『壹』 什么是超滤液
这个问题是这样的，你首先要知道渗透压分为晶体渗透压和胶体渗透压。在机回体内，晶体渗透答压是无机小分子维持的，它保持细胞内外的水平衡；胶体渗透压是血浆蛋白维持的，它维持血容量，即维持血液和组织液的平衡，所以营养不良等原因造成的胶体渗透压下降会使患者出现水肿。超滤液指的是血液第一次被肾小球滤过形成的液体，即原尿，之后超滤液在肾小管中会被稀释，其中的蛋白质、钙离子、水分、钠离子等绝大多数会重吸收，最终形成的才是排出体外的尿液，正常人的尿液中是检不出蛋白质和钙离子的！说了这么多，你可以知道超滤液中的蛋白质决定超滤液的胶体渗透压大小。
『贰』 电泳怎么跑酶或者说怎么跑蛋白
酶是蛋白质，蛋白质电泳可以用SDS-PAGE。电泳完后可以用考马斯亮蓝染色，也可以用银染，还可以用该酶抗体做western-blot。
『叁』 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml
离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
『肆』 sds page 跑蛋白的菌液处理（具体见说明，请勿复制）
marker看你买的是复什么样的，有的还是粉末制状呢，那个用水溶解后也需要加loading buffer沸水浴处理的。不过现在卖的很多都是那种直接点样的。说明书一般都有说的，一般10微升。
loading buffer就是上样缓冲液的英文。
另外，你的实验步骤里面，你打错了，第三步是10000rpm*2min，我非常肯定这个步骤一定是高速离心。
第一个步骤，我们一般取1ml菌液离心10000rpm*5min吧，具体记得不太清楚了。然后加loading buffer好像是120微升，1倍的，100微升也OK啦，然后沸水浴5到10分钟，然后高速离心，点样。为了避免串样，维持各点样孔之间的那种压力吧，具体怎么说我记不清楚了，反正就是防止别的孔的样品跑到空白泳道，很难看的。所以在空白处也点上1倍的loading buffer
你按照一个固定的数字做下来，点样的时候开始要摸索一下，多点几个样，看看点多少微升合适，因为你的菌液浓度什么的我们也不知道。你要有条件，可以给蛋白定量，因为跑电泳蛋白浓度过高会很难看，浓度低了看不清楚。
『伍』 350kDa的蛋白怎么跑western，求具体步骤
western和蛋白分子量无关，常规步骤就可以了。350KD算比较大的蛋白，你做PAGE的时候，把胶配稀点，8%的就可以了。转膜的时候，需要注意的是转的时间需要长一点，具体多长时间根据你的方法（干转还是湿转）和仪器品牌决定，这需要自己摸条件。
『陆』 SDS PAGE电泳跑蛋白胶跑成这个样子。。。求问原因。。电压150v时电流只有13mA...谢谢
看图中短板上的泡沫，应该没漏。这种哭脸形状，可能是电压过高，散热不及时造成的。如果电泳缓冲液用了很长时间，粘稠、起泡，也会使电流变小。
『柒』 跑sds-page前怎么处理蛋白样品
(1) SDS-PAGE凝胶抄配制 SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。(主要分为浓缩胶和分离胶，配方可自己上...
『捌』 350kDa的蛋白怎么跑western,
western和蛋白分子量无关,常规步骤就可以了.350KD算比较大的蛋白,你做PAGE的时候,把胶配稀点,8%的就可以专了.转膜的时候,需要属注意的是转的时间需要长一点,具体多长时间根据你的方法（干转还是湿转）和仪器品牌决定,这需要自己摸条件.
『玖』 跑蛋白的样品缓冲液每次都得现配吗
跑蛋白来是跑蛋白电泳（自SDS-PAGE）吗?
如果是SDS-PAGE的样品缓冲液（一般是用5×Loading buffer）的话
不需要现配的,可以配置完成后放置在-20度保存.只需要在使用前加入2-ME就可以了
如果是加好2-ME的Loading buffer可以在室温下保存1个月左右
『拾』 7KD蛋白怎么跑电泳才能看到
7KD蛋白怎么跑电泳才能看到
蛋白Marker：一般14 kD到200 kD 高分子量 低分子量 广谱 多肽 未染回色 预染 500UL 双色预染
一般不答知道跑的蛋白质分子量就用广谱的
蛋白质电泳方法：据带电量分离的等电点电泳(二维电泳)，根据分子量分的是用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（常用）
双向电泳(2DE)
原理：2DE就是第一向采用等电聚焦分离，第二向为SDS-PAGE分离。由于2DE是依据蛋白质的两种不同性质，即等电点和分子量进行分析，因此分辨率远高于其他任何一种单一的电泳方法，是目前分析混合蛋白质样品最有效的手段。