15g蒸餾水84g濾液

Ⅷ 如果在食用油工廠做化驗員，應做哪些指標的檢驗方法是什麼

常測指標
1、酸值
是中和1克油脂中的游離脂肪酸所需KOH的質量（mgkOH/g）,是油脂的精煉程度和品質好壞的重要標志之一。酸值高的油脂不宜儲存，也不宜食用。
2、過氧化值
氫過氧化物是油脂初期氧化程度的標志，是判斷油脂酸敗和酸敗程度的指標。氫過氧化物是油脂與空氣中的氧發生氧化作用所產生的，是油脂自動氧化的初級產物，具有高度活性，能夠迅速地繼續變化，分解為醛酮類和氧化物等致使油脂酸敗變質。氫過氧化物對人體健康有害，是致癌物質，過氧化值高的油脂不宜食用。
3、熔點
棕櫚油分提程度不同，熔點不同。毛棕櫚油熔點通常為35-37度，即33度棕櫚油，經過分提可以得到24度，44度，18度等不同熔點棕櫚油。
4、碘值
是油樣在規定的操作條件下於100克油脂發生加成反應所需要的碘的克數。油脂中不飽和脂肪酸含量越高、碘值越高。碘值在一定程度上反應了棕櫚油的熔點，碘值越高、熔點越低。
5、色澤
植物油通常是呈現淡黃色或淡綠色等不同的色澤，這是由於胡蘿卜素、葉綠素、葉黃素、維生素E的氧化物等脂溶性色素存在所致。不同油料、不同加工方法的油脂具有不同的色澤。

植物油檢測指標
主要的理化指標：
色澤
氣味、滋味
透明度
酸值
過氧化值
碘值
熔點
水分及揮發物
雜質

特殊的理化指標：
棕櫚油：
毛棕DOBI的測定
大豆油：
皂化值
不皂化物
含磷
殘皂量
皂腳
植物油色澤鑒定法
1、取澄清（或過濾）的試樣注入比色槽中，達到距離比色槽口約5mm處
2、將比色槽置於比色計中
3、按規定固定黃色玻片色值
4、打開光源，移動紅色片調色，直至玻片色與油樣色完全相同為止
5、記下黃、紅玻片號碼的各自數值，即為被測油樣的色澤
6、同時註明比色槽厚度（小槽25.4mm即1英寸，大槽133.4mm即51/4英寸）。
注意事項：
1.觀色之前須保證油樣是澄清透明的；
2.精煉棕櫚油和一級大豆油的色澤一般呈10倍關
系，即「黃Y」是「紅R」的10倍；
3.精煉椰子油的色澤，「黃」與「紅」一般不呈10倍關
系；
4.毛豆油觀色時，黃一般可固定在35或30，毛棕櫚
油觀色時，黃一般可固定在70或75。

植物油氣味、滋味檢測方法
1.取少量試樣於燒杯中
2.在電爐上加熱到80度左右。
3.取下，邊攪拌邊聞氣味，同時取適量稍冷後嘗辨滋味
4.凡具有該油固有的氣味和滋味，無異味的為合格
5.不合格的應註明異味情況

1.植物油透明度檢測方法
2.取一定量的試樣於比色管中
3.移至光亮處或在比色管後襯以白紙
4.觀察透明程度，記錄觀察結果
結果表示
以透明，微濁，混濁表示

酸值的檢測
1.稱取均勻試樣W於250ml錐形瓶中；
2.加入30~50ml中性異丙醇，溶解油樣，加3滴酚酞指示劑；
3.用0.05mol/L KOH標准溶液滴定至出現粉紅色，30秒內不消失。

油品 樣品稱重量，W
精煉油 約15g~20g
毛油 約5g~10g
脂肪酸 約0.2g~0.5g

過氧化值的檢測
1.稱取混勻油樣W於250ml碘價瓶中；
2.加入氯仿－冰乙酸（2:3）混合液約30ml溶解試樣，加1ml飽和碘化鉀溶液，加塞，搖勻，置暗3.處靜置3分鍾；
4.加水50ml，搖勻後，用0.01ml/L硫代硫酸鈉標准溶液滴定至淡黃色時，加澱粉指示劑1ml，繼續滴定至藍色消失為止。
同樣步驟重復空白試驗

估計過氧化值， 樣品重量
≤1 10g~15g
1~6 5g~10g
≥6 1g~5g

碘值的測定
操作步驟
1.稱取乾燥過濾的試樣W（准至0.0002g，稱樣量參見下表）注入潔凈乾燥的500ml碘價瓶中；
2.加20ml氯仿溶解試樣，准確移入25ml韋氏液，加入10ml2.5%乙酸汞溶液，立即加塞，混勻後，在20±5℃條件下，置暗處靜置3min；
3.到時立即加入20ml15%碘化鉀溶液和100ml蒸餾水，用0.1mol/L硫代硫酸鈉溶液滴定溶液呈淺黃色時，加入1ml澱粉指示劑；
4.繼續滴定至紫色消失為止，同時做空白試驗。

碘值（gI/100g） 樣品重量（g） 檢測結果允許差
10左右（如椰子油） 1.0000g-1.5000g 0.2
30~50（如硬44棕櫚油） 0.5000g-0.6000g 0.3
50~65左右 （24棕櫚油） 0.4000g-0.5000g 0.3
80~90（如橄欖油、茶籽油） 0.3000g-0.3500g
0.5
100左右（如花生油） 0.2500g-0.3000g
0.5
130左右（大豆油、葵花子油）0.2000g-0.2500g
0.5
180左右（亞麻籽油） 0.1000g-0.1500g 0.8

棕櫚油不同品種碘值
油品品種 碘值（gI/100g）
F5度棕櫚油 ≥68.5
F8度棕櫚油（散裝用） ≥65-66
F8度棕櫚油（小包裝用） ≥66
F10度棕櫚油 ≥64.5
F12度棕櫚油 ≥63
F14度棕櫚油 ≥63
F18度棕櫚油 ≥58.5-59
F23度棕櫚油 ≥50-50.5
F24度棕櫚油 ≥51
IV70棕櫚油 ≥68.3-70

不同油品碘值國家標准
油品品種 碘值（gI/100g）
大豆油 124-139
椰子油 7.0-12.5
花生油 86-107
葵花籽油 118-141
菜籽油 94-126
棉籽油 100-115
米糠油 92-115
油茶籽油 83-89
玉米油 107-135
芝麻油 104-120

滑動熔點測定法
1、樣品前處理：將清潔乾燥的樣品加熱到高於其熔點10℃~20℃，維持15分鍾；
2、取潔凈乾燥的毛細玻管3支，分別吸取試樣達10mm高度（不得過長或過短）；
3、用冰塊使樣品速凍；
4、放入燒杯中，在冰箱的冷凍室（-10℃~-15℃）中，放置1-2小時（具體參照下表）；
5、到時取出，用橡皮筋將3隻管緊扎在溫度計上，使試樣與水銀球相平，將試樣和溫度計懸掛在事先備好的燒杯水浴中（水浴的初始溫度要求比試樣熔點低10~20℃），使水銀球浸入水中正中間；
6、將燒杯置於電加熱磁力攪拌器上加熱，同時開動攪拌；
7、控制水溫的上升速度，使其速度為每分鍾約2℃，試樣在熔化前發生軟化現象（半透明狀態，大約距離熔點8~10℃）時，控制水溫的上升速度，使其速度為每分鍾約0.5℃。
試樣熔點估計值(℃） 冷凍時間（hr） 水浴初始溫度(℃)
≤10 2 盡量接近0
10-18 2 2-4
22左右 2 10左右
30左右 1.5 15左右
35-40 0.5-1 20左右
50左右 0.5 25-30

水分及揮發物的檢測
1.用已恆重過的稱量皿，稱重記為W0；
2.取混勻試樣約10g（准確至0.0001g），記為W；
3.在105±2℃溫度下烘120min，取出在乾燥器中冷卻至室溫，稱重W1；
4.每個樣品均須做平行實驗。

注意
在烘箱中，稱量皿的蓋子要打開，否則水分不易揮發出去；
出烘箱之前，稱量皿的蓋子須蓋好，否則會發生倒吸現象，導致結果偏小甚至為負值。

油脂的附帶成份、品種很多，對油脂的質量有很大的影響，不利於儲存。主要可分為以下三類：
1、 不溶性固體雜質：包括泥沙、餅粕殘渣、金屬、纖維等固體雜質；還包括在精煉過程中形成的不溶性物質，如油腳、皂腳、白土、催化劑及冷卻結晶而析出的蠟脂等。
2、 膠溶性雜質：主要是脂肪酸、甾醇、生育酚、磷脂、色素、維生素、棉酚、蠟、谷維素、黃麴黴毒素等。
3、 揮發性雜質：包括水分、醇類、烴類溶劑、臭味組分等。 \

雜質的檢測
1.稱量皿及定量濾紙恆重，記為W0。
3.連接真空裝置，將恆重的濾紙放在不銹鋼漏鬥上；
3.稱取混勻試樣10~20g（W）於燒杯中，加入20~25ml石油醚攪拌使試樣溶解，傾入漏斗中；
4.用石油醚將燒杯中的雜質干凈地洗入漏斗內，再用石油醚約30ml分三次抽洗雜質，（每次須完全抽干）洗至無油跡為止；
5.將帶雜質的濾紙小心取下，放入恆重的稱量皿中送入105±2℃烘箱中烘1小時，取出放在乾燥器中冷卻至室溫後稱重，記為W1。

毛棕DOBI的測定
1.將待測油樣充分熔化並攪拌均勻後，稱取0.1g
（精確至0.0001g）於25ml容量瓶中，用正己烷溶解並稀釋定容。將該溶液倒入石英比色皿中，以純的正己烷作為參比液，在分光光度計中分別檢測其在446nm和269nm處的吸光度。
2.如果溶液濃度仍較大，則可用移液管移取2ml溶液置於10ml容量瓶中，稀釋並定容。再以正己烷作為參比液，在分光光度計中分別檢測其在446nm和269nm處的吸光度。如果DOBI過高，則可進一步稀釋後檢測。

皂化值的檢測
1.稱取混勻試樣1g（W，准確至0.001g）於250ml蒸餾燒瓶中；
2.用移液管准確添加25ml KOH－甲醇，加3粒沸石，搖動；
3.同時准備空白；
4.連接迴流冷凝管，煮沸迴流2小時，至溶液不分層；
5.用10ml中性甲醇沖洗迴流冷凝管；
6.添加20ml（空白40ml）中性甲醇，趁熱用標准溶液HCL滴定至紅色消失。

不皂化物的檢測
1.稱取混勻試樣5g（W，准確至0.001g）於250ml蒸餾燒瓶中；
2.加50ml KOH乙醇溶液幾粒沸石，連接冷凝管迴流1小時至澄清透明後用100ml水，從頂部加入旋搖；
3.冷卻後轉移至分液漏斗中，用100ml乙醚沖洗燒瓶，蓋塞好振搖1min，靜置分層，將下層皂化4.液放入第二隻分液漏斗中；
5.用100ml乙醚再提取2次（相同方法）；
6.合並乙醚提取液，加水40ml輕輕旋搖；
7.用40ml 0.5mol/L氫氧化鉀溶液和40ml水洗兩次；
8.用水洗至加酚酞指示劑時不顯紅色為止；
9.將乙醚液轉至恆重的燒瓶中W1；
10.用索氏抽提器回收乙醚，將殘留物於105℃烘箱中1小時；
11.冷卻稱重，直至恆重為止；
12.將恆重後的殘留物溶於30ml中性異丙醇中，用0.05mol/L KOH滴定至粉紅色。

磷含量的檢測
1.稱取10g試樣（准至0.001g）於坩堝中（如果試樣磷脂含
量比較大如毛豆油、 毛菜油稱樣量要縮小，如稱5g），加氧
化鋅0.5g；
2.在電爐上加熱炭化後(炭化必須完全，無大量黑煙產生為
止) ，送入500~600℃的馬弗爐中灼燒灰化2小時，至灰白
色；
3.冷卻至室溫後加入熱鹽酸（1:1）10ml熔解灰份，並加熱微
沸5min；
4.將溶解液過濾移入100ml的容量瓶中，用熱蒸餾水沖洗坩
堝和濾紙，冷卻濾液至室溫；
5.用50% KOH中和至出現渾濁，緩慢滴加鹽酸（1:1）使氧
化鋅沉澱全部溶解後， 再滴2滴；
6.冷卻至室溫，用蒸餾水稀釋至刻度搖勻，為處理液；
7.吸取10ml處理液於50ml比色管中；
8.加入0.015%硫酸聯氨8.0ml，加2.0ml鉬酸鈉稀硫酸溶液，
加塞，搖勻；
9.置於沸騰的水浴中加熱10min,取出冷卻至室溫；
10.用水稀釋至50ml充分搖勻；
11.同時做空白試驗（除了不含試樣外，其他部分相同）；
12.10min後，在650nm下用1cm比色槽比色，電腦自動測定
含磷量P

殘皂量的檢測
1.稱取10g~20g左右（准確至0.01g）試樣加入50ml溴酚藍丙酮，振盪，若油中有皂則上層液為藍色或綠色
2.用0.01mol/L鹽酸標准溶液滴定至黃色，30s不變藍色或綠色為止。

皂腳的檢測
1、取一恆重過的燒杯（100ml）稱重，W0；
2、去皮後，稱取混勻試樣約1-3g（依據試樣稠度來估計，稀的皂腳稱樣量大些）於燒杯中，稱重W；
3、放入烘箱中烘乾水份，約須2小時；
4、取出，於乾燥器中冷卻至室溫後，稱重W1；
5、從乾燥器中取一恆重過的抽提瓶，稱重W2；
6、加入適量丙酮浸泡，用玻璃棒攪拌溶解，將萃取液濾入抽提瓶中；
7、重復步驟6，直至丙酮萃取液基本呈無色；
8、將盛放丙酮萃取液的抽提瓶安裝到抽提裝置上，在80℃水浴中（水浴
鍋 提前適當時間打開升溫）進行丙酮回收；
9、丙酮回收基本干凈後，取出抽提瓶，關閉水浴鍋；
10、用干凈抹布擦除抽提外壁所附雜質後，放入105±1℃烘箱，烘1小
時後取出放在乾燥器中冷卻。
11、冷至室溫後，取出稱重W3。

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Ⅸ 取精製後的粗鹽少許(約1g)放入試管里,加入蒸餾水6∼8ml振盪溶解實��

純化
粗鹽，實驗步驟：溶解，過濾，蒸發
2玻璃棒效果：當
（版1）中溶解權並攪拌以加速溶解。當比索（2）過濾，排水。當比索（3）蒸發，攪拌使其受熱均勻。

三，過濾幾點需要注意的：一，二低，三經
4，點蒸發注意：玻璃棒攪拌，加熱蒸發濾液。

取少量粗鹽放入燒杯中，加水，用玻璃棒攪拌，粗鹽，直到渾濁的海水後完全溶解已經沿著玻璃棒放入過濾器安裝，然後將得到的濾液在蒸發皿中加熱，出現了大量的固體，向濾液，停止加熱。

Ⅹ 測定糖的含量的方法有哪些

糖的測定方法
一般有四種方法：
1、 直接滴定法。

原理為 糖還原天藍色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響。

2、 高錳酸鉀滴定法。

所用原理同直接滴定法。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響，過程較為復雜，誤差大。

3、硫酸苯酚法。

糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。

缺點：如果水樣呈橙紅色（大部分水樣為黃色），會對比色法造成較大的干擾。

4、蒽酮法

糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。

缺點：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。

綜合比較；採用蒽酮法能將最為准確地測定尾水中糖的含量。

（一） 直接滴定法

Ⅰ、原理

v 一定量的鹼性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍色的氫氧化銅沉澱，這種沉澱很快與酒石酸鈉反應，生成深藍色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡合物。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用標液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉澱，待二價銅全部被還原後，稍過量的還原糖把次甲基藍還原，溶液由藍色變為無色，即為滴定終點。根據樣液消耗量可計算出還原糖含量。
樣品經除去蛋白質後，在加熱條件下，以次甲基藍做指示劑，滴定標定過的鹼性酒石酸銅溶液（用還原糖標准溶液標定鹼性酒石酸銅溶液），根據樣品溶液消耗體積計算還原糖量。

Ⅱ、儀器和試劑
1．儀器
酸式滴定管，可調電爐（帶石棉板），250ml容量瓶。
2．試劑

1. 鹽酸。

2. 鹼性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基藍，溶於水中並稀釋至1000mL。

3. 鹼性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉，溶於水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解後，用水稀釋至1000 ml，貯存於橡膠塞玻璃瓶內。

4. 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3ml冰乙酸，加水溶解並稀釋至100ml。

5. 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解並稀釋至100ml。

6. 葡萄糖標准溶液：准確稱取1.0000g經過96℃±2℃乾燥2h的純葡萄糖，加水溶解後加入5ml鹽酸，並以水稀釋至1000L。此溶液相當於1mg/ml葡萄糖（註：加鹽酸的目的是防腐，標准溶液也可用飽和苯甲酸溶液配製）。

7. 果糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的果糖。

8. 乳糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的乳糖。

9. 轉化糖標准溶液：准確稱取1.0526g純蔗糖，用100ml水溶解，置於具塞三角瓶中加5ml鹽酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加熱15min，放置至室溫定容至1000ml，每ml標准溶液相當於1.0mg轉化糖。

Ⅲ、實驗步驟
1．樣品處理
⑴ 乳類、乳製品及含蛋白質的食品：稱取約2.50～5.00g固體樣品（吸取25～50ml液體樣品），置於250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質、鞣質、樹脂等，使它們形成沉澱，經過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結合，形成沉澱並過濾。）

⑵ 酒精性飲料：吸取100ml樣品，置於蒸發皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積1/4後，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。

⑶ 含多量澱粉的食品：稱取10.00～20.00g樣品，置於250ml容量瓶中，加200ml水，在45℃水浴中加熱1h，並時時振搖（注意：此步驟是使還原糖溶於水中，切忌溫度過高，因為澱粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結果。）。冷後加水至刻度，混勻，靜置，沉澱。吸取200ml上清液於另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉澱，靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。

⑷ 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100ml樣品置於蒸發皿中，在水浴上除去二氧化碳後，移入250ml容量瓶中，並用水洗滌蒸發皿，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻後備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應接近於葡萄糖標准液的濃度。）

2. 標定鹼性酒石酸銅溶液：吸取5.0ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0ml乙液，置於150ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉澱，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉澱重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9 ml葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液，直至溶液蘭色剛好褪去為終點，記錄消耗的葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計算每10 ml（甲、乙液各5 ml）鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量或其他還原糖的質量（mg）。（注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態，並且避免滴定時間過長。）

3. 樣品溶液預測：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色褪去，出現亮黃色為終點。如果樣品液顏色較深，滴定終點則為蘭色褪去出現明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺後復又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 當試樣溶液中還原糖濃度過高時應適當稀釋，再進行正式測定，使每次滴定消耗試樣溶液的體積控制在與標定鹼性酒石酸酮溶液時所消耗的還原糖標准溶液的體積相近，約在10ml左右。當濃度過低時則採取直接加入10ml樣品溶液，免去加水10ml，再用還原糖標准溶液滴定至終點，記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖標准溶液體積之差相當於10ml試樣溶液中所含還原糖的量。

4. 樣品溶液測定：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min內加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預測體積少1 ml的樣品溶液，然後趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定直至終點。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。

5. 計算
樣品中還原糖的含量（以某種還原糖計）按下式計算。
X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100
式中：X--樣品中還原糖的含量(以某種還原糖計)，單位 g/100g；
A—鹼性酒石酸銅溶液（甲、乙液各半）相當於某種還原糖的質量，單位 mg；
m--樣品質量，單位 g；
V--測定時平均消耗樣品溶液的體積，單位 ml；
計算結果保留小數點後一位。

注意：

滴定結束，錐形瓶離開熱源後，由於空氣中氧的氧化，使溶液又重新變藍，此時不應再滴定。

（二）高錳酸鉀滴定法

v 原理 將樣液與一定量過量的鹼性酒石酸銅溶液反應，還原糖將二價銅還原為氧化亞銅，經過濾，得到氧化亞銅沉澱，加入過量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標准溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀溶液消耗量可計算出氧化亞銅的量，再從檢索表中查出氧化亞銅量相當的還原糖量，即可計算出樣品中還原糖含量。

（三）硫酸苯酚法

Ⅰ、原理

糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。

多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。

Ⅱ、試劑

1． 濃硫酸：分析純，95.5%

2． 80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。

3． 6%苯酚：臨用前以80%苯酚配製。（每次測定均需現配）

4． 標准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。

5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。

6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。

7． 6mol/L 氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶於500ml水。

8． 6mol/L 鹽酸

Ⅲ、操作。

1．製作標准曲線：准確稱取標准葡聚糖（或葡萄糖）20mg於500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數，縱坐標為光密度值，得標准曲線。

2．樣品含量測定：

①取樣品1克（濕樣）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液於10毫升離心管中，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液，重復3次。最後一次將殘渣一起到入離心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。

②離心，轉速3000轉/分鍾，共三次。第一次15分鍾，取上清液。後兩次各5分鍾取上清液到25毫升錐形比色管中。最後濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時，每次取上清液時應過濾。因為其脂肪含量大容易夾帶殘渣。）

③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 鹽酸之後搖勻，在96℃水浴鍋中水浴2小時。

④定容取樣。水浴後，用流水冷卻後加入2毫升6mol/L 氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的樣品液，以蒸餾補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度。每次測定取雙樣對照。以標准曲線計算多糖含量。

Ⅳ、注意

（1）此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅製作一條標准曲線，顏色持久。

（2）製作標准線宜用相應的標准多糖，如用葡萄糖，應以校正系數0.9校正μg數。

（3）對雜多糖，分析結果可根據各單糖的組成比及主要組分單糖的標准曲線的校正系數加以校正計算。

（4）測定時根據光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小於0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大於0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。

（四）蒽酮法

Ⅰ、實驗原理

糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。

該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖和己糖，而且可以測所有的寡糖類和多糖類，其中包括澱粉、纖維素等（因反應液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發生反應。所以，用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。

Ⅱ、試劑：

蒽酮試劑，0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%濃硫酸中，冰箱保存；

Ⅲ、方法：

樣品2.0 mL加5.0 mL蒽酮試劑，混勻，然後水浴煮沸10 min，取出冷卻至室溫，在620 nm處測定其吸光度，根據標准曲線計算水樣中糖的濃度。（標線以葡萄糖為標樣）