㈠ 用过的sephadex G-25层析柱和DEAE纤维素离子交换柱再生的方法为什么不一样
飞秒检测发现sephadex G-25层析柱填料是葡聚糖交联的凝胶柱，G-X, X：（1）交联度。X越小，交联度越大，网孔越小，适用于分离低分子量产品，反之亦然。（2）吸水量。为凝胶得水值的10倍.例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克.凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。若使用数次，就需要再生处理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素，是阴离子交换剂。基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤，其顺序为：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定（洗必泰），阳离子交换剂可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些产品建议用0.02%叠氮钠。
两种填料的抗酸碱性和抗腐蚀性能不同。
㈡ 设计一个利用阴离子交换柱纯化一个等电点为7.5的蛋白质的实验
既然是抄阴离子交换，就要让目标蛋白带负电，那么缓冲液PH就要大于等电点。缓冲体系的选择也很重要，一般用TRIS-HCl，特别是弱阴离子柱不可选用带负电强的磷酸盐缓冲液，否则上样液中被交换的将是磷酸根而不是目标蛋白。一般用NaCl平衡后上样进行离子交换，然后再用较强的阴离子洗脱。
㈢ 离子交换柱层析能分离纯化蔗糖酶的主要依据是什么
DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素，是阴离子交换剂。
其原理基于离子交换层析：离版子交换层析中，基质是由带权有电荷的树脂或纤维素组成。
由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。
㈣ DEAE-纤维素离子交换层析法可用于分离纯化蛋白质，主要是由于：
答案D
分配层析利用来样自品各组分在固定相和流动相间溶解度的不同(分配系数不同)来进行分离；吸附层析法利用吸附剂表面对样品组分吸附能力强弱不同来进行分离；亲和层析由于配体与待分离物质进行特异性结合；DEAE-纤维素离子交换层析法利用样品组分对离子交换剂静电力的差异来进行分离。
㈤ 用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液
也可以用AEC，主要以流穿模式做。sspxiaoji(站内联系TA)用阳离子交换柱，可以考虑pH6.0-7.0的缓冲液，因内为容大部分蛋白质的等电点在这附近，带电荷少，这样容易穿透除去其他杂蛋白。而你的目的蛋白PI在11，挂柱应该比较牢固。但是有个问题需要注意，PH离你的目标蛋白PI太远，有可能导致挂柱后难以洗脱。
㈥ 求助离子交换柱纯化蛋白的问题
离子交换树脂是一类具有离子交换功能的高分子材料。在溶液中它能将本身的离子与溶液中的同号离子进行交换。按交换基团性质的不同，离子交换树脂可分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类。
阳离子交换树脂大都含有磺酸基（—SO3H）、羧基（—COOH）或苯酚基（—C6H4OH）等酸性基团，其中的氢离子能与溶液中的金属离子或其他阳离子进行交换。例如苯乙烯和二乙烯苯的高聚物经磺化处理得到强酸性阳离子交换树脂，其结构式可简单表示为R—SO3H，式中R代表树脂母体，其交换原理为
2R—SO3H＋Ca2＋ （R—SO3）2Ca＋2H+
这也是硬水软化的原理。
阴离子交换树脂含有季胺基[-N（CH3）3OH]、胺基（—NH2）或亚胺基（—NH2）等碱性基团。它们在水中能生成OH-离子，可与各种阴离子起交换作用，其交换原理为
R—N（CH3）3OH＋Cl- R—N（CH3）3Cl＋OH-
由于离子交换作用是可逆的，因此用过的离子交换树脂一般用适当浓度的无机酸或碱进行洗涤，可恢复到原状态而重复使用，这一过程称为再生。阳离子交换树脂可用稀盐酸、稀硫酸等溶液淋洗；阴离子交换树脂可用氢氧化钠等溶液处理，进行再生。
离子交换树脂的用途很广，主要用于分离和提纯。例如用于硬水软化和制取去离子水、回收工业废水中的金属、分离稀有金属和贵金属、分离和提纯抗生素等。
㈦ 阴离子交换树脂纯化蛋白
太复杂了
㈧ 请以deae-c为例说明离子交换纤维素分离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些
源/目标IP地址（来第三层路自由），而且依据TCP/UDP(第四层) 应用端口号。第四层交换功能就象是虚IP，指向物理服务器。它所传输的业务服从各种各样的协议，有HTTP、FTP、NFS、Telnet或其他协议。这些业务在物理服务器基础上，需要复杂的载量平衡算法。
在IP世界，业务类型由终端TCP或UDP端口地址来决定，在第四层交换中的应用区间则由源端和终端IP地址、TCP和UDP
㈨ 采用离子交换柱纯化蛋白时，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定
离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力内不一样人达容到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团 的不溶性物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成，根据引入解离基团的不同，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各 不相同，亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加，而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化，需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白 的最恰当的离子强度液不一定一样，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱，纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值……
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离子交换介质 http://proct.bio1000.com/100025/