1. 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办
1、选择合抄适的超滤管,主要考虑袭MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
2. 如何检测超滤管的膜是否破损
可以根据产水的指标以及仪表参数变化来进行间接地判断,当然还有其他的方法,直接方法倒是没听说
3. 蛋白用超滤管浓缩容易沉淀怎么办
可能是抄这个蛋白的水溶性较差,也就是只能保持在一定浓度不能太高
另外就和这个蛋白的稳定性有关了,超滤时保持低温,体积缩小一点后就把滤液混匀避免局部浓度过高,选择更合适的缓冲液,添加一点甘油等小分子物质等都可以增加蛋白的稳定性。
4. 超滤离心管离心蛋白时离心干了怎么办
不建议用离心管离蛋白。最好还是膜处理比较好。
蛋白会粘附在渣里,只有用缓冲液再润洗咯。
5. 蛋白分子量为45KD应选用截留分子量30kd的超滤管合适吗
3KD指的是截留分子量截留分子量(MWCO:molecularweightcutoff)是使用分子量大小表示的超滤膜的截留性能,专又称作切割分子量。由属于直接测定超滤膜的孔径相当困难,所以使用已知分子量的球状物质进行测定。如膜对被截留物质的截留率大于90%时,就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能,称为膜的截留分子量。实际上,所使用的物质并非绝对的球形,由于试验条件的限制,所测定的截留率也有一定的误差,所以截留分子量不能绝对表示膜的分离性能。也就是说3KD分子量的产品有可能透过膜也有可能被膜拦截,一般来说希望3KD的产品全部透过,需要选择截留分子量更大的膜,比如5KD
6. 超滤离心管浓缩蛋白会损失吗
会有少量损失。取决于缓冲液,滤网的网眼大小和蛋白质的分子量
7. 超滤离心管能分离蛋白和聚乙二醇吗
超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的
聚乙二醇(PEG)是一种分子量内很小的试剂,而超滤管的容截留分子量一般是在3000道尔顿~10000道尔顿之间。绝大多数蛋白可以被截留在超滤管上层,而聚乙二醇可以穿透滤膜到达超滤管下层
所以超滤离心管可以用来分离蛋白和聚乙二醇的
8. 取50ul国产Bradford溶液 ,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白.
先回答你的问题:
Bradford溶液现在自己配也行(其实就是考马斯亮蓝溶液),不过买商品化的也很多,可以买Bradford蛋白定量试剂盒之类的东西。可以用这个试剂检测溶液中蛋白的浓度。如果要自己配,可以参考:http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超滤管的时候,保留在上方的是所需蛋白样品,超滤膜下方收集到的溶液就是流穿液。
这个意思应该是说,如果超滤完全保留蛋白,流穿液中理论是没有蛋白的,所以加入bradford溶液(棕红色)是不应该引起溶液变色的。但是如果有蛋白,会与Bradford溶液反应,变成蓝色。但是也有问题,超滤膜只能保留一定分子量以上的蛋白,如果截留分子量比较大,例如30K或者更大,有一些小的蛋白还是会进到流穿液的,会产生变色反应,而且肉眼观察变色,也没有办法给出具体蛋白的量,可能还是用仪器检测一下比较好。
9. 蛋白大小为27.8kd,应该用多大的超滤管截流
3KD指的是截留分子量
截留分子量(MWCO:molecular weight cutoff)是使用分子量大小表示的超滤膜的内截留性能,又称容作切割分子量。
由于直接测定超滤膜的孔径相当困难,所以使用已知分子量的球状物质进行测定。如膜对被截留物质的截留率大于90%时,就用被截留物质的分子量表示膜的截留性能,称为膜的截留分子量。实际上,所使用的物质并非绝对的球形,由于试验条件的限制,所测定的截留率也有一定的误差,所以截留分子量不能绝对表示膜的分离性能。也就是说3KD分子量的产品有可能透过膜也有可能被膜拦截,一般来说希望3KD的产品全部透过,需要选择截留分子量更大的膜,比如5KD
10. 使用超滤管浓缩蛋白需要再脱盐吗
是否脱盐,是根据您要达到的最终效果!