡萄籽蛋白質提取率達73·78%。另外還可以利用鹼法提取大米蛋白,其持水性、吸油性和起泡性等均優於酶法提取[11]。利用酸法提取得到的鰱魚魚肉蛋白質無腥味、色澤潔白,蛋白質產率高達90%[12]。
   蛋白質的鹽溶和鹽析是中性鹽顯著影響球狀蛋白質溶解度的現象,其中,增加蛋白質溶解度的現象稱鹽溶,反之為鹽析。應當指出,同樣濃度的二價離子中性鹽,如MgCl2、(NH4)2SO4對蛋白質溶解度影響的效果,要比一價離子中性鹽如NaCl、NH4Cl大得多。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用鹼溶法還可以利用鹽溶法來提取蛋白質,其最佳提取工藝是:以10%NaCl溶液,按1∶25的料液比,在30℃攪拌提取30min,蛋白質提取率為57·25%[10]。鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法,其中硫酸銨鹽析法廣泛應用於生產。由於硫酸銨在水中呈酸性,為防止其對蛋白質的破壞,應用氨水調pH值至中性。為防止不同分子之間產生共沉澱現象,蛋白質樣品的含量一般控制在0·2% ~2·0%。利用鹽溶和鹽析對蛋白質進行提純後,通常要使用透析或者凝膠過濾的方法除去中性鹽[13]。
   
   有機溶劑提取法的原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質在水中的溶解度顯著降低;而且在一定溫度、pH值和離子強度下,引起蛋白質沉澱的有機溶劑的濃度不同,因此,控制有機溶劑的濃度可以分離純化蛋白質。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預冷的培養液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰核蛋白析出,從而純化冰核蛋白[14]。由於在室溫下,有機溶劑不僅能引起蛋白質的沉澱,而且伴隨著變性。因此,通常要將有機溶劑冷卻,然後在不斷攪拌下加入有機溶劑防止局部濃度過高,蛋白質變性問題就可以很大程度上得到解決。對於一些和脂質結合比較牢固或分子中極性側鏈較多、不溶於水的蛋白質,可以用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑提取,它們有一定的親水性和較強的親脂性,是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白最早由Cohn於1949年提出,用於制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是目前WHO規程和中國生物製品規程推薦的方法,不僅解析度高、提純效果好、可同時分離多種血漿成分,而且有抑菌、清除和滅病毒的作用[15]。
   
   萃取是分離和提純有機化合物常用的一種方法,而雙水相萃取和反膠團萃取可以用來分離蛋白質。雙水相萃取技術(Aqueous two phase extraction,ATPE)是指親水性聚合物水溶液在一定條件下形成雙水相,由於被分離物在兩相中分配的不同,便可實現分離,被廣泛用於生物化學、細胞生物學和生物化工等領域的產品分離和提取。此方法可以在室溫環境下進行,雙水相中的聚合物還可以提高蛋白質的穩定性,收率較高。對於細胞內的蛋白質,需要先對細胞進行有效破碎。目的蛋白常分布在上相並得到濃縮,細胞碎片等固體物分布在下相中。採用雙水相系統濃縮目的蛋白,受聚合物分子量及濃度、溶液pH值、離子強度、鹽類型及濃度的影響[16]。
   
   反膠團萃取法是利用反膠團將蛋白質包裹其中而達到提取蛋白質的目的。反膠團是當表面活性劑
   在非極性有機溶劑溶解時自發聚集而形成的一種納米尺寸的聚集體。這種方法的優點是萃取過程中蛋
   白質因位於反膠團的內部而受到反膠團的保護。程世賢等[17]就利用反膠團萃取法提取了大豆中的蛋白質。
   
   3.根據電荷不同進行分離純化
   根據蛋白質的電荷即酸鹼性質不同分離蛋白質的方法有電泳和離子交換層析兩類。
   在外電場的作用下,帶電顆粒(如不處於等電點狀態的蛋白質分子)將向著與其電性相反的電極移動,這
   種現象稱為電泳。聚丙烯醯胺電泳是一種以聚丙烯醯胺為介質的區帶電泳,常用於分離蛋白質。它的優點是設備簡單、操作方便、樣品用量少。等電聚焦是一種高解析度的蛋白質分離技術,也可以用於蛋白質的等電點測定。利用等電聚焦技術分離蛋白質混合物是在具有pH梯度的介質中進行的。在外電場作用下各種蛋白質將移向並聚焦在等於其等電點的pH值梯度處形成一個窄條帶。孫臣忠等[18]研究了聚丙烯醯胺電泳、等電聚焦電泳和等速提純電泳在分離純化蛋白質中的應用。結果發現,聚丙烯醯胺電泳的條帶解析度低,加樣量不高;等電聚焦電泳解析度最高,可以分離同種蛋白的亞成分,加樣量最小;等速提純電泳區帶解析度較高,可將樣品分成單一成分,加樣量最大。
   
   離子交換層析(Ion exchange chromatography,IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。離子交換層析中,基質由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的為陰離子交換樹脂;反之為陽離子交換樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。當蛋白質處於不同的pH值條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,被留在層析柱上,通過提高洗脫液中的鹽濃度,將吸附在層析柱上的蛋白質洗脫下來,其中結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。李全宏等[19]將離子交換層析應用於濃縮蘋果汁中蛋白質的提純。另外,離子交換層析還用於抗凝血蛋白的提取[7]。
   
   4. 利用對配體的特異親和力進行分離純化
   親和層析是利用蛋白質分子對其配體分子特有的識別能力(即生物學親和力)建立起來的一種有效的純化方法。它通常只需一步處理即可將目的蛋白質從復雜的混合物中分離出來,並且純度相當高。應用親和層析須了解純化物質的結構和生物學特性,以便設計出最好的分離條件。近年來,親和層析技術被廣泛應用於靶標蛋白尤其是疫苗的分離純化,特別是在融合蛋白的分離純化上,親和層析更是起到了舉足輕重的作用,因為融合蛋白具有特異性結合能力[20]。親和層析在基因工程亞單位疫苗的分離純化中應用也相當廣泛[21]。范繼業等[22]利用殼聚糖親和層析提取的抑肽酶比活達到71 428 BAEE·mg-1,純化回收率達到62·5%。該方法成本較低,吸附劑價格低廉、機械強度高、抗污染能力較強、非特異性吸附較小、可反復使用、適用性廣,產品質量穩定。

   
   

❺ 膜蛋白為什麼能停留在膜上

（三）膜蛋白
動物細胞主要由9種膜脂，而膜蛋白的種類繁多，多數膜蛋白分子數目較少，但卻賦予]細胞膜非常重要的生物學功能。

1、類型

根據膜蛋白分離的難易程度及其與脂分子的結合方式，膜蛋白可以分為兩類：膜周邊蛋白（peripheral proteins）或稱外在膜蛋白(extrinsic proteins)和膜內在蛋白(integral proteins)或稱整合膜蛋白。

膜周邊蛋白為水溶性蛋白，靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質分子或脂分子結合，因此只要改變溶液的離子強度甚至提高溫度就可以從膜上分離下來，膜結構並不被破壞。

膜內在蛋白與膜結合非常緊密，只有用去垢劑使膜崩解後才能分離出來。

2、膜內在蛋白與膜脂結合的方式

膜內在蛋白多數為跨膜蛋白（transmembrane proteins），也有些插入脂雙層中，它與膜結合的方式主要有三種：

（1）膜蛋白的跨膜結構域與脂雙層分子的疏水核心的相互作用。

（2）跨膜結構域兩端攜帶正電荷的氨基酸殘基，如精氨酸、賴氨酸等與磷脂分子帶負電的極性頭形成離子鍵，或帶負電的氨基酸殘基通過Ca2+、Mg2+等陽離子與帶負電的磷脂極性頭相互作用。

（3）某些膜蛋白在細胞質基質一側的半胱氨酸的殘基上共價結合脂肪酸分子，插入脂雙層之間，進一步加強膜蛋白與膜雙層的結合力，還有少數蛋白質與糖脂共價結合。

❻ 十二烷基磺酸鈉(SDS)和Triton X-100都是去垢劑，哪一種可用於分離有生物功能的膜蛋白

去垢劑可分為離子型和非離子型兩種。十二烷基磺酸鈉(SDS)是常用的離子型專去垢劑，它不僅可使細屬胞膜崩潰，並與膜蛋白的疏水部分結合使其分離，而且還破壞膜蛋白內部的非共價鍵，使蛋白變性，所以不宜用於分離有功能的膜蛋白。Triton X-100是溫和性去垢劑，它可以使膜脂溶解，又不使蛋白變性，可分離到有生物功能的膜蛋白。

❼ 用什麼方法可以分離膜蛋白，如何獲得有功能活性的膜蛋白

Ⅰ、（1）根據題干信息，「膜蛋白A能加快水通過細胞膜，而HgCl2對膜蛋白A的功能有抑製作用」，則該實驗的自變數有2個：膜蛋白的有無、HgCl2的有無，因此實驗的對照處理如下： ①甲組：缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母細胞若干． ②乙組：生理狀況相同的等量缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母細胞+注入控制膜蛋白A合成的有活性的mRNA（有膜蛋白）． ③丙組：乙組+HgCl2溶液（有膜蛋白和HgCl2）．（2）實驗的因變數是細胞水通透速率，把各組卵母細胞放入非洲爪蟾卵母細胞低滲溶液中，一段時間後，利用細胞水通透速率測量裝置測量細胞水通透速率． Ⅱ．「膜蛋白A能加快水通過細胞膜，而HgCl2對膜蛋白A有抑製作用」實驗結果記錄表：實驗組號水通透速率甲組（無膜蛋白A）慢乙組（有膜蛋白A）快丙組（有膜蛋白和HgCl2）較慢 Ⅲ、實驗結果說明：水通過細胞膜的方式是被動運輸（或簡單擴散和易化擴散）．故答案為： Ⅰ．（1）乙組：生理狀況相同的等量缺乏蛋白A的非洲爪蟾卵母細胞+注入控制膜蛋白A合成的有活性的mRNA．丙組：乙組+HgCl2溶液． 2．非洲爪蟾卵母細胞低滲溶液 Ⅱ．「膜蛋白A能加快水通過細胞膜，而HgCl2對膜蛋白A有抑製作用」實驗結果記錄表實驗組號水通透速率甲組慢乙組快丙組較慢 Ⅲ．被動運輸（或簡單擴散和易化擴散）

❽ 如何將膜上的蛋白從細胞膜上分離出來

分離細胞膜蛋白的方法：

1、冰上刮下細胞後將細胞溶於有蛋白酶抑制劑專的緩沖液屬 A 中，於室溫與液氮罐中反復凍融 2 次。

2、5000 轉 4 度離心，驅除核及未裂解的細胞。

3、取上清 12000 轉 4 度離心 10 分鍾取沉澱溶於有蛋白酶抑制劑的緩沖液 B 中。

4、12000 轉 4 度離心 10 分鍾取沉澱溶於有蛋白酶抑制劑的緩沖液 C 中提取後測蛋白濃度 ,SDS-PAGE 電泳，分裝後 -20 度保存備用。

buffer A : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4)

buffer B : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4) 1mM EGTA

buffer C : 0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf,50mMTris-cl(PH=7.0),

❾ 熱水壺是不銹鋼的我加了除垢劑，不銹鋼變了顏色。不銹鋼遇見酸不是會分離出重金屬，我擔心有毒。

酸性是不會分解不銹鋼的，不銹鋼分解必須要有溶解不銹鋼的溫度1000多度才會產生分解，內這些檸檬酸接觸不容銹鋼表面變色這個只是化學反應，不會分解不銹鋼的，用這個檸檬酸洗過以後最好再用清水多洗2次，用白酒或者酒精擦拭一下再重新煮水，這樣比較安全一些

❿ pierce膜蛋白提取試劑盒89826，提出蛋白後用BCA法測濃度說明書說要用透析法去除去污劑才能測濃度，是嗎

必須的，非離子表面活性劑會干擾BCA的測定結果。
具體的原因應該是非離子表面活性劑的存版在會權影響Cu和蛋白質的結合。
不過皮爾斯的MicroBCA據說不受非離子表面活性劑影響。
不過你的膜蛋白沒有去污劑好溶解嗎？