⑴ 急求：离子交换柱层析分离氨基酸的讲义
一、目的
学习用阳离子交换树脂柱分离氦基酸的操作方法和基本原理.
二、原理
各种氨基酸分子的结构不同,在同一PH时与离子交换树脂的亲和力有差异,因此可依亲和力从小到大的顺序被洗脱液洗脱下来,达到分离的效果.
三、器材
1、20cmX 1cm层析管 2、试管
3、吸管． 4、恒压洗脱瓶
5、部分收集器 6、搪磁杯
7、电炉 8、分光光度计
四、试剂和材料
1、．苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸 lx 8,l00一200目,可用上海华东化工学院产品）
2 、2 mol／L盐酸溶液
3、2mol／L氢氧化钠溶液
4、标准氨基酸溶液 天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸均配制成 2 mg／mL的0.1M盐酸溶液.
5、混合氢基酸溶液将上述天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸溶液按1：2．5：10的比例混合.
6、柠檬酸－氢氧化钠一盐酸冲液（pH5.8）,钠离子浓度0 .45M）
取柠檬酸（C6O7H8.H20 ）14.25g、氢氧化钠9.30g和 浓盐酸 5．25 mL溶于少量水后,定容至 500 mL,冰箱保存.
7、显色剂 2 g水合茚三酮溶于 75mL乙二醇单甲醚中．加水至 100 mL.
8、50%乙醇水溶液
五、操作
1、层析柱的准备：将强酸型阳离子交换树脂用氢氧化钠处理成Na+型后洗至中性（处理方法见第三篇实验十二）．搅拌一小时后装成一个直径1cm．高 16～18 cm的层析柱.
2、氨基酸的洗脱：用P H5.8的柠檬酸缓冲液流洗平衡交换住（装置如图）.调节流速为 0.5 mL／min,流出液达床体积的4倍时即可上样.由柱上端仔细加人氨基酸混合液0．25—0．5 mL,同时开始收集流出液.当样品液弯月面靠近树脂顶端时,即刻加入0.5 mL拧檬酸缓冲液冲洗加样品处.待缓冲液弯月面靠近树脂顶端时.再加入0．5 mL缓冲液.如此重复两次,然后用滴管小心注入柠檬酸缓冲液（切勿搅动床面）,并将柱与洗脱瓶和部分收集器相连.开始用试管收集洗脱液,每管收集lmL．共收集60一80管.
3、氨基酸的鉴定：向各管收集液中加lmL水合茚三酮显色剂并混匀,在沸水浴中淮确加热15分钟后冷却至室温．再加15 mL的50％乙醇液.放置10分钟.以收集液第2管为空白,测定A570nm波长的光吸收值.以光吸收值为纵坐标,以柱洗脱体积为横坐标绘制洗脱曲线.以已知3种氨基酸的纯溶液为样品,按上述方法和条件分别操作,将得到的洗脱曲线与混合氨基酸的洗脱曲线对照．可确定3个峰的大致位置及各蜂为何种氨基酸.
⑵ 离子交换柱层析原理是什么
离子在离子交换柱上的移动速度受其半径和电荷的影响，这决定了它们在柱内的行为。具体来说，离子的大小和电荷的强度决定了它们与固定相的结合力和解离速度。较大的离子或电荷较高的离子通常与固定相的结合力更强，移动速度较慢；相反，较小的离子或电荷较低的离子结合力较弱，移动速度较快。
离子交换柱层析利用的是离子间的这种差异，通过特定的固定相和流动相的选择，可以有效地分离混合物中的不同离子。固定相通常由带有特定电荷的树脂或纤维素组成，能够与流动相中的离子发生可逆性的结合。当混合物通过柱子时，不同离子与固定相的结合力不同，从而导致它们在柱内的移动速度不同。
为了提高分离效果，实验人员可以调整流动相的pH值或离子强度，以改变离子的电荷状态，进而影响它们与固定相的结合。此外，还可以通过改变固定相的类型，如使用不同基质或带有不同电荷的树脂，来获得更好的分离效果。
离子交换柱层析广泛应用于生物化学、药物学、环境分析等领域。例如，在生物化学中，它可以用于蛋白质和核酸的纯化；在药物学中，它有助于新药化合物的筛选；在环境分析中，则可用于检测水和土壤中的重金属离子。通过精确控制离子交换柱的条件，可以实现对复杂混合物中微量成分的有效分离。
⑶ 多糖分离纯化—离子交换层析和柱层析
多糖，与蛋白质一样，对生命过程起着关键作用，其复杂结构直接决定了其特性和功能。要深入理解多糖，分离纯化步骤至关重要。其中，离子交换层析和凝胶层析是常用的手段。
离子交换层析在多糖纯化中应用广泛，其根据多糖特性，选择合适的阳离子、阴离子或硼砂交换剂，如DEAE cellulose、DEAE Sephadex（葡聚糖）、DEAE Sepharose（琼脂糖）系列。以DEAE cellulose-52为例，它作为阴离子交换柱，其填料二乙氨乙基纤维素带有正电荷，能有效分离中性和酸性多糖，如果胶，通过盐溶液洗脱，中性糖先被洗脱，阴离子多糖随后。通过检测洗脱液糖含量，形成洗脱曲线，实现不同多糖的分离。
相比之下，凝胶层析则侧重于分子量的分离。其原理是利用分子筛特性，大分子先流出，小分子后流出，如Sephadex G系列填料，如G-15、G-25用于寡糖分离，G-100和G-200则适用于大分子多糖。通过观察洗脱曲线，可以精确收集不同分子量的样品。
⑷ 离子交换层析分离两性化合物的原理
离子交换层析分离两性化合物的原理介绍如下：离子交换层析法（ion exchange chromatography，简称IEC）是从复杂的混合物中，分离性质相似大分子的方法之一，依据的原理是物质的酸碱性、极性，也就是所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能含雹依次从层析柱中分离出来。离子交换层析法大致分为5个步骤：
1. 离子扩散到树脂表面。
2. 离子通过树脂扩散到交换位置。
3. 在交换位置进行离子交换；被交换的分子所带电荷愈多，它与树脂的结合愈紧密，也就愈不容易被其它离子取代。
4. 被交换的离子扩散到树脂表面。
5. 冲洗液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中。
离子交换树脂的交换反应是可逆的，遵循化学平衡的规律。定量的混合物通过管柱时，离子不断被交换，浓度逐渐降低，几乎全部都能被吸附在树脂上；在冲洗的过程中，由于连续添加新的交换溶液，所以会朝正反应方向移动，因而可以把树脂上的离子冲洗下来。
如果被纯化的物质是氨基酸类的分子，则分子上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值。所以当溶液的pH值较低，氨基酸分子带正电荷，它将结合到强酸性的阳离子交换树脂上；随着通过的缓冲液pH逐渐增加，氨基酸将逐渐失去正电荷，结合力减弱，最后被洗下来。由于不同的氨基酸等电点不同，这些氨基酸将依次被洗出，最先被洗出的是酸性氨基酸，如 apartic acid 和 glutamic acid（在约pH 3~4时），随后是中性氨基酸，如glycine和alanine。碱性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的缓冲液中仍带有正电荷，因此这些在约pH值清大高达10~11时才出现。