① 离子交换柱层析能分离纯化蔗糖酶的主要依据是什么
DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素,是阴离子交换剂。
其原理基于离子交换层析:离版子交换层析中,基质是由带权有电荷的树脂或纤维素组成。
由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。
② 酶分离纯化离子交换柱预装柱怎么使用
如果不限定纯化方法,可以考虑亲和层析或离子交换,但根据你问题的意思,是内选定离子交换。
此时容就要考虑你蛋白的等电点了,如果等电点在你稳定pH之上,就用阳离子交换柱:
设计阳离子交换层析:将你的样品置换到你所指的稳定pH的running buffer。同时装柱,平衡,然后上样,平衡,洗脱(因为你的pH不稳定,建议盐洗脱),收峰。得你的蛋白;
如果你的等电点在稳定pH之下,就用阴离子交换柱,其步骤如上,只是改变柱子类型。
③ 在生化血清γ-球蛋白的分离纯化实验中,如果用阳离子交换柱,该怎么操作
缓冲液改成酸性的 而且要根据不同的pI进行