1. 用强酸性型阳离子树脂分离谷氨酸与赖氨酸谁先流出
谷氨酸先流出,根据离子交换层析的原理,强酸性的阳离子树脂有大量的强酸性基团,如磺酸基-SO3H,容易在溶液中离解出H+,故呈强酸性。树脂离解后,本体所含的负电基团,如SO3-,能吸附结合溶液中的其他阳离子。赖氨酸带正电,被其吸附,谷氨酸带负电,相互排斥,则随洗脱液先流出。
2. 求问怎么用离子交换树脂层析分离混合氨基酸
离子交换树脂作为一种合成高聚物,不溶于水,能吸水膨胀。高聚物分子由能电离的极性基团及非极性的树脂组成。极性基团上的离子能与溶液中的离子起交换作用,而非极性的树脂本身物性不变。通常离子交换树脂根据所带基团可分为强酸(=R=SO3H)、弱(=COOH)、强碱(=N+=R:)和弱碱(=NH2=NHR=NR2)。离子交换树脂适用于分离小分子物质,如氨基酸、腺苷、腺苷酸等。然而,对于生物大分子如蛋白质,则不太适宜,因为它们不能扩散到树脂的链状结构中。因此,如果需要分离生物大分子,可以选择多糖聚合物如纤维素、葡聚糖为载体的离子交换剂。
本次实验利用磺酸阳离子交换树脂(Dowex 50)分离混合氨基酸,包括酸性氨基酸(天冬氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸)和碱性氨基酸(赖氨酸)。在特定的pH条件下,这些氨基酸解离程度不同,通过调整脱液pH或离子强度可以实现分离。实验中所用到的材料包括层析柱、恒流泵、梯度混合器、试管及试管架、紫外分光光度计、2mol/L HCl、2mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、0.1mol/L NaOH、pH4.2的柠檬酸缓冲液、pH5的醋酸缓冲液、0.2%中性茚三酮溶液以及氨基酸混合液。
树脂处理步骤为:首先将树脂置于100ml烧杯中,加入25ml 12mol/L HCl搅拌2小时,倾弃酸液后用蒸馏水洗涤至中性。随后,再加入25ml 12mol/L NaOH搅拌2小时,倾弃碱液后用蒸馏水洗涤至中性。最后,将树脂悬浮于50ml pH4.2柠檬酸缓冲液中备用。
装柱步骤包括:取直径0.8cm~1.2cm、长度10cm~12cm的层析柱,底部垫玻璃棉或海绵圆垫,自顶部注入经处理的树脂悬浮液。关闭层柱出口,待树脂沉降后,放出过量溶液,再加入一些树脂,使树脂沉积至8cm~10cm高度即可。于柱子顶部继续加入pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤,确保流出液pH为4.2,关闭柱子出口,保持液面高出树脂表面1cm左右。
加样、洗脱及洗脱液收集步骤为:打开山口使缓冲液流出,待液面几乎平齐树脂表面时关闭出口。用长滴管将15滴氨基酸混合液直接加到树脂顶部,打开出口使其缓慢流入柱内。当液面刚平树脂表面时,加入0.1mol/L HCl 3ml,以10滴/分钟~12滴/分钟的流速洗脱,收集洗脱液,每管20滴,逐管收存。当HCl液面刚平树脂表面时,用1ml pH4.2柠檬酸缓冲液冲洗柱壁一次,接着用2ml pH4.2柠檬酸缓冲液洗脱,保持流速10滴/分钟~12滴/分钟并注意勿使树脂表面干燥。
在收集洗脱液的过程中,逐管用茚三酮检验氨基酸的洗脱情况,方法是:于各管洗脱液中加10滴pH5醋酸缓冲液和10滴中性茚三酮溶液,沸水浴中煮10分钟,如溶液呈紫蓝色,表示已有氨基酸洗脱下来。显色的深度可代表洗脱的氨基酸浓度,可比色测。在用pH4.2柠檬酸缓冲液把第二个氨基酸洗脱出来之后,再收集两管茚三酮反应阴性部分,关闭层析柱出口,将树脂顶部剩余的pH4.2柠檬酸缓冲液移去。于树脂顶部加入2ml 0.1mol/L NaOH,打开出口使其缓慢流入柱内,按上面步骤续用0.1mol/L NaOH洗脱并逐管收集,注意保持流速10滴/分钟~12滴/分钟,每管20滴。做洗脱液中氨基酸检验,在第三个氨基酸用0.1mol/L NaOH洗脱下来以后,再继续收集两管茚三酮反应阴性部分。
最后,以洗脱液管号为横坐标,洗脱液各管光密度(以水作空白,在570nm波长读取吸光度)或颜色深浅(以-,±,+,++...表示)为纵坐标作图,即可画出一条洗脱曲线。
实验注意事项包括:保持流速10滴/分钟~12滴/分钟,并注意勿使树脂表面干燥。在装柱时必须防止气泡、分层及柱子液面在树脂表面以下等现象发生。
3. 何谓氨基酸的离子交换本实验采用的离子交换剂属于哪一种
1、离子交换:是分析和制备样品混合物的液-固相层析方法,是基于待测物质的阳离子或阴离子和相对应的离子交换剂间的静电结合,即根据物质的酸碱性、极性等差异,通过离子间的吸附和脱吸附原理将电解质溶液各组分分开。
2、离子交换剂:本实验采用磺酸型阳离子交换树脂(732型)分离酸性氨基酸(天冬氨酸AsppI=2.97)和硷性氨基酸(赖氨酸LyspI=9.74)的混合液。
4. 离子交换层析分离氨基酸时,(苯乙烯磺酸钠)为什么组氨酸后洗脱出来而赖氨酸先洗脱出来
你们是不是这样分析的:组氨酸的PI是7.59,赖氨酸是9.74,这证明赖氨酸碱性更强,酸性更弱,而用H+洗脱时,先洗脱是应该是酸性弱的物质所以赖氨酸应该先洗脱下来?
或许可以这样解释:碱性氨基酸和阳离子交换树脂的结合是以氢离子为媒介,借助氢键的极性连接起来的。如果我没记错的话,伯氨基形成的氢键要比仲氨基形成的氢键强一些。
不管用是钠型的还是氢型的阳离子交换树脂,组氨酸和赖氨酸要与其吸附都必需通过氢离子。钠型的阳离子交换树脂并是不所有的磺酸基都与钠离子结合的。你用平衡常数算一下。而且,你用来溶解氨基酸的溶液是强碱性的吗?你的树脂是再生的吗?
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5. L-赖氨酸盐二盐酸盐合成方法
L赖氨酸盐二盐酸盐的合成方法主要有以下两种途径:
发酵法:
合成法结合光学拆分:
注意:以上方法仅供参考,实际操作中可能需要根据具体条件进行调整和优化。在合成过程中,还需要注意安全和环保问题,确保符合相关法规和标准。